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1、武汉大学 硕士学位论文 C-erbB-2和EGFr在脂溢性角化病中的表达及其意义 姓名：肖汉龙 申请学位级别：硕士 专业：皮肤性病学 指导教师：盛晚香 20040401 中 文 摘 要 目 的:通过检测 C - e r b B - 2 和 E G F r 在脂溢性角化病皮损和正常人皮肤组织中的 表达，来探讨C - e r b B - 2 和E G F r 在脂滥性角化病发病机制中的作用。 方法: 采用免 疫组化S P 法检测3 0 例脂溢性角 化病组织中C - e r b B - 2 和E G F r的 原位表达，并选用 1 0 例正常人皮肤组织作为对照. 结果: 脂溢性角 化病组织中C -
2、e r b B - 2和E G F r 的阳性表达程度分别显著高 于对 照组，两者相比有显著性差异。 结论:1 ， 正常人 皮肤组 织中 存在 C - e r b B 一和 E G F r 的 表达， 脂溢 性角化病皮损 C - e r b B 一和E G F r 的 表达程度明 显高于正常人皮肤组织，提示C - e r b B 一和E G F r 脂 滋性角 化病的 组织细 胞增生 过程中发挥重要作用。 2 . 尽管C - e r b B - 2 和E G F r 存在 着基因同源性和结构相 似性， 但两者在脂溢性角化病 的 表达并不一致，提示 两者在脂溢性角化病中的表达是彼此独立的，E G
3、 F r 表达 C - e r b B - 2 显著 关钮词 :脂溢性角化病C - e r b B - 2 E G F r AB S T RAC T O b j e c t i v e : T h e e x p r e s s i o n o f C - e r b B - 2 a n d E G F r i n s e b o n h e i c k e r a t o s i s ( S K ) l e s i o n s a n d n o r m a l s k i n t i s s u e w a s d e t e c t e d t o i n v e s t i g a t
4、 e t h e e ff e c t s o f T G F - a 、 E G F r i n t h e p a t h o g e n e s i s o f S K . M e t h o d s : T h e C - e r b B - 2 a n d E G F r e x p r e s s i o n i n s i t u i n 3 0 c a s e s o f S K a n d 1 0 c a s e s o f n o r m a l s k i n t i s s u e i n c o n t r o l w a s e x a m i n e d b y
5、i m m u n o h i s t o - c h e m i s t r y a s s a y . R e s u l t s : T h e e x p r e s s i v e i n t e n s i t y o f C - e r b B - 2 a n d E G F r in t h e S K g r o u p w a s s ig n if ic a n t ly h ig h e r th a n th o s e in th e c o n t ro l s re la tiv e ly . C o n c l u s i o n : 1 . T h e e
6、x p r e s s i o n o f C - e r b B - 2 a n d E G F r w a s f o u n d i n n o r m a l s k i n t i s s u e s . T h e e x p r e s s i o n o f C - e r b B - 2 a n d E G F r i n S K t i s s u e s w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n n o r m a l s k i n t i s s u e s w h i c h s
7、u g g e s t e d C - e r b B - 2 a n d E G F r p l a y e d a i m p o r t a n t r o l e i n t h e p r o l i f e r a t i o n o f S K c e l l s . 2 . A l t h o u g h t h e r e i s a g e n e h o m o g e n e i t y a n d s t r u c t u r e s i m i l a r i t y b e t w e e n C - e r b B - 2 a n d E G F r w e
8、d i d n o t fi n d a c o i n c i d e n c e o f e x p re s s i o n b e t w e e n C - e r b B - 2 a n d E G F r i n S K t i s s u r e s , w h i c h re m i n d e d u s t h e e x p re s s i o n o f C - e r b B - 2 a n d E G F r i n S K t i s s u e s w a s r e l a t i v e l y i n d e p e n d e n t a n d
