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1、学位敝使盏燃权归属承诺、学位论文使用授权及知识产权归属承诺V 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，实验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则， 承担相应的法律责任。 一躲五昂畸即擗歹弛砂 二级学院领导签章： 。： 州D 年6 月日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文章中特别加以标注和致谢等内容外，文中不
2、包含其他人已经发表或 撰写的研究成果，指导老师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生答轹王砩穆 刷谧氧 3 植斡 如p 年易月) ，日 、， 一、 西， 、 目录 中文摘要l 英文摘要：7 英文缩写1 5 研究论文黄芩茎叶总黄酮对A p 致大鼠学习记忆损伤的影响 及机制研究 引言 1 7 第一部分 黄芩茎叶总黄酮对A p 致大鼠学习记忆损伤的影响 前言：1 9刚舌I y 材料与方法1 9 结果2 2 附图2 5 讨论3 4 小结3 5 参考文献3 5 第二部分黄芩茎叶总黄酮对抗A p 致大鼠学习记忆损伤的抗 氧化、抗炎机制研究 前言3 9 月I j 舌 材料与方法4 0 结
3、果4 1多口木t l 附图4 3 讨论5 2 小结5 4 参考文献5 5 第三部分黄芩茎叶总黄酮对抗A p 致大鼠学习记忆损伤的抗 凋亡机制研究 前言5 8日U 舌芍 材料与方法5 8 结果6 0 附图6 3 讨论7 9 小结j 8 1 参考文献_ 8 1 结论8 3 综述一淀粉样蛋白在阿尔茨海默病发病中的作用及机制研究 进展8 4 综述二黄芩茎叶总黄酮的药理作用研究进展9 6 致谢1 0 5 个人简历1 0 6 中文摘要 黄芩茎叶总黄酮对A p 致大鼠学习记忆损伤的影响及机制研究 摘要 阿尔茨海默病( A l z h e i m e r Sd i s e a s e ，A D ) 又称老年性
4、痴呆，是引起痴 呆的重要疾病来源，随着进入老龄化社会，A D 给社会和家庭带来了沉重 的负担。自1 9 0 6 年A l o i sA l z h e i m e r 首次命名并报道A D 以来，人们一直 在寻找其发病机制及预防和治疗措施。尽管A D 发病机制目前还不十分明 确，但淀粉样蛋白( a m y l o i dp r o t e i n ，A p ) 作为A D 发病的始动因子已基本 得到认可。A J 3 2 5 3 5 是A p 的功能性片段，体内外实验研究显示了A 1 3 2 5 3 5 能引起大鼠海马经元损伤、学习、记忆能力下降。临床药物对老年性痴呆 的治疗效果不佳，主要以增强
5、胆碱能神经功能药物为主，国外开发抗A D 药物主要集中在通过研究A D 发病的分子机制寻找新的靶点及抗氧化植 物药，国内主要围绕抗氧化植物药进行开发。黄酮类化合物是自然界分布 较广泛的一类次生代谢产物，是植物药抗氧化的一个重要有效成分。黄芩 是我国传统的中草药，对黄芩的研究集中在其有效成分黄酮类化合物，研 究表明黄芩茎叶总黄酮具有抗炎、抗免疫、保护心肌缺血再灌注损伤、减 轻脑缺血引起的损伤等作用。本实验采用大鼠双侧海马内注射淀粉样蛋白 ( A 1 3 2 5 3 5 ) 制备大鼠痴呆模型，从氧化应激、炎症反应、神经元凋亡等 机制观察黄芩茎叶总黄酮( S c u t e l l a r i aB
6、 a i c a l e n s i sS t e m 1 e a fT o t a l F l a v o n o i d ，S S T F ) 对A p 致大鼠学习、记忆能力损伤的影响及机制，以期 为抗氧化植物药用于A D 的预防、治疗提供实验依据。 第一部分黄芩茎叶总黄酮对A p 致大鼠学习记忆损伤的影响 目的：观察S S T F 对大鼠双侧海马注射A p 致大鼠学习、记忆能力损 伤的影响。 方法： 1 实验分组及处理：雄性W i s t a r 大鼠1 0 0 只，随机分为对照组、模 型组、S S T F 低、中、高剂量组、V E 组，每组16 只，对照组、模型组灌 胃蒸馏水，其它各组
7、分别灌胃S S T F ( 2 5 m g k g 、5 0 m g k g 、1 0 0 m g k g ) 、 V E ( 1 0 m g 只) ，灌胃2 0 天，在灌胃一周后对照组大鼠海马注射生理盐水， 其它各组注射A 1 3 ，注射A p 一周后做M o r r i s 水迷宫实验，连续做6 天后 中文摘要 处死。选4 只大鼠注射A p 3 天后处死，脑组织外固定后3 0 I _ t m 厚连续震荡 切片，观察针道。 2 模型制备：采用脑立体定位技术，于大鼠A P 3 5 m m ，M L + 2 m m ， D V 2 7 m m 定位海马C A l 区，注射凝胶态A 1 3 5 9
