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1、中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 猪瘟牛睾丸细胞苗与兔体组织苗免疫效果的比较观察 陆芹章。，吴健敏2 ( 1 广西大学动科院，广西南宁，5 3 0 0 0 5 ；2 广西兽医研究所，广西南宁，5 3 0 0 0 1 ) 犊牛睾丸细胞培养冻干苗自7 0 年代问世以来，对猪瘟的预防起到了极其重要的作用。尽管我国目 前普遍使用这种疫苗，但许多地区仍发生不同程度的猪瘟疫苗免疫失败。对此有人认为是猪瘟流行株抗 原发生了变异，使疫苗不能很好的保护猪体抵抗强毒攻击；也有人认为是由猪瘟疫苗质量问题所导致。 为此，我们自1 9 9 8 年以来，在广西部分猪场开展猪瘟抗
2、体水平监测，结果发现猪瘟抗体水平普遍偏低， 部分猪场使用猪瘟细胞免疫后，仍发生猪瘟，造成仔猪成活率较低。为了给生产单位选择一种更有效的 疫苗或免疫方式。本试验选择猪瘟组织苗与细胞苗进行对比试验，并对这几年的猪瘟抗体水平进行统计 分析，以期找到消灭或减少猪瘟发生的方法，兹将试验及调查统计结果报告如下。 1 、材料与方法 1 1 疫苗：犊牛睾丸细胞培养冻千苗( 细胞苗) ：按部颁标准方法生产，由某公司提供。猪瘟兔化弱毒 兔体组织苗( 组织苗) ：由解放军军需大学提供。 1 2 诊断试剂：猪瘟正向间接血凝试剂，由兰州兽医研究所提供。 1 3 试验分组及免疫方法：选择位于南宁、贵港、扶绥三个地区有代表
3、性的三个大猪场( 这三个猪场 自1 9 9 8 年以来都有不同程度的猪瘟存在) ，每个猪场随机抽取2 0 头仔猪和2 0 头母猪，其中取1 0 头 母猪和1 0 头仔猪以细胞苗免疫，另1 0 母猪和1 0 头仔猪用组织苗免疫。免疫方法同为在母猪配种前5 天，用细胞茵4 头份( 即6 0 0 个兔感染量) ，组织苗1 头份( 即1 5 0 个兔感染量) 免疫母猪。母猪产 下的仔猪，分别在5 、1 0 、1 5 、2 5 日龄采血，分离血清检测抗体，母猪在断奶后采血检测。 1 4 抗体检测方法：按猪瘟正向间接血凝试剂盒说明书进行。 1 5 部分猪场猪瘟抗体水平的监测及仔猪成活率的统计：将9 8 年
4、以来用细胞苗免疫及2 0 0 0 年以来用 组织苗免疫的8 个猪场的抗体水平监测结果进行统计分析，并对南宁、贵港、扶绥三个地区猪场9 8 2 0 0 2 年问仔猪成活率进行统计比较，以求进一步从整体水平上比较细胞苗与组织苗的免疫效果。 2 、结果 2 1两种疫苗免疫后母猪的抗体水平与仔猪获得母源抗体水平的比较：我们将南宁、贵港、扶绥三个 猪场猪曾抗体水平检测结果汇总，结果见表1 。由表1 可见以4 头份细胞苗及l 头份组织苗免疫的母 猪，待仔猪断奶时，其抗体水平均在保护线之上( 1 ：1 6 ) ，其中以组织苗免疫产生的抗体水平较整齐， 1 ：6 4 ，1 ：1 2 8 各占7 0 ( 2 1
5、 3 0 ) 和2 6 7 ( 8 3 0 ) ，而细胞苗免疫产生的抗体水平不整齐，范围 从1 ：1 6 到1 ：2 5 6 。从仔猪获得的母源抗体水平来看，虽然5 日龄时无论细胞苗还是组织茵免疫的仔 猪其抗体水平均在保护线之上，但细胞苗免疫仔猪抗体水平在l ：3 2 以上占6 6 7 ，而组织苗免疫仔 猪能达到9 0 。由此可见，无论是母猪产生的主动免疫，还是仔猪获得的被动免疫水平，1 头份组织苗 的免疫效果均达到或超过4 头份细胞苗的免疫效果。 2 2 两种疫苗免疫后仔猪母源抗体水平消长规律的比较：为进一步比较两种疫苗免疫后，仔猪获得的 母源抗体的消长情况，我们将三个猪场抗体不在保护线(