9、t h e e x p re s s i o n o f E G F r i s m o r e n o t a b l e . K e y Wo r d s : S e b o r r h e i c k e r a t o s i s C - e r b B - 2 E G F r 郑 重 声 明 本人的学位论文是在导师指导下独立撰写并完 成的，学位论文没有票 J 窃、抄袭、造假等违反学术道 德、学术规范和侵权行为，本人愿意承担由此而产生 的法律后果和法律责任， 特此郑重声明。 学位论文作者: 月/ 2 一 日 引言 分子生 物学研究表明 f l 肿瘤是细胞 周期中生 长因 子及其受体、细
10、 胞因子 及 众多 癌基因、 抑癌基因产物等对D NA 代谢的调节发生改变的 过程。 癌基因 所 编码的蛋白质称为 癌基因蛋白 或转化蛋白， 定位于细胞膜，胞 质或胞 核内， 具 有蛋白 激酶、生 长因子或其受体、膜 相关蛋白 、胞质调节蛋白、 信号 传递因 子 和转录子的相 似功能， 直接参与细 胞生 长、 分化、增殖及 转化等过程的调 控， 形成一个连锁的 瀑布式效应， 而 最终导 致细胞的癌变。C - e r b B - 2 又称n e u 基因， 是 1 9 8 5 年确认的v - e r b B 2 相关的原 癌基因， 编码一个珍R D的 糖蛋白， 与表皮 生长因子受体 ( E G
11、F r ) 十分 近似， 通过基因扩增和蛋白 产物的过度表达而与人 类肿 瘤发生有关 1 2 1原癌基因是 正常细胞中的一 类调 控正 常生长、 分化、 发育的 基因，但在一定条件下可被激活，转变为活化的癌基因，在基因结构上发生变 化， 呈现异常表 达， 而产生量或 质异常的 基因 产物， 导致正常细 胞癌 变。 P r e s s 等用单抗研究表明: C - e r b B - 2 在正常人 体腔土 皮、 腺上皮及胚胎中均有普遍的 微弱表达，但无基因 扩增。 说明C - e r b B - 2 承担着重 要的生理功能 ( 特别是对细 胞的分化和生长)， 只有当 其过度表达时 才变成具有转化活
12、性的 癌基因。表皮 生 长 因 子 受 体 (E G F r ) 是 角 质 形 成 细 胞 (K C ) 自 泌 生 长 因 子 的 主 要 受 体 ，具 有 蛋白 酪 氨酸激酶活性。 E G F r 与 其配体的结合， 可以 调节 K C的 增殖与分化 ， 控制 表皮的自 身稳定。 E G F r 属于具 有蛋白 酪氨酸 激酶活性受体 家族， 其配体除 表皮生长因 子 ( E G F 冲 卜 ， 还 有双调蛋白、 转化生 长因子a ( T G F -a 、 肝素结合表 皮生长因子、 动物 纤维素和上 皮调节素0 等。 E G F r 与其配体结合 ， 胞外区构 象变化导 致受体的二聚 体化
13、， 激活受体胞内 区的蛋白 酪 氨酸 激酶活性， 从而 使E G F r 发生自 身磷酸化; 通过 一 系列反 应， 调节核内 基因的表达和 分化。 脂溢性角化病 ( s e b o r r h e i c k e r a t o s i s , S K ) 义名脂溢性 疵、 老年 统，是老年人 最常见 的良 性表皮增生性肿瘤。 该病发病率高， 大多 数个体在一生中至少发生 一 个脂溢性角 化病损害。为了 探讨C - e r b B - 2 和E G F r 在脂溢性角 化病发病机制 中的作 用， 我 们采用免疫组化S P 法检测了3 0 例S K 组织中C - e r b B - 2 和E
14、G F r的 原 位表达，并 选用 1 0 例正常皮肤组织作为 对照， 现报道 如下。 材料与方法 一、研究对象 S K组 3 0 例，标本取自我科 2 0 0 1 一200 3年Io l 活检标本的石蜡包埋组 织块，均己经我院病理科确诊为 S K 其中男22 例，女 8 例，年龄 3 5 - 7 3岁， 平均年龄 59.5 岁。 标本分别取 自 面部 (13 例)、躯干部 (1 一 2 例)、四肢 (5例 ) 。 另取 1 0 例我院整形外科病人正常皮肤组织作为对照， 其中男6 例， 女 4 例， 年龄2 0 - 4 5 岁。 二、主要仪器 和试剂 1主要仪器 : 名称来源 医用超低温冰箱日
15、 本二洋 超静工作台苏州实验仪器厂 医用微波炉山东 济南微波炉厂 光学显微镜日 本O l y m p u s 产品 显微照相系统日 本。 l y m p u s 产品 2主要试剂: 所需试剂均为福州迈新生物 技术公a 1 1- : 产， 购自 武 汉千色医 疗器械有限公司。 主 要包括: 特异性鼠抗人 C - e r b B - 2单 克隆抗体 特异性鼠抗人 B G F r 单克隆抗体 即用型 5 一 P试剂盒 D A B显色剂 0 . 0 l m o 1 I L p H 7 . 4 柠檬酸 缓PP液 ( P B S ) 。 0 1 m o l / L p H 6 . 0 柠檬酸抗原修复缓冲液
16、 多聚- L - 赖氨酸 重铬酸钾浓硫酸清洁液 其中即用型 S - P 试剂盒包括: A :内 源 性 过 氧 化 物 酶阻 断 剂 ( E n d o g e n o u s p e r o x id a s e b lo c k in g s o l u t io n ) B y 正常动 物非免疫血清 ( N o r m a l n o n i m m u n o n e s e r u m ) C : 生物素 标记的 第二抗体 ( B i o t i n - c o n j u g a t e d s e c o n d a n t i b o d y ) D :链霉菌 抗生物素 蛋白 过 氧化物酶( S t r e t a v i d i n - P e r o x i d a s e ) 三、皮损组织的石蜡包埋 I ，皮损组织标 本固定 完成后， 倒去固定液，以5 0 %乙 醇替代。 然 后立即 换新 鲜的5 0 % 乙 醇脱水3 次， 室温下放置，每次2 0 分钟。 继而以7 0 % 乙
