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1、 8 6 复旦学报( 医学版 ) 2 0 1 3年 1月， 4 0 ( 1 ) 另有 3例核型分析显示 1 2 、 1 4 、 1 6号染色体上 的非整倍体， 由于 ML P A非整倍体试剂盒中亦不包 含 1 2 、 1 4 、 1 6号染色体上 的探针， 因此未检出异常。 再者， ML P A试 剂盒不适用 于多倍体 的检测 ， 故 1 例核型分析为四倍体的样本 MI P A检测未见异常。 讨 论 孕 早 期胚 胎染 色 体 异 常 是 自然 流 产 的 重要 原 因。有研究 表 明， 自然 流产 中胚胎 染色体 异常 占 5 () 左 右l 。 自然 流 产 胚 胎 的细 胞 遗 传 学
2、研 究 发 现 ， 由于 染色体 数 目异 常 所 致 的胚 胎 发 育 不 良而 造 成 的妊 娠 中断 ， 是 自然 流 产 最 常 见 的 原 因 之 一 4 。 受精 卵 细胞 的正常 分裂是 胚胎 发育 过程 中的关键 环 节 ， 其中染色体分离异常 ， 不仅可导致胚胎的染色体 数 目异 常 ， 而且 可影 响胚 胎细胞 的生 长周期 ， 引起细 胞周 期 的延迟 、 细胞 分裂 的停 止 ， 甚 至胚胎 死亡 。 在本 实验 的 流产绒 毛染 色 体分 析 中 ， 有 6 6 7 ( 8 1 2 ) 出现染色体异常 ， 其中结构异常 1例， 占异常 核 型 的 1 2 5 ； 数
3、目异 常 7例 ，占 异 常 核 型 的 8 7 5 。细胞染色 体数 目异常在群体 中发生率约 3 ， 在前 3个月 的 自然流产胚胎 中发生率 可高达 5 ( ) 6 ( ) ， 这 种染 色 体数 目异 常 的改 变 主要 有 常 染色体三体 、 x单 体和多倍体等 。染色体数 目畸 变 的主要发 生源 自双 亲之一 的配 子形成 时或 妊娠 初 期受精 卵 卵裂 时出 现 了某 号 染 色体 不 分 离 ， 则 导 致 该染色体增多或减少一条 ， 亦 即导致三体性或单体 性。2 1 _ 三体在活产儿中最常见 ， 1 3 - 三体 、 1 8三体也 偶尔可见 ， 而其他常染色体的三体性大
4、多导致流产， 本实 验所 用 的 MI P A P 2 9 ( ) 试 剂 盒 主 要 用 于检 测 1 3 、 1 8及 2 1号染色体的微 缺失或微重 复。性染色 体 的三体性 在 活产 女 婴 中有 见 ， 性 染 色 体 的单 体 性 不仅见于流产儿 ， 也见于儿童或成人。多倍体在流 产 儿 中也 十分 常 见 ， 本 文 为 1例 ， 占全 部样 本 的 8 3 。这种染色体的数 目异常可源 自新的突变 ， 或源 自双亲之一配子形成中的异常有丝分裂或源 自精母 细胞或卵母细胞减数分裂中的异常 ， 也可源 自双受 精 等 。 目前， 检测染色体的非整倍性改变的基本方法 为染色体核型分析
5、 ， 但是它在检测羊水细胞、 绒毛或 其他胎儿细胞时 ， 需要进行体外细胞培养， 若培养失 败、 细胞过少或染色体形态较差时， 常常影响实验结 果 。应 用 MI P A 检 测 这 类 标 本 时 ， 不 需 要 体 外 培 养 ， 少量标 本 即可进行 检测 ， 针 对易发 生非 整倍性 改 变 的染 色体 上 的几 个 热 点基 因设 计 特 异性 探 针 ， 根 据特定基因拷贝数 的改变 ， 即可确定染色体数 目的 异 常 。 ML P A具有高度特异性 ， 如果靶序列与探针序 列不 完全互 补 ， 即使 只有一个 碱基 的差 别 ， 也 会 导致 杂交 不完全 ， 使 连 接反 应
6、无 法进 行 。只有 当连 接 反 应完 成 ， 才 能进行 随后 的 P C R扩增 并收集 到相 应探 针 的扩增 峰 ， 如 果检测 的靶 序列 发生点 突变 或缺 失 、 扩增 突变 ， 则相 应探针 的扩 增峰便 会缺 失 、 降低或 增 加 ， 因此 ， 根据 扩增峰 的改 变就 可判断靶 序列 是否 有 拷 贝数 的异常 或点 突变存 在 。 由于 MI P A 技术 具有方 便快 捷 、 特 异性 高 的特 点 ， 国内外均 有研 究将 该 技 术作 为核 型 分 析 的补 充 手 段 ， 用 于胎 儿 、 新 生 儿 及 流 产 组 织 的 非 整 倍 体 检 测 I6 ，
7、这 些研究 多采 用端 粒试 剂 盒 ( P 0 3 6 、 P 0 6 9或 P () 7 0 ) ， 在核 型 分 析 的基 础 上 大 大 增 加 了染 色 体 异 常的检 出率 。考虑 到流 产绒 毛染色 体 的异常 多发 于 1 3 、 1 8 、 2 1 、 X和 Y染色体 ， 还包 括了其他染色体 的数 目异常 和微缺失。 ” 。 等， 为尽可能覆盖与已 知流产密切相关的染色体畸变， 本实验选择了组合 型试 剂 盒 S AI S A P 2 9 0 一 B 1 ， 除 能 检 查 常 见 的 1 3 、 1 8 、 2 1 、 X和 Y 5条常见染色体非整倍体情况， 同时 还可
8、对常 见 1 4种染 色体微 缺失 微重 复情 况进行 检 测 。因为其 高度 的 特异 性 ， 本 实 验 中 1例结 构 异 常 样本 ， 细胞遗传学分析仅能判断出 2 2号染色体上有 一 段增加的染色体片段， 怀疑来源于 8号染色体 ， 但 无法判断其确切来源 ， 且无法分析微缺失或微重复。 ML P A则准确检测出此段染 色体 来源于 8号染色 体 ， 并检 测 出2 2 q l 3 3 3 有微 缺失 ， 可能 由于2 2 q 1 3 3 3 区段位于 2 2号染色体长臂末端 ， 在 8号染色体片段 易位其 上时 丢失 。另 外 ， 由于 常规 的染 色 体核 型 分 析 通过 镜下
