猪脂肪诱导转录基因fit的分子生物学基础研究

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1、分类号 1 8 3 9 2 1 1 密级 华中农业大学硕士学位论文 猪脂肪诱导转录基因H 丁的分子生物学基础研究 M o l e c u l a r B i o l o g i c a lA n a l y s i so f P o r c i n e F a t - i n d u c i n gT r a n s c r i p tG e n e 研究生:李德臻 指导教师:熊远著院士 指导小组:张沅教授 陈焕春院士 郑用琏教授 邓昌彦教授 蒋思文教授 谳向:分确副描黼 获得学位时间:2 0 1 0 年6 月 农业部猪遗传育种与繁殖重点实验室 二。一O 年六月 I _ _ - 一 唧II I

2、 fl l ll rlI lrl l ll lI 17 9 9 4 9 2 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 冱 如需保密,解密时间年 月日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料,指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意 研究生签名:苍笛铱 时间: 溯年厂月筇日 学位论文使用授权书 本人完全了解

3、华中农业大学关于保存,使用学位论文的规定,即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印刷版和电子版, 并提供目录检索和阅览服务,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表,传播学位论文的全 部或部分内容,同时本人保留在其他媒体发表论文的权力 注:保密学位论文( 即涉及技术秘密,商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文) 在解密后适用于本授权书 学位删粼:尉京 撇名丝蟛 签名日期: 矽如年罗耳日 签名日期: 加f 。年歹月7 尹日 注:请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 华中农业大学2

4、0 1 0 届硕士学位论文 目录 摘要I A B S T R A C T I I I 第一章文献综述1 1 前言11 日U 舌l 2 猪基因组计划研究进展1 。3 参与脂肪代谢的重要基因2 4 脂滴6 4 1 胞内脂滴的结构7 4 2 参与脂滴代谢的调控网络7 5 猪肿基因的研究进展8 第二章研究目的和意义l O 第三章材料与方法1 1 1 引言1 l 2 试验材料1 1 2 1 试验样品和性状测定1 1 2 1 1D N A 样品1 1 2 1 2 组织样品1 1 2 1 3 性状测定1 1 2 2 主要仪器和设备1 1 2 3 载体和菌株1 2 2 4 缓冲液和常用试剂的配制1 3 2 5

5、 主要药品及试剂1 3 3 试验方法1 4 3 1 猪血液基因组D N A 的提取1 4 3 2 基因组D N A 的浓度测定和质量检测1 4 3 3 猪组织总R N A 的提取及c D N A 的制备1 4 3 3 1 总R N A 的提取1 4 3 3 2R N A 的琼脂糖凝胶电泳检测15 3 3 3 反转录反应1 5 3 4 猪肌基因基因组序列的克隆、测序及S N P s 研究1 5 3 4 1 引物设计1 5 3 4 2P C R 反J 立15 猪脂肪诱导转录基因胛的分子生物学基础研究 3 4 3P C R 产物的回收、纯化和克隆测序1 6 3 4 4D N A 序列的生物信息学分析

6、及相应的软件。1 7 3 4 5 猪胛基因部分S N P 位点的P C R - R F L P ,P C R - S S C P 检测1 7 3 4 6S N P 的统计分析1 9 3 5 猪用 基因转录水平组织表达谱分析2 0 3 5 1 总R N A 的提取及R N A 质量的检测2 0 0 O O 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 5 6 6 6 6 7 7 9 3 5 7 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 r1 一 一 一 一 一 一 一 析 一 一 一 k I、) : J 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 3 5 利用半定量R T - P C R 对猪月”基因进行组织表达谱分析3 8 3 6 猪F I T l 蛋白进化树分析3 9 3 7 猪用 基因启动子的生物信息学预测4 l 3 7 1 启动子顺式元件的预测4 1 3 7 2 转录因子结合位点的预测4 l 3 8 猪几丌基因融合蛋白的体外表达4 2 3 8 1 真核表达载体的构建4 2 3 8 2 融合蛋白的体外表达。4 3 第五章讨论4 4 1 关于猪7 号染色体

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