《眼眶前脂肪细胞在甲状腺相关眼病发病机理中作用的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《眼眶前脂肪细胞在甲状腺相关眼病发病机理中作用的研究（106页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、四川大学 博士学位论文 眼眶前脂肪细胞在甲状腺相关眼病发病机理中作用的研究 姓名：张学进 申请学位级别：博士 专业：眼科学 指导教师：罗清礼 20040428 四川大学临床医学博士专业学位论文 眼眶前脂肪细胞在甲状腺相关眼病 发病机理中作用的研究 摘 研究生 导师 要 张学进 罗清礼 目 的:体外培养甲 状腺相关眼病( T A O ) 病人与正常人眼眶前脂肪细胞: 研究不同 浓度的 诱导液对前脂肪细胞的诱导作用以 及白 介素6 ( I L - 6 ) 、生 长抑素对前脂肪细胞分化以及粘附分子表达的作用;研究前脂肪细胞诱 导前后基因表达谱的 变化; 定量研究促甲 状腺激素受体( T S H R
2、) 在培养细 胞和眼眶组织中的表达; 以期对眼眶前脂肪细胞在 T A O发病中的作用进 行初步探讨。 方法:原代培养 1 3 个T A O病人与7 个正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪 细胞，用电镜比较其超微结构;比较地塞米松、胰岛素、3 一 异丁基一 1 一 甲 基黄嚓吟 ( I B MX 、 I L - 6 和生长抑素对前脂肪细胞转化率的影响; 用流 式细胞术检测培养细胞中 粘附分子的情况; 用S B C - R - H C - 1 0 0 - 2 0 c D N A 基因芯片检测前脂肪细胞诱导前后基因表达谱的变化;用荧光定量P C R 技术检测 T A O病人与正常人眼眶组织与培养的细胞中T
3、S H R表达的情 况。 结果: ( I ) 体外成功培养T A O病人与正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细 胞，并成功诱导前脂肪细胞向脂肪细胞转化，获得本实验最佳的诱导液 浓度: 地塞米松0 . 1 u m o l / L ; 胰岛素1 0 u g / m l ; I B M X 0 . 2 5 m m o l / L a ( 2 ) 工 L - 6 不能促进前脂肪细胞向脂肪细胞转化，对培养细胞粘附分子的表达 亦没有影响;而生长抑素能抑制前脂肪细胞向脂肪细胞转化。( 3 )在前 脂肪细胞诱导前后基因表达谱中有 2 7 9条基因发生了改变，其中上调基 四川大学临床医学博士专业学位论文 因1 2 6
4、 条，下调基因1 5 3 条，H MG 1 , C C N D1 和P D G F R等基因可能参 与了前脂肪细胞分化的调控，其它如细胞粘附分子、细胞外基质成分、 骨架蛋白、某些细胞因子等基因也发生了改变，它们可能主要为细胞形 态、分泌功能等方面的改变作准备。 ( 4 ) T A O病人眼眶脂肪组织与眼外 肌中均有 T S H R的表达，但脂肪组织中表达量高于眼外肌。正常人眼眶 脂肪组织与眼外肌中没有发现T S H R的表达。 培养的T A O病人眼眶成纤 维细胞与前脂肪细胞中也均有T S H R表达，但没有显著性差异;前脂肪 细胞经诱导为脂肪细胞之后，表达T S H R增加，且有显著性差异。
5、 结论: T A O病人与正常人眼眶成纤维细胞和前脂肪细胞在形态学上无明 显差异， 但生物学功能有差异，前脂肪细胞能诱导分化为脂肪细胞;前 脂肪细胞向脂肪细胞分化与到多种基因的作用有关; T A O病人眼眶组织 与培养细胞中有T S H R表达，在脂肪组织与脂肪细胞中表达增加;说明 眼眶前脂肪细胞在 T A O的发病中可能有重要作用。 关键词:甲状腺相关眼病，前脂肪细胞，分化，基因芯片，促甲状腺激 素受体 四川大学临床医学博士专业学位论文 S t u d i e s o n t h e e f f e c t s o f p r e a d i p o c y t e f i b r o b
6、l a s t s o n t h e p a t h o g e n e s i s o f t h y r o i d a s s o c i a t e d o p h t h a l mo p a t h y ( A b s t r a c t ) P o s t g r a d u a t e Tu t o r Pr o f Z h a n g x u e j i n L u o q i n g l i O b j e c t iv e s : T o i n v e s t g a t e t h e e f f e c t s o f d e x a m e t h aso n
7、e , i n s u l i n , I B MX , I L - 6 a n d s o m a t o s t a t i n i n c u l t u r e d o r b i t a l f i b r o b l a s t s a n d p r e a d i p o c y t e s fr o m p a t i e n t s w i t h t h y r o i d a s s o c i a t e d o p h t h a l m o p a t h y ( T A O ) a n d n o r m a l c o n t r o l s u b j e
8、c t s . T h e c h a n g e s o f g e n e e x p r e s s i o n s w e r e i d e n t i t i e d a ft e r t h e p r e a d i p o c y t e s d i f f e r e n t i a t e d . E x p r e s s i o n o f t h y r o i d s t i m u l a t i n g h o r m o n e r e c e p t o r ( T S H R ) w a s s t u d i e d i n o r b i t a l