9、 观察 ， 染 色体 片段较 小 时判读 困难 ， 本实 验 中 1例非整倍体样本细胞遗传学分析结果为： 4 6 ， XY， 一 9 ， +1 5 7 ， 怀疑增加的那条染色体来源于 1 5号 染色体 ， MI P A 检测 结 果 为 ： 男 性 ， 1 5 q l 1 、 1 5 q 2 4上 4个 探 针 信 号 增加 ， 证 实 增 加 的那 条染 色 体来 源 于 1 5号 染 色 体 ， 对 核 型 分 析 结 果 起 到 了 补 允 校 正 作用 。 然而 MI P A也 有其 不足之 处 ， 它仅能 检测 出实 验所用探针所指示的位点 ， 也就是说无 法检测未知 位 点的 缺
10、失 、 重 复 或 突 变 。本 实 验 所 用 的 MI P A P 2 9 0 B 1 试剂 盒不 包含 1 2号 、 1 4号 、 1 6号 等其他 1 0 刘敏娟 ， 等 多重连接依赖 的探针扩增 ( ML P A) 技术 在 自然流产样本检测 中的应用 8 7 条染色体信息 ， 故本实验 中 4例发生在 9 、 1 2 、 1 4 、 1 6 号染色体上的数 目异常未能检出。若能针对相应染 色体的热点基因设计特定探针便可解决 这一 问题 。 另外 ， 由于 ML P A技术是依据基 因拷贝数比较来判 读结果 ， 不适用于 多倍 体 的检 出， 故本 实验 中 1例 9 2 ， X X
11、YY未 能检 出 。 总之 ， 作为一 种新 的技术 ， MI P A 技术基于其 高效 、 特 异 、 快 速 、 简 便 的 特 点 ， 已被 运 用 于 1 8 一 三 体 、 2 1 一 三体 、 假 肥 大 性 肌 营养 不 良、 脊 髓 性 肌 萎 缩 症 、 D a n d y Wa l k e r 综合征等多种临床疾病 的基因检 测 。但同时仍存有一些不足 ， 如需要精确测量 DNA 浓度 ， 不适合检测 未知突变位点 、 平衡 易位及多倍 体 。在流产样本 的染色体分析 中， 它能弥补传统 细 胞遗传学分析的不足 ， 检测微小缺失 、 重 复或 突变 ， 且与 F I S H
12、、 微阵列基 因组杂交等方法 比较， 除了具 有操作简单快捷 的优点外 ， 其经济成本也较低 ， 可广 泛应用于临床 ， 作为核型分析 的重要补充 ， 以提高染 色体异常的检出率 。 1 2 3 参 考 文 献 4 5 6 7 8 9 1 ( ) 李凡 ， 温 庆荣 ， 郑胤 强 ， 等 7 9例 自然 流产 绒毛 的染色 体 分 析E J 2 赣 南 医学 院 学报 ， 2 0 0 9， 2 ( 3 ) ： 3 7 63 7 7 S c h o u t e n J P，Mc E l g u n n C J ，Wa a i j e r R，e t a 1 Re l a t i v e q u
13、a nt i f i c a t i o n o f 40 nu c l e i c a c i d s e q u e n c e s b y m u l t i pl e x l i g a t i o n d e p e n d e n t p r o b e a mp l i f i c a t i o n J Nu c l e i c Ac i d s Re s， 2 0 02， 3 0( 1 2 )： 5 7 李 晓娟 ， 龚护 民 ， 符 生苗 ， 等 荧 光 原 位杂 交 技 术在 诊 断 胎 】 I ( 上接第 7 9页 ) 8 Di c p i n i g a i t i
14、s P VC h r o n i c c o u g h d u e t o a s t h ma ACC P e v i d e n c e b a s e d c l i n i c a l p r a c t i c e g u i d e l i n e sJ C h e s t ， 2 0 0 6， 1 2 9( 1 s up p 1 )： 7 5 S一7 9S 9 I t o K，C h u n g KF，Ad c o c k I MUp d a t e o n g l u c o c o r t i c o i d 1 0 1 1 1 2 2 a c t i o n a n d
15、r e s i s t a n c e J J Al l e r g y C l i n I mmu n o l ， 2 0 0 6 ， 11 7( 3 )： 5 2254 3 S h i mo d a TT， Ki s h i k a wa RR， S h o j i S S E f f i c a c y o f a i r way a nt i i n f l a m ma t o r y t r e a t me n t s e v a l ua t e d wi t h a i r way i n f l a mma t i o n ma r ke r s i n p a t i e nt s wi t h c ou g h v a r i a n t a s t h ma ：Bu d e s o n i d e v e r s u s mo n t e l u k a s t J ， Al l e r gy Cl i n I mmu no l， 2 0 06， 11 7( 2 )： $1 7 6 Ch a u d hur i R， M c M a h o n AD， Tho ms o n LJ， Z Ef f e c t o f i n