8、 l 含1 0 9 9 。 3M o r r i s 水迷宫实验：于大鼠海马注射A p 一周后做水迷宫实验，每 天2 次，连续6 天，记录大鼠6 0 秒内寻找平台的潜伏期，第6 天测定大 鼠寻找平台潜伏期后撤去平台，观察大鼠2 分钟内穿越平台区域的次数， 2 分钟内在平台区象限停留的时间，2 分钟内大鼠在平台区象限所游路程 与总路程比值。 4 标本处理：每组取3 只大鼠行多聚甲醛灌注进行内固定，取大鼠脑 组织进行外固定，石蜡包埋，做H E 、硫堇尼氏体染色。刚果红染色确认 A p 注射部位，每组取2 只大鼠脑组织做电镜标本。 5 统计学处理：采用S P S S l l 5 统计软件进行分析。
9、结果： 1 大鼠水迷宫实验结果：对照组大鼠第3 ，4 ，5 ，6 天寻找平台的潜 伏期分别为2 4 6 5 ，1 8 0 2 ，1 4 2 4 ，1 0 3 2 秒，模型组大鼠4 天的潜伏期明 显比对照组长。S S T F 中、高剂量组及V E 组较模型组明显缩短。 对照组大鼠2 分钟内穿越平台次数为1 5 5 次、在平台象限停留时间 为6 0 2 2 秒、平台象限路程与总路程比值为6 2 3 1 ，模型组( 6 2 5 ，2 9 2 5 ， 3 2 3 0 ) 较对照组明显减少；S S T F 中、高剂量组及V E 组与模型组相比明 显增加。 2 光镜下H E 染色显示对照组大鼠海马C A
10、l 区神经元有3 4 层，核染 色深，细胞形态清晰、完整，可见神经元的突起；模型组大鼠海马C A l 区有大段神经元缺失，核染色浅，突起消失，大鼠海马C A l 区细胞数( 5 6 1 3 ) 较对照组( 1 4 2 6 3 ) 明显减少；S S T F 中、高剂量组及V E 组较模型组损伤减 轻，细胞数较模型组明显增多。大鼠海马尼氏体染色结果与H E 染色结果 相似。 大鼠皮层尼氏体染色显示对照组大鼠皮层细胞较多，神经元形态清 晰、完整，核仁清晰，尼氏体染色深、多，突起明显，模型组大鼠皮层局 部区域神经元死亡，见断裂的突起和不完整的胞体，细胞数( 1 0 8 ) N 显少 于对照组( 5 4
11、 3 3 8 ) ；S S T F 中、高剂量组及V E 组较模型组损伤减轻，细胞 中文摘要 数较模型组明显增多。 3 超微病理显示对照组大鼠海马神经元核膜清晰、连续，常染色质丰 富，核仁大、核质均匀，细胞器丰富、结构正常；模型组大鼠海马神经元 胞膜不规则，断续，核膜模糊不清，细胞器明显减少，部分切片可见凋亡 细胞；S S T F 中、高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较模型组减轻。 电镜下对照组大鼠皮层神经元细胞器形态、结构正常；模型组大鼠皮 层神经元局部胞质溶解，核膜局部凹陷，不清晰，细胞器明显减少；S S T F 中、高剂量组皮层神经元损伤较模型组减轻。 结论：双侧海马注射A p 引起海
12、马C A l 区及皮层神经元严重损伤， 导致学习、记忆能力下降，S S T F 中、高剂量及V E 组能明显改善大鼠海 马、皮层神经元结构，提高大鼠学习记忆能力，对注射A p 引起的损伤有 一定保护作用，且S S T F 的保护作用具有剂量依赖性。 第二部分S S T F 对抗A p 致大鼠学习记忆损伤的抗氧化、抗炎机制研究 目的：分析S S T F 对抗A p 致大鼠学习记忆损伤与氧化应激、炎症反 应的关系。 方法： 1 血清制备、血清、组织中生化指标检测：大鼠经心脏取血，低温离 心，检测血清中S O D 、G S H P x 、C A T 活力及M D A 含量，取1 1 只大鼠新 鲜的海
13、马、皮层组织，检测组织中S O D 、G S H P x 活力及M D A 含量。 2 大鼠血清T N F 0 【、I L 1 p 测定，大鼠海马组织中G F A P 表达。 结果： 1 大鼠血清S O D 、G S H P x 、C A T 活力及M D A 含量 对照组大鼠血清中S O D 、G S H P x 、C A T 分别为9 9 7 0 ，18 7 8 8 6 ，1 3 7 6 ， 模型组( 8 0 8 8 ，1 6 1 3 2 7 ，8 3 4 ) 明显低于对照组；S S T F 中、高剂量组与 模型组相比明显升高。 对照组大鼠血清中M D A 为6 4 0 n m o l m l ，模型组( 1 2 3 8 ) 明显高于 对照组：S S T F 中、高剂量组及V E 组较模型组明显降低，且S S T F 低、 中、高剂量组间存在明显差异。 2 大鼠海马组织中S O D 、G S H P x 活力及M D A 含量 对照组大鼠海马组织中S O D 、G S H P x 分别为1 0 0 2 4 ，l7 0 7 4 ，模型 组( 7 2 8 7 ，1 3 5 1 6 ) 明显低于对照组；S S T F 中、高剂量组及V E 组S O D 中文摘要 明显高于模型组，S S T F 高剂量组G S H P x 明显高于模型组。 对照组大鼠海马组织中M D A