6、1 ：8 ) 的结果进行统计，比较出每个年龄阶段 2 8 7 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 不在保护线的百比，结果见表2 。由表2 可以看出，以细胞苗免疫获得母源抗体的仔猪在1 0 日龄时， 其抗体水平就有1 3 不在保护线，至2 5 日龄已有5 3 不在保护线，而由组织苗免疫获得母抗的仔猪 在1 0 日龄时，抗体水平均在保护线之上，至2 5 日龄时仅有1 3 不在保护线，两者相比，经统计学分 析，差异极其显著( P t O 0 5 】。由此说明，由细胞苗免疫母猪后，仔猪获得的母源抗体水平下降速度快于 由组织苗免疫母猪获得的母源抗体水平，也就是说
7、由组织苗免疫获得的母源抗体水平维持时间较长。 表1 三个猪场抗体水平汇总比较表 苎堡塑堡 细胞苗组织苗 日龄1 ：81 ：1 6I ：3 21 ：6 41 ：1 2 81 ：2 5 61 ：8I ：1 61 ：3 21 ：6 41 ：1 2 8I ：2 5 6 1 01 2832 25 5 1 0 31 21 4151 96 61 5811 01 531 1 5 1 21 07131 11 33 2 0 2 5 1 61 2241 41 02 母猪 131 556l2 18 2 三个猪场不在保护线( 1 ：8 ) 的比较表 2 3 细胞苗与组织菌免疫后猪场整体抗体水平的监测结果 2 3 1 细
8、胞苗免疫的检测结果：9 8 9 9 年间，我们对广西8 个以细胞苗免疫猪场进行抗体监测，共抽 查了4 2 2 6 头仔猪和6 2 9 头母猪，由于数据较大，仅列表说明抗体水平不在保护线内的检测结果( 见表 3 ) 。由表3 看出，细胞苗免疫母猪后，仔猪所获得的母抗在1 4 1 6 日龄至少有1 3 以上不在保护线， 2 4 2 6 日龄少则2 3 ，多则4 0 不在保护线，而母猪在断奶后，有5 1 0 不在保护线。该检测结果与 这阶段猪场时常发生零星散在的猪瘟是吻合的。 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典置第十次学术研讨会论文集 表39 8 年来细胞苗免疫的抗体水平在1 ：8
9、 以下的检测结果 场别柳州扶绥北流南宁博自陆川玉林钦州 5 - - 6 0 8 6 0 2 1 0 2 1 9 。o 1 1 2 0 o 8 o 1 3 0 0 0 6 0 0 0 9 0 0 3 1 2 0 2 5 I 9 6I 9 1 I 4 1 0 9 3 3 8 93 3 2 6 7 3 s 1 2 0 4 1 1 1 3 0 0 7 3 1 1 2 0 2s 1 1 5 0 o6 2 2 3 1 6 1 4 1 6 1 5 z 0 31 3 1 8 1 2 81 4 2 0 1 3 81 45 1 8 1 2 61 42 2 2 1 2 61 74 3 0 1 3 02 3 2 8
10、1 3 8 2 0 2 2 1 3 61 6 1 9 2 1 2 6 1 2 71 9 3 5 1 6 72 0 2 8 1 4 81 8 9 2 6 1 6 01 7 3 3 7 1 6 72 21 2 8 1 5 0 1 87 3 2 1 6 0 2 0 3 0 1 4 82 0 2 4 2 62 6 8 7 2 9 2 3 9 8 2 3 2 5 1 2 02 0 2 3 9 92 3 3 0 1 2 1 2 4 3 5 1 2 02 9 4 0 1 3 0 3 0 4 1 1 s o2 7 3 母猪6 8 78 8 8 98 9 5 9 0 5 5 o 5 8 0 6 5 5 68 9
11、 8 7 6 l O5 6 8 1 7 4 8 9 0 8 9 拄：表示抗体水平在i ：8 以下头数被检测头教。 为效价在I ：8 以下占被检头数的百分比。 所抽查的母猪基本上是配种前免疫，断奶时采血检测。仔猪的抗体水平为母源抗体。 2 3 2 组织苗免疫的检测结果：2 0 0 0 2 0 0 2 年问，上述猪场改用细胞苗进行免疫，我们共抽检查了 1 4 5 1 头仔猪，3 1 8 头母猪，结果见表4 。由表4 看出，组织苗免疫后1 4 1 6 日龄阶段，最高只有1 3 不在保护线，低则只有2 不在保护线。2 4 2 6 日龄阶段，高则只有1 6 不在保护线，低则只有1 0 不在保护线。猪场整
