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1、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备B1.材料的准备B1.1枯草芽孢杆菌B1.2无菌稀释液B1.2.1磷酸盐缓冲液（PBS）最终稀释液的浓缩液a)将34gKH2PO4溶解于500ml蒸馏水中；b)在25下用1mol/l的NaOH调节溶液，将a)的PH值调节至7.20.5；c)用蒸馏水将b)稀释至1L。B1.2.2磷酸盐缓冲液（PBS）最终稀释液方法一：a)蒸馏水1L；b)步骤1制得的PBS溶液备用125mL；c)用a)和b)溶液调配1L的PBS溶液，并调节该溶液的PH至7.20.5；d)在120下将c)溶液高压灭菌15分钟。e)可选择的(可加可不加)硫酸镁（50gMgSO47H2O/每升蒸馏水）5.0ml
2、方法二：a)蒸馏水1L；b)步骤1制得的PBS溶液备用1.25mL；c)25下，用a)和b)溶液调配1L的PBS溶液，并调节该溶液的PH至7.00.1；d)在120下将c)溶液高压灭菌15分钟。注意：当芽孢菌悬液要立即使用时，用方法二配制稀释液较好。如果需要在4条件下贮藏芽孢菌悬液，则用方法一配制较适宜。B.2枯草芽孢杆菌的菌悬液的制备（1）把先前获得的枯草芽孢杆菌或其冻干粉的再水合后的产物接种在250ml无菌的肉汤培养基上。（2）370.5下在往复式摇床上培养482小时。（3）在650.5下加热振动培养15分钟。（4）把菌悬液转移到有螺纹盖的测试管中，并通过使用无菌蒸馏水以2500rpm离心分离15min，如此至少洗涤三次。若需贮藏菌悬液，则还要使用PBS进行最后的洗涤。（5）使用PBS和大豆琼脂通过标准稀释盘方法来确定芽孢浓度。由以上步骤培养出的芽孢其浓度应达到平均1.5109/ml。（6）培养皿在370.5下保温482小时。（7）如果芽孢要被立即使用，则用PBS稀释芽孢菌悬液以获得浓度为58108/ml芽孢菌悬液。（8）为了贮藏备用芽孢培养基，将其等分并在4条件下把它们贮藏在无菌的有螺旋盖的管形瓶中，或在70下冷冻贮藏。使用前，应通过表面涂覆和一种可接受的芽孢染色技术检查其活性。
