《牙龈卟啉单胞菌脂多糖对血管内皮细胞功能影响的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《牙龈卟啉单胞菌脂多糖对血管内皮细胞功能影响的实验研究（82页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、遵义医学院 硕士学位论文 牙龈卟啉单胞菌脂多糖对血管内皮细胞功能影响的实验研究 姓名：林玉祥 申请学位级别：硕士 专业：口腔临床医学 指导教师：葛颂 20100501 遵义医学院硬士学位论文 。 牙龈卟啉单胞菌脂多糖对血管内皮细胞功能影响的实验研究 牙龈卟啉单胞菌脂多糖对血管内皮细胞功能影响的实验研究 硕士研究生：林玉祥导师：葛颂教授 ( 贵州省遵义医学院附属口腔医院口腔内科5 6 3 0 0 3 ) 中文摘要 目的：观察三种不N j a m , 4 基因型P g i n g i v a l i s L P S 对H U V E C 产生致炎细胞因子、 趋化因子以及黏附分子的影响，初步探讨P
2、g i n g i v a l i s 感染在A S 发生和发展的可能作 用以及作为牙周炎与A S 相关的物质基础的可能。 方法：厌氧培养Za r e A 型( A T C C3 3 2 7 7 ) 、I l f i m A 型( W C S P l1 5 ) 、I V f i m A 型( W 8 3 ) P g i n g i v a l i s ，采用热酚- 水法提取Pg i n g i v a l i s - L P S ，应用S D S P A G E + 银染、红外线光谱 分析、鲎试验对提取的脂多糖予以鉴定；体外培养H U V E C ，待H U V E C 单层融合后， 分别加入
3、不同终浓度的Pg i n g i v a l i s L P S ，共同培养2 h 、6 h 、2 4 h ，应用E L I S A 法测 定培养上清液中I L 1 p 、I L 6 、T N F C t 、I L 一8 和M C P 1 的分泌量；提取H U V E C 总R N A ， R T - P C R 法检测I L 1 D 、I L 6 、T N F a 、I L 8 、M C P 1 、I C A M 1 和V C A M 1m R N A 表 达水平，F C M 技术检测H U V E C 表面I C A M 1 和V C A M 一1 蛋白表达量。 结果：( 1 ) 本实验研
4、究条件下所提取的户g i n g i v a l i s 细菌物质经红外光谱分析和 S D S P A G E 电泳分析，表明其结构与E c o l i L P S 相似，系尸g i n g i v a l i s L P S ，鲎试验表 明所提取的Pg i n g i v a l i s - L P S 具有较高的生物学活性( 1 5 n g m 1 ) ，可用于后续的实验。 ( 2 ) 3 型P g i n g i v a l i s L P S 作用于H U V E C 后，细胞表达I L 一1 p 蛋白水平及m R N A 水 平升高，在较高浓度( 5 、1 0 p t g m 1 )
5、 时，I I 型f i m AP g i n g i v a l i s L P S 刺激H U V E CI L - 邛 蛋白水平及m R N A 的表达强于I 型f i m ae g i n g i v a l i s L P S 。， 在3 型P g i n g i v a l i s L P S 刺激下，H U V E CI L 6 水平的升高发生在转录m R N A 水 平和转录后蛋白水平，且存在着浓度依赖效应；不同f i m A 基因型P g i n g i v a l i s L P S 刺 激作用存在着差异。在蛋白水平上，I I 型和型f i n , 4 基因型P g i n
6、g i v a l i s L P S 刺激作 用强于I 型f i m A 基因型P g i n g i v a l i s L P S ，但上调作用出现较晚。在m R N A 水平上， I I 型f i m A 基因型P g i n g i v a l i s L P S 刺激H U V E C 表达I L 一6m R N A 的作用较强。 在3 型P g i n g i v a l i s L P S 刺激下，H U V E CT N F 0 【蛋白水平及m R N A 的表达量上调， 且存在着浓度依赖效应，蛋白水平在2 4 h 时表达量达到高峰。在一些浓度下，I I 型力，州 遵义医学院
7、硕士学位论文牙龈卟啉单胞菌脂多糖对血管内皮细胞功能影响的实验研究 P g i n g i v a l i s L P S 刺激H U V E CT N F a 蛋白水平比型：m aP g i n g i v a l i s - L P S 的作用强。 在m R N A 水平上，高浓度( 5 、10 1 t g m 1 ) 时，型f i m A 基因型P g i n g i v a l i s L P S 具有较 强的刺激H U V E C 表达T N F am R N A 的作用。 提示3 型P g i n g i v a l i s L P S 对H U V E C 表达I L - 11 3
8、 、I L 一6 和T N F - f l , 的调节发生在转 录和转录后两个水平，从而导致血管内皮细胞功能紊乱，可能在A S 的进程中起到关 键的作用，且f i m a 基因型的差异可能导致P g i n g i v a l i s L P S 在调控H U V E C 产生致炎 细胞因子的能力存在差异。 ( 3 ) 本实验研究条件下，应用3 型P g i n g i v a l i s L P S 刺激H U V E C 后细胞表达I L - 8 蛋白水平和m R N A 的水平升高，且存在着浓度依赖效应。m R N A 水平6 h 时达到高峰， 蛋白水平2 4 h 时分泌量达到高峰。3