9、 t i s s u e a n d c u l t u r e d c e l l s fr o m T A O a n d n o r m a l c o n t r o l s u b j e c t s . Me t h o d s : O r b i t a l f i b r o b l a s t s a n d p r e a d i p o c y t e s o b t a in e d fr o m 1 3 p a t i e n t s w i t h T A O a n d 7 c o n t r o l s u b j e c t s a r e p r i m a
10、 r i l y c u l t u r e d , t h e u l t r ast r u c t u r e o f w h i c h i s o b s e r v e d b y t r a n s m i s s i o n e l e c t r o n m i c r o s c o p y . T h e e ff e c t s o f d e x a m e t h a s o n e , in s u l i n , I B MX , I L - 6 a n d s o m a t o s t a t i n w e r e c o m p a r e d o n
11、t h e p r e a d ip o c y t e d i ff e r e n t i a t i o n . T h e e x p r e s s i o n o f a d h e s i o n m o l e c u l e w a s m e as u r e d i n c u l t u r e d c e l l s b y fl o w c y t o m e t r y . T h e c h a n g e s o f g e n e e x p r e s s i o n s w e r e p r o f i l e d a ft e r t h e d i
12、 ff e r e n t i a t i o n o f p r e a d i p o c y te s b y S B C - R - H C - 1 0 0 - 2 0 c D N A g e n e e x p r e s s i o n D N A m i c r o a r r a y s . T h e e x p r e s s i o n o f T S H R w a s i d e n t i f i e d i n o r b i t a l t i s s u e a n d c u l t u r e d c e l l s f r o m T A O a n d
13、 n o r m a l c o n t r o l s u b j e c t s b y r e a l - t i m e P C R . R e s u l t s : ( 1 ) T h e o r b i t a l f i b r o b l a s t s a n d p r e a d i p o c y t e s a r e s u c c e s s f u l l y c u l t u r e d , t h e p r e a d i p o c y t e s w e r e i n d u c e d t o d i ff e r e n t i a t e
14、i n t o a d i p o c y t e s 四 川大学临 床医学博士专业学位论 文 s u c c e s s f u l l y . T h e o p t i m a l c o n c e n t r a t i o n s o f d e x a m e t h a s o n e , i n s u l i n a n d I B MX a r e r e s p e c t i v e l y 0 . I p m o l / L , 1 O p g / m l a n d 0 .2 5 m m o 1 / L . ( 2 ) I L - 6 c a n n o t i
15、m p r o v e p r e a d i p o c y t e s t o t r a n s f e r i n t o a d i p o c y t e s , n o t i n fl u e n c e t h e e x p r e s s i o n o f a d h e s i o n m o l e c u l e . S o m a t o s t a t i n c a n s u p p r e s s t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f p r e a d i p o c y t e . ( 3 ) T h e r
16、 e w e r e 2 7 9 p i e c e s o f g e n e s a l t e r i n g e x p r e s s i o n o n g e n e m i c r o a r r a y s , w i t h 1 2 6 s h o w i n g u p - r e g u l a t io n a n d 1 5 3 s h o w i n g d o w n - r e g u l a t i o n . H MG l , C C N D1 , P D G F R , a n d s o o n , m a y p a rt i c i p a t e i n t h e c o n t r o l l i n g o f p r e a d i p o c y t e d i ff e r e n t i a t i o n . ( 4 ) T h e T S H R e x p r e s s i o n s o f c o n n e c t i v e / m u s c l e a n d f
