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1、河南农业大学 硕士学位论文 孤啡肽及其受体基因在小鼠脂肪组织中表达的研究 姓名：陈福伟 申请学位级别：硕士 专业：基础兽医学 指导教师：杨国宇 20100601 陈福伟孤啡肽及其受体基因在小鼠脂肪组织中表达的研究 捅要 为了研究孤啡肽( N o c i c e p t i n O r p h a n i nF Q ，简称N O F Q ) 和孤啡肽受体( O p i o i dr e c e p t o r l i k e1r e c e p t o r ，简称O R L l ) 基因在小鼠脂肪组织中表达情况，本文以小鼠的附睾部脂肪组织 为研究对象，用半定量R T - P C R 法初步探讨了
2、N O F Q 和O R L I 基因在脂肪组织中的表达， 不同禁食时间对脂肪组织中N O F Q 和O R L l 基冈表达的变化规律，以及注射胰岛素和地塞 米松对脂肪组织中N O F Q 和O R L l 基因表达的影响。主要结果如下： 一、N O F Q 和O R L l 基因在脂肪组织中的表达。结果显示：N O F Q 和O R L l 基冈的 R T - P C R 产物电泳结果在3 6 4 b p 和5 6 3 b p 位置有特异性目的条带出现，从琼脂糖凝胶中回收 纯化目的D N A 片段，连接转化，测序，测序结果与电子克隆比对，发现得到的基因为小鼠 N O F Q 和O R L
3、l 。结果表明，N O F Q 和O R L l 基因在小鼠脂肪组织中均有表达。 二、禁食不同时间对小鼠脂肪组织中N O F Q 和O R L l 基因表达水平的影响。结果显示： l 、禁食2 4 h 后，与对照组( 即正常组) 相比N O F Q 和O R L I 基因表达水平均显著增加( 尸 0 0 5 ) ，约2 倍左右；恢复喂食2 4 小时后，与禁食组比较N O F Q 和O R L I 基冈表达水平 有所下降，但仍没有恢复到对照组的水平；2 、禁食3 6 小时后，与对照组比较N O F Q 和O R L l 基因表达水平有所升高，但差异不显著。 三、激素对小鼠脂肪组织中N O F Q
4、 嗣I O R L I 基因表达水平的影响。l 、注射胰岛素后与禁 食2 4 d 时组比较，N O F Q 和O R L I 基冈表达水平下降，但均不显著。2 、注射地塞米松后与对 照组相比，N O F Q 和O R L l 基因表达水平显著下降( P 0 0 5 ) 。 关键词：小鼠；脂肪组织；N O F Q ；O R L I ；能量代谢 陈福伟孤啡肽及其受体基因在小鼠脂肪组织中表达的研究3 5 S t u d y o nG e n eE x p r e s s i o no fN O F Qa n dO R L l i nt h eA d i p o s et i s s u ei nM
5、i c e S u p e r v i s o r ：P r o f Y a n gG u o y u M a s t e rC a n d i d a t e ：C h e nF u w e i A b s t r a c t T oo b s e r v et h er e g u l a t i o no f N o c i c e p t i n O r p h a n i nF Q ( N O F Q ) a n do p i o i d r e c e p t o r l i k e l g e n e s ( O R L1 ) i ne n e r g ym e t a b o
6、l i s m ，t h i st h e s i s s e l e c t e dm i c e e p i d i d y m a la d i p o s et i s s u ea so b j e c t i o n W es t u d yt h ee x p e s s i o no fN O F Qa n dO R L l g e n e si na d i p o s et i s s u e ，t h el e v e l so fN O F Qa n dO R L 1 g e n e se x p r e s si na d i p o s e t i s s u ed
7、 u r i n gd i f f e r e n tf a s t i n gt i m e ( 2 4h o u r sa n d3 6h o u r s ) ，a n de f f e c to fi n s u l i na n d d a x a m e t h a s o n eo ne x p r s s i o no fN O F Qa n dO R L1g e n e sl e v e l s T h er e s u l t sa sf o l l o w ： IT h el e v e l so fN O F Qa n dO R L1m R N Ai na d i p o
8、 s et i s s u ei nm i c e T h er e s u l t s h o w e d ：A f t e ra m p l i f i c a t i o nb yR T - P C R ，t h ea d i p o s et i s s u ep r o d u c e ds p e c i f i cb a n d s w h i c hw e r el o c a t e d3 6 4 b pa n d5 6 3 b pa c c o r d i n gt oe x p e c t a t i o n T h er e s u l ti n d i c a t e
