《拟南芥新型芥子酶基因功能的初步研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《拟南芥新型芥子酶基因功能的初步研究（68页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、海南大学 硕士学位论文 拟南芥新型芥子酶基因功能的初步研究 姓名：吴宇佳 申请学位级别：硕士 专业：作物遗传育种 指导教师：张家明 20080601 内容提要 植物芥子酶防御系统为白花菜目植物特有，由芥子酶及其底物硫代葡萄糖苷 组成。芥子酶和硫代葡糖苷分别储藏在不同的细胞中，在受到病虫侵袭时，底物 和酶相遇，硫代葡糖苷被降为有毒化合物，起防御作用。对其研究具有重要的意 义。 在拟南芥中，S o u t h e m 印迹表明存在3 个芥子酶编码基因，其中只有两个基 因粥G J 和粥G 2 已被证明有活性，而粥G 3 是一个假基因。近年来，在拟南芥 中又发现了三个芥子酶基因，即粥G 4 、粥G 5
2、 和粥G 6 。粥G J 和粥G 2 都在叶、 子叶、茎和花器官中表达。粥G 4 、粥G 5 在根部特异表达。 本研究利用I A 干涉技术，初步研究了粥G 4 和粥G 5 基因的功能。根据 粥G 彳、粥仍编码序列中特异靶序列设计s i I A 序列。以拟南芥基因组D N A 模板扩增7 脱一4 基因启动子和终止子，与s i I 斟A 序列连接并克隆到植物表达载 体p B P 5 中，构建成了s i R N A 真核表达载体。利用花序浸泡法转化拟南芥，获 得转基因植株。经彳口如基因P C R 检测初步证实外源基因已导入拟南芥的核基 因组中。酶活测定的结果显示，粥G 4 、粥G 5 基因的表达受到
3、了大部分抑制。 这说明本研究构建的R N 载体对基因表达沉默是有效的。 另外利用R T P C R 方法克隆了7 T G G 4 基因c D N A ，连接并克隆到植物表达载 体p B P 6 中，构建成过量表达载体。同时利用花序浸泡法转化拟南芥。 购买了T - D N A 插入突变株，P c R 鉴定出T - D N A 插入位置。形态学观察结 果表明，突变体没有明显的表型改变。说明粥G 彳和粥G 5 功能具有冗余性，单 基因的突变不对拟南芥的生长发育产生影响。 主题词：芥子酶粥G 4 粥G 5 基因功能表达载体I 矾A 干涉过量表达 T D N A 插入突变 A b s t r a c t
4、 M y r o s i n a S e sa r eac l a u s so fe n z y m e sm a tc a t a l i z et 1 1 eh y d r 0 1 y s i so fm i o 西u c o s i d e s i 1 1b r 嬲s i c a l e s T h ee I ：亿y m e sa n dm es u b s 缸t e sa r es t o r e ds 印a r a t e l yi I ld i 仔旨e 1 1 tc e l l s ， m e ya r em i x e du p o ni n f e S 枷o nb yp e
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16、r e X p r e s s i o nT - D N Ai I l s e r t i o nm u t a g e n e s i s I I I 海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的 成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律 结果由本人承担。 论文作者签名： 关镒 日期：2 p 坫年乡月穹日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存和汇编本学位论文。本人在导师指导
