《用细胞流体仪研究小麦细胞遗传学英文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《用细胞流体仪研究小麦细胞遗传学英文（1页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、D e v e l o p m e a n t o f F l o w C y t o g e c n e t i c s i n Wh e a t( T ri t i c u m a e s t i v u m L. ) J . V r a n a M. K u b a l rd k o v H . S im k o v a J . K d o n ry J . ( I n s ti W te JE x p e ri m e n ta l B o l m. I a b - ry面M o l e c u la r C y to g e n e t i m a n d C y to m e t
2、ry , S a k o lo v & G 6 . C Z- 7 7 2 0 0 O l o m o u c , C r e r h R e p u b l ic ) H e x a p l o i d w h e a t p o s s e s s e s ， o f th e l a r g e s t g e n o m e s a m o n g c u l ti v a t e d c r op s , w i t h t h e s i z e o f o n e c o p y r e p r e s e n t e d 场2 1 c h ro m o s o m e s e x
3、 c e e d i n g 1 6 0 0 0 M b p . T h e d i s c o v e ry o f g e n e o r d e r c o l i n e a r i ty a m o n g c e r e a ls le d to t h e s u g g e s t io n to u s e r i c e , a c e r e a l w i t h a s m a ll g e n o m e , a s a m o d e l f o r g e n e i s o l a t i o n . H o w e v e r , r e c e n t r
4、e s u l t s i n d i c a t e h ig h l e v e l o f r e a r r a n g e m e n t s a t t h e m i c r o s t u c t u r a l l e v e l b e t w ee n r i ce a n d w h e a t a n d i t i s b e - c o r n i n g c l e a r t h a t th e w h o l e ge n o m e o r a tl e a s t i t s pe n e - ri c h r e g io n s w i l l h
5、 a v e t o b e p h y s i c a ll y m a p p e d a n d s e - q u e n c e d . T h i s t a s k c o u l d b e g r e a t l y s i m p l i fi e d b y s e p a r a ti o n o f t h e g e n o m e i n t o i n d i v id u a l c h ro m o s o m e s u s i n g f l o w c y to m e t ry . I n s e v e r a l s p e c i e s 月
6、o w - s o r te d p l a n t c h ro m o s o m e f r a c t i o n s h a v e b ee n u s e d f o r o o n s h u c t i o n o f c h r o m o s o m e - s p e c ifi c D N A l i b r a r i e s , g e n e m a p p i n g a n d i s o l a t i o n o f m o l e c u la r m a r k e r s . T h e 二 o f t h e s t u d y . to d e
7、 v e lo p a n e f f ic i e n t p r o c e d u r e f o r p r e p a r a t i o n o f c h r o m m o r n e s u s p e n s io n s a n d to e v a lu a t e t h e p o t e n ti a l f o r c h ro m o s o m e f o rt 吨 o f i n d i v i d u a l c h r o m o s o m e t y p e s i n Ch e a t . S u s p e n s i o n s o f i
8、n ta c t c h ro m o s o m e s .p re p a r e d fi o m m o t - ti p ce ll s a f te r c e ll c y c l e s y n c h ro n i z a ti o n w i th h y d ro x y u r e a . S y n c h ro n i z e d m o t s w e re s u b j e c t e d t o a c o m b i n e d tr e a t m e n t w it h a m ip ro p h o s - m e t h y l a n d i
9、ce w a t e r t o a c c u m u la t e d i v i d i n g c e ll s i n m e t a p h as e . F o ll o w in g t h i s p ro c e d u re , m e t a p h a s e i n d i c e s e x c e e d i n g 5 0 % 。ro u t in e l y o b t a i n e d . S y n c h ro n i z e d m o t t i p s 。f i x e d i n f o r m a l d e h y d e a n d c
10、 hr o m o s o m e s 。r e l e a s e d i n t o 。 ly s is b u ff e r 场m e c h a n i c a l h o n w g m is a t io n . M m e t h a n 5 x 1 0 5 c h ro mo s o m es c o ul d b e is k la te d fi o m ， m o t l ip s . T h e p ro c e d u r e . g e n o ty p e in d e p e n d e n t a n d c h ro m o s o m e s u s p
11、e n s io n s o b ta in e d in v a r io u s c u l f v a r s a n d l i n e s F lo w c y t o m e t r i c a n a l y s i s o f D A P I - s t a i n e d c h ro m o s o m e s re s u l t e d in h i s t o g ra m s o f r e la t iv e fl u o re s c e n c e in te n s ity ( fl o w k a r y o ty p a s ) c o n ta in
12、in g th r e e c o m p o s ite p e a k s r e p re s e n t in g g ro u p s o f c h ro - w ith 。 s i m i- l a r r e la ti v e D N A c o n t e n t . I n a d d i t io n , a p e a k t h a t r e p r e s e n t e d c h r o m o s o m e 3 B. w e ll r e s o l v e d . T h i s c h ro - 。c o u l d b e s o r t e d
13、a t p u ri ty h i g h e r t h a n 9 5 %.d e te r mi n e d 场m i c r o s c o p ic e v a l u a ti on o f s o r te d fi a c - li o n s th a t w e r e l a b e l l e d u s i n g C - P A IN S w i th p r in t e r s f o r G A A m i c r o s a t e ll i t e s a n d fo r 加 r e p e a ts , -p x t i v e - 妙 . I n a
14、 d d i ti on to C - P A IN S , P C R w i th c h r o n w s o m e - s p e c i fi c p r im e r s w a s u s e d t o c o n f i r m th e i d e n t i ty o f s o r t e d c h r o m o s o m e f r a c t i o n s . V a ri o u s c u l ti v a r s , la n d r a c e s a n d c h ro m o s o m e s t o c k s h a v e b e
15、e n e v a l u a t e d f o r t h e i r s u i t - a b i l i ty t o s o tr o th e r c h ro m o s o m e t y p e s th e n 3 B . U s i n g c h ro m o s o m e t r a n s l o c a t ion l i n e s i t w a s p o s s ib l e t o s o rt c h ro m o s o m e s 4 A L i 5 B L a n d 5 B V7 B L . F u r t h e r m o r e ,
16、s o m e d i t e l o s o n u c a n d i s o c h m n t o s o m e li n e s w e r e f o u n d s u i ta b l e f o r s o rt i n g s in g l e c h ro m o s o m e a r m s . F lo w - s o r t e d c h r o m o s o m e s 。f o u n d s u it a b l e f o r p r e p a r a t i o n of h ig h m o l e c u la r w e i g h t D N A . T h e w o r k i s i n p r o g r e s s to c o n s tr u c t c h ro m o s o m e - s p e c i fi c B A C l i b r a r i e s i n t h e - a t T h i s w o r k c y o f t h e C z e c h w a