9、 d t h a tN O F Qa n dO R L lg e n e sw e r ee x p r e s s e di na d i p o s et i s s u ei nm i c e I IE f f e c t so ff a s t i n g2 4h o u r sa n d3 6h o u r so nN O F Qa n dO R L 1g e n e se x p r e s s i o n l e v e l si na d i p o s et i s s u ei nm i c e n er e s u l ts h o w e d ：C o m p a r
10、e d 、 ，i t hc o n t r o lg r o u p ， e x p r e s s i o no fN O F Qa n dO R L lg e n e si na d i p o s et i s s u es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e da f t e r f a s t i n g2 4 h ( P 0 0 5 ) C o m p a r e dw i t hf a s t i n g ，e x p r e s s i o no fN O F Qa n dO R L 1g e n e s i na d i p o s
11、et i s s u ed e c r e a s e da f t e rr e f e e d i n g2 4 h ，b u tn o tb a c kt ot h ec o n t r o lg r o u p 2 ，C o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ，e x p r e s s i o n o fN O F Qa n dO R L lg e n e si na d i p o s e t i s s u ei n c r e a s e da f t e rf a s t i n g3 6 h ，b u tn o ts i g
12、n i f i c a n t l y IE f f e c t so fh o r m o n eo nN O F Qa n dO R L1g e n e se x p r e s s i o nl e v e l si na d i p o s et i s s u e i nm i c e 1 ，C o m p a r e dt of a s t i n g2 4 hg r o u p ，N O F Qa n dO R L1g e n ee x p r e s s i o nw a s l o wa f t e ri n s u l i nt r e a t m e n t ，b u t
13、n o ts i g n i f i c a n t 2 ，i n j e c t i o no fd e x a m e t h a s o n el o w e r e d N O F Qa n dO R L 1g e n ee x p r e s s i o ns i g n i f i c a n t l y ( P 0 0 5 ) 。可是注 射N O F Q 3 0 m i n 后刺( 豚) 鼠相关蛋白( a m p h e t a m i n e - r e g u l a t e dt r a n s c r i p t ，A G R P ) m R N A 比 对照组显著升高，
14、注射N O F Q l 5 m i n 后儿茶酚胺类( C A R T ) m R N A 的表达量不受影响， 但3 0 m i n 后明显降低。 1 5O R L l 拮抗剂的研究进展 研究受体配体相互作用有效的方法，一直是新的配体结构“信息定位报告”的设想。 1 9 7 0 s ，D r R o b e r tS c h w y z e r - 提t i - - 种设想，将一种肽配基信息序列保守区归类到某一肽家族， 并且把这个信息地址序列归到特殊的受体类型。一个配基信息元件激活它的受体，而定位元 件增加多余的结合亲和力，对信息转导过程作用并不重要。这个设想广泛应用于对肽配基和 肽受体配基的
15、设计，特别是结构相同的信息肽片段。但这种方法不适用于不同的受体类型或 构象不同受体亚群1 6 引。尽管如此，肽配基仍作为受体配体药效结构和选择性配基分子机制 重要的工具，并且这中构想为未来药物筛选，合理的药物设计提供理论基础。 为孤啡肽受体选择具有药效功能的新型G 蛋白偶联受体同源性配体，一般是通过模型分 析( 基于第一纯化G 蛋白偶联受体，X 射线结构形态不活跃，视紫红质，组合化学方法，或 构效关系( S A R ) ) 6 9 l ，建立构效关系的一个方法，是解密受体与配体结合的重要结构元件。 其中配基构效关系是一个非常有用的工具，尤其对有选择性的和有效的化合物的基本特征识 陈福伟孤啡肽及
16、j 受体基闪在小鼠脂肪组织中表达的研究1 2 别。自从发现构效关系以后，N O F Q 序列的构效关系已经，“泛的应用。像其他阿片肽配基一 样，内源性配基的全长没有生物学活性。但是，当只有酰胺酶时，N O F Q 才能表现出与O R L I 充分地激动和高度的亲和力。短的N O F Q 片段是没有活性的，需要被激活其N 端四肽信号。 但是，与阿片肽受体其他的配基相比，N O F Q 苯丙氨酸残基对O R L I 受体激活不是专一的， 而普通的阿片肽受体激动剂的酪氨酸残基表现出重要的活性【7 们。O R L l 选择性肽配基与1 c 阿 片受体的配基相似，除需要通过正电荷残基的延长部分定位以外，还需要增加C 末端酰胺化 保护肽酶a 。 O R L I 的配基主要药效特点是：具有高亲和力和高效功能，其基本结构特征包括：一个 含有质子化氮元素的核心圈，一个远端氮杂环基团，在氮元素上游有一个亲脂部分至少有三 个碳氢键受体基团。根据此