12、体免疫效果明显优于细胞苗。 表4 组织苗免疫抗体水平在1 ：8 以下调查表 2 8 9 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 2 3 3 两种疫苗免疫抗体水平的比较：为了更直观看出细胞茁与组织苗之间差异，将两种疫苗的抗体 水平检测结果汇总比较( 见表5 ) 。由表5 看出，组织苗免疫后与细胞苗相比，1 4 1 6 日龄阶段，只有 6 7 不在保护线，而细胞苗有1 6 9 不在保护线。2 4 2 6 日龄阶段，组织苗有1 3 3 不在保护线，而 细胞苗却高达2 6 6 不在保护线。经统计学计算P 0 0 5 ，表明差异极其显著。 表5 细胞苗与组织苗抗体水
13、平比较 2 3 4 两种疫苗免疫猪场仔猪的成活率的统计结果：为了进一步观察两种苗的抗体水平与免疫保护的 关系，本试验调查了从1 9 9 8 年至2 0 0 2 年几个猪场仔猪的存活率。结果见表6 。从表中可见用细胞免 疫其仔猪成活率为8 3 8 7 ，而组织苗免疫的猪场仔猪成活率为9 1 一9 3 。仔猪的成活率提高了6 8 个百分点。应该指出的是在1 9 9 8 2 0 0 0 年间，这些猪场仔猪存活率较低，经调查发现这几个猪场在这 些年问主要使用细胞苗，检测猪瘟抗体水平，普遍偏低。大多数死亡的仔猪解剖有猪瘟的病变，取样做 R T P C R 检测，扩增出猪瘟病毒。由此推断，存活率低主要是猪
14、瘟造成的。在2 0 0 0 2 0 0 2 年改为组织 苗后，猪瘟病例逐步减少。存活率明显上升。 表6 细胞苗，组织苗免疫后的仔猪存活率 3 、讨论与小结 3 1 猪瘟免疫失败的原因很多，有认为流行毒株的基因已发生变异，向远离疫苗毒株的方向变化；也 有认为是免疫程序不当等种种原因。但由本试验的结果和几年来对几个大猪场的抗体水平的监测及部分 猪场的存活率的调查结果均表明，疫苗本身的问题也是我们必须考虑的因素之一。虽然细胞苗和组织苗 都是由中国株猪瘟兔化弱毒种毒制造产生的，只是生产工艺不同。但是在生产实际及许多试验中，常常 发现细胞苗仍有某些不如组织苗之处。究其原因除了病毒的毒价问题是应考率的问题
15、之外，组织苗中非 特异性的兔疫作用也可能是造成组织苗免疫力比细胞苗强的原因之一。我们知道，细胞苗是由种毒接种 犊牛睾丸细胞后收获而得，其本身仅有病毒的特异性免疫作用。而组织苗是用兔体( 牛体) 组织制成， 除具有病毒引起的特异性免疫外，这些组织中有许多是属于免疫器官，具有许多细胞因子，可起到非特 | ! ；日蕾牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 特的免疫增强作用。我们曾进行了这样的试验，用l 头份细胞苗与1 头份组织苗作对比试验，结果细胞 苗免疫效果明显不如组织苗，但若用正常的兔脾淋组织液稀释l 头份细胞苗再与1 头份组织苗做对比试 验，结果两者免疫效果相当。由此看来，组织苗中非特异的免疫增强作用是值得进一步研究的。必须指 出，细胞苗有许多优点，价廉、能长久保存、使用方便等。同时，在几年的调查中发现，一些条件较好， 管理水平较高的猪场，多年使用细胞苗是很难将疫情控制下来。因此，一个猪场应根据自己的实际情况 来合理的选用疫苗。 3 2 将试验所得数据与调查所得数据比较时发现：同是细胞苗，试验的数据显示，在2 5 日龄阶段有 5 0 不在保护线；但抗体水平调查数据显示，在2 4 - - 2 6E l 阶段只有2 6 不在保护线。之所以有这样 的差异，其原因可能是做试验时，母猪仅在配种前免疫一次，产前的仔猪直至2
