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1、 Prepared by/编制者：Reviewed by/审阅者：Authorized by/批准者：_Date/日期：Date/日期：Date/日期：修订表修订次数修订日期修订内容1.0目的1.1 通过倒平板培养的微生物检测方法来测试样品的微生物状况。1.2 通常情况下不建议用倒平板培养的方法，由于12ml的样品不能准确反映真实的微生物情况。要得到较准确的结果，含菌量必须相对较高(大于30/ml)。然而，对于无法使用过滤法的样品，如果汁或含果汁饮料，茶饮料等，便需要使用此方法。1.3 对于无菌产品，即使用倒平板法，也建议直接用原浆，而不必稀释。2.0 范围适用于果汁或含果汁饮料、咖啡，茶饮料
2、等产品的细菌总数和酵母菌、霉菌的测定，以及净室内空气的微生物测试。3.0 职责微生物品控员负责本文件的执行；领班负责监督本文件的有效执行。4.0 定义无5.0 程序5.1 培养介质的准备所有培养剂必须根据制造商的说明进行制备和灭菌。它们对热很敏感，所以不能过热。培养剂应装入200300ml的瓶内进行灭菌。容器中至少保留15的空间。各种培养介质的配制与灭菌方法参见附表1。5.2 培养皿准备5.2.1 将烘干后的平皿装入消毒筒内进行干热灭菌，冷却备用。菌落计数报 告检样作几个适当倍数的稀释液选择23个适宜稀释度各以1ml之量加入灭菌平皿内每皿内加入适量培养基5.2.2 按测试内容及测试样品数量准备
3、好平板，另外每个测试项目加一个平板作对照试 验。5.3 检验程序流程图: 361 242h或482h5.4 操作步骤5.4.1 检样稀释及培养5.4.1.1 以无菌操作，将检样25g或25ml剪碎放于含有225ml生理盐水的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇作成1:10的均匀稀释液。5.4.1.2 用1ml灭菌吸管吸到1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管混合均匀，作成1:100的稀释液。5.4.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀 释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。5.4
4、.1.4 由于本方法所适用的样品均要求无菌，因此只选择1:10和1:100两个稀释度， 分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿(已按待测样品的类别和批号分别作好记号)内，每个稀释度作两个平皿。5.4.1.5 倒平板 如果琼脂灭菌后当天使用，将灭菌后的琼脂放入472C水浴中待用。如果不是当天使用，让琼脂凝固，冷藏保存。使用之前用沸水或蒸汽溶解灭菌琼脂。注意保证琼脂不能过热。 琼脂一经溶化，将琼脂放于472C水浴中。温度未平衡之前不要使用琼脂。 用燃烧灭菌方法打开装有琼脂的瓶子或测试管。打开每个已接种的培养皿盖，轻轻加入约15ml琼脂到培养皿中。 盖上盖子，将培
5、养皿按8字图案转动使里面的物质混合。在混合过程中，必须注意防止琼脂溅至培养皿边缘或盖上。每个测试项目取个平板，直接加入约15ml琼脂作为空白对照。 在检测过程中，打开两个平皿，置于操作台面，放置10分钟，再分别加入细菌总数和酵母和霉菌培养剂作空气的测试。 每个平板分别标注对应样品的标识。参阅SOP-QA-024，样品的标识。5.4.1.6让琼脂凝固，然后倒转平皿，在适当的温度下培养。总菌数：35C酵母和霉菌数：28C大肠杆菌：35C耐高温菌：55C注：平皿堆放最好不要超过六层，应保持一定的空气流通。除非通过显微镜辨认各种菌落，否则除了霉菌外，在酵母和霉菌培养皿上的菌落全部被视为酵母菌。5.4.
6、2 菌落计数5.4.2.1 应在培养死亡期(723hrs)的时候计算菌落数，乘以稀释倍数，即得每1g 或每1ml样品所含菌落总数。5.4.2.2 计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜或血球计数器计数。5.4.3 菌落计数的报告5.4.3.1 平板菌落数的选择先取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准，一个稀释度用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数.5.4.3.2 稀释度的选择 应选择平均菌落数在3030
7、0之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表2例1)。 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视二者之比如何来决定，若其比例小于2，报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见附表2例2及3)。 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见附表2例4)。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见附表2例5)。 若所有的稀释度均无菌落生长，遇以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见附表2例6)。 若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的
8、平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见附表2例7)。5.4.3.3 菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算.为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示(见附表2“报告方式”栏)。6.0 参考文献6.1 本文件支持纲要文件:微生物监控纲要6.2 相关SOP文件:成品的微生物测试.6.3 本文件参考食品卫生国家标准: GB 4789.2-84.7.0 附件/记录7.1 附件：培养介质的配制与灭菌方法稀释度选择及菌落数报告方式7.2 记录：无。附表1：培养介质的配制与灭菌方法培养基名称供应商测试项目配制方法灭菌方法
9、Plate Count AgarOxide细菌总数（果汁）17.5g溶于1升蒸馏水中，搅拌加热至完全溶解121C，15分钟Wort AgarOxide酵母和霉菌（果汁）50g溶于1升蒸馏水中，搅拌加热至完全溶解121C，15分钟Orange Serum AgarOxide细菌总数（果汁）37g溶于1升蒸馏水中，搅拌加热至完全溶解，经高温灭菌后需使用消毒后的10的酒石酸调节PH121124C，15分钟Tryptone Glucose Extract AgarOxideTGA(咖啡/椰子汁)24g溶于1升蒸馏水中，搅拌加热至完全溶解121124C，15分钟Tryptone Soy AgarOxideTSA(咖啡/椰子汁)40g溶于1升蒸馏水中，搅拌加热至完全溶解121C，15分钟附表2：稀释度选择及菌落数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数(个/g或个/ml)报告方式(个/g或个/ml)10-110-210-31多不可计16420-1640016000或1.6x1042多不可计295461.63775038000或3.8x1043多不可计271602.22710027000或2.7x1044多不可计多不可计313-313000310000或3.1x105527115-270270或2.7x1026000-1x10107多不可计30512-3050031000或3.1x104