9、型P g i n g i v a l i s L P S 问刺激H U V E C 表达I L 一8 蛋 白水平差异无统计学意义( p 0 0 5 ) 。6 h 时，5 1 t g m l 浓度I I 型t i m 4 基因型 P g i n g i v a l i s L P S 较强刺激H U V E C 表达I L 一8 m R N A 的作用( p 15 n g m 1 ) a n d c o u l db eu s e di nt h ef o l l o w i n ge x p e r i m e n t ( 2 ) 、吼t h eH U V E C sw e r es t i
10、m u l a t e dw i t hP g i n g i v a l i s - L P S ，t h ep r o d u c t i o no f I L - lpp r o t e i nw a sh i g h e rt h a nt h en e g a t i v ec o n t r 0 1 T h er e g u l a t i o ne f f e c t so nI L 一1B e x p r e s s i o nb yt y p eI IP g i n g i v a l i s - L P Sw e r em o r et h a nt y p eIP g i
11、 n g i v a l i s - L P S T h e u p - r e g u l a t i o n e f f e c t so nI L 6 e x p r e s s i o nb yP g i n g i v a l i s - L P S w e r ei na d o s e - d e p e n d e n tm a n n e r , w h i c hh a p p e n e do nt h et r a n s c r i p t i o na n dp o s t - t r a n s c r i p t i o nl e v e l s a n dt
12、h es t i m u l a t i o no ft y p eIP g i n g i v a l i s - L P S ，w h i c hI L - 6p r o t e i nl e v e l i nH U V E C c u l t u r es u p e r n t a n tw a sl o w e rt h a nt h a to ft y p eI Ia n d1 VP g i n g i v a l i s L P S T h er e g u l a t i o n e f f e c t so nI L - - 6m R N A e x p r e s s i
13、 o nb yt y p eI IP g i n g i v a l i s - L P SW a Ss t r o n g e rt h a no t h e r f i m A t y p e s T h eu p - r e g u l a t i o ne f f e c t so nT N F ae x p r e s s i o nb yP g i n g i v a l i s L P Sw e r ei na d o s e - d e p e n d e n tm a n n e r , w h i c hh a p p e n e do nt h et r a n s c
14、r i p t i o na n dp o s t - t r a n s c r i p t i o nl e v e l s T h ep r o t e i nl e v e lr e a c h e di t sp e a ka t2 4 h ，a n dt h er e g u l a t i o ne f f e c t sT N F - a p r o t e i nl e v e lb y t y p eI IP g i n g i v a l i s L P Sw a ss t r o n g e rt h a no t h e rf i m At y p e si ns o
15、 m ec o n d i t i o n s W i t hh i g l l d o s e ( 5 ，lO p , g m 1 ) o ft y p eI IP g i n g i v a l i s L P Si n d u c em u c hm o r eT N F am R N At h a no t h e r 加讲t y p e s I ti n d i c a t e dm a tt h ed i f f e r e n c eo ff i m at y p e sm a yl e a dd i f f e r e n t a b i l i t y o f P g i n
16、 g i v a l i s - L P S t oi n d u c eH U V E C st oe x p r e s sp r o i n f l a m m a t o r yc y t o k i n e ，a n dt h e s e c r e a t i o no fI L - lB ，I L - 6a n dT N F - qb yH U V E C sm a yc o n t r i b u t et oa t h e r o s c l e r o s i s ( 3 ) T h eu p r e g u l a t i o ne f f e c t so nI L 一8 ，M C P - 1e x p r e s s i o nb yP g i n g i v a l i s L P Sw e r ei n ad o s e -
