中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 牛、羊口蹄疫免疫技术的研究 何家惠1 ，何孔旺1 ，王继春1 ，倪艳秀1 ，吕立新’， 王伟峰2 ，杨瑛2 ，袁日进2 ，张宗军2 ，张正岚3 ，臧鹏伟3 ( 1 江苏省农科院兽医所：2 江苏省畜牧兽医总站：3 南京市畜牧兽医站 目前，口蹄疫在世界范围内依然广泛存在，特别近两年来，在一些国家又有大规模的爆发和流行，造 成巨大的经济损失和国际影响疫苗接种是预防该病的主要措施之一，但由于对E l 蹄疫的免疫机制的了解 不够清楚及E l 蹄疫疫苗质量问题，目前还无法完全控制该病本试验就目前国内现有疫苗，应用间接血凝 试验( I H A ) 与细胞中和试验平行监测牛、羊口蹄疫疫苗免疫后血清中抗E l 蹄疫病毒的抗体消长情况，为 制定合理的免疫程序寻找科学依据，从而有效提高疫苗的免疫效果，同时确定临床检测抗体快速有效的方 法 1 材料与方法 I ．1 试验动物 1 ．I ．i 奶牛：先后在南京市仙林、栖霞、农科院三个奶牛场，在整群防疫后，随机抽样4 0 头黑白花奶牛， 认定牛号，每隔2 0 天左右采集血清样品，待检 I ．I ．2 波尔羊、黄淮自山羊杂一代成年母牛2 0 头，杂二代2 月龄羔羊2 0 头。
1 ．2 疫苗：牛O 型口蹄疫灭活疫苗，由中牧公司兰州生物药厂提供，批号为2 0 0 0 0 2 2 4 、2 0 0 0 i 0 1 5 犊牛每头2 m l ，成年牛每头3 m l ，羔羊每只I m l ，成年羊每只2 m l ，均肌肉注射 I ．3 诊断液：E l 蹄疫O 型正向血凝诊断液，阳、阴性血清，均为兰州兽医所生产批号2 0 0 1 0 3 0 i 、 2 0 0 1 0 5 3 0 两批 I ．4 细胞及种毒：细胞为本组繁殖的B H K 2 1 传代细胞，牛、猪“O ”型细胞培养毒，均为本室保存毒 株 I ．5 方法 1 ．5 ．1 奶牛免疫：第一组整体牛群首免后间隔2 0 天，进行第二次免疫；第- - ! l l Z ．免后4 个月进行第三 次免疫；第三组三免后间隔2 0 天实行第四次免疫，每次3 m 1 1 只肌注各组免疫后每隔3 0 天左右采血一 次，检测抗体效价 I ，5 ．2 羊免疫 第一组，杂一代羊采取首免后间隔2 0 天进行二免，每次2 m l ／头肌注 第二组，杂二代羔羊初免I m l ／头肌注，间隔2 0 天再进行二免，2 m l ／头肌拄，免后间隔3 0 天左右 采血一次，检测抗体效价。
1 ．5 ．3 正问血凝试验，按兰州所提供说明书进行 1 ．5 ．4 细胞中和试验：分别用“O ”型牛细胞毒和猪细胞毒与采集到的羊、牛免疫血清在B H K 2 I 细胞上 作微量中和试验同时设立相对应的对照组，均于3 7 ℃水浴作用1 小时后，以0 ．i m l 接种于细胞板中， 接种量中含病毒量为1 0 0 T C I D 5 0 ，血清稀释度分别为1 ：8 、1 ：3 2 、1 ：1 2 8 、I ：5 1 2 、1 ：2 0 4 8 ，吸附I 小 时后加入无B S 的M E M 培养液，于3 7 ℃C 0 2 培养箱中培养4 8 小时后观察结束 2 结果 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 2 ．1 牛口蹄疫灭活苗免疫试验结果见表1 I H A 抗体滴度 组别免疫后时间检测数合格数合格率 ≤1 ：6 41 ：1 2 81 ：2 5 6≥1 ：5 1 2 二免后1 2 天1 9 头 31 5 ．7 ％1 63 第 3 5 头 3 51 0 0 ％3 5 二免后5 2 —6 0 天 —— 组 二免后8 5 天 1 0 头 99 0 ％122 5 二免后1 2 0 天1 2 头 65 0 ％642 第 三免后6 0 天1 1 头 98 1 ．8 ％245 二 组 三免后1 1 7 天 1 0 头 33 0 ％721 第 四免后3 0 天8 头 81 0 0 ％ 26 —— = 四免后6 4 天 1 1 头 1 1 1 0 0 ％ 47 组 四免后1 2 6 天 1 3 头 75 4 ％652 2 ．2 羊口蹄疫灭活苗免疫试验结果见表2 。
I H A 抗体滴度 组别免疫后时间检测数合格数合格率 ≤1 ：6 41 ：1 2 8l ：2 5 6≥1 ：5 1 2 成 二免后2 0 天7 只1 只 1 4 ％6 1 正 二免后5 1 天 7 只7 只 1 0 0 ％6l 茔 二免后8 2 天7 只7 只 1 0 0 ％313 组 二免后1 1 3 天7 只7 只 1 0 0 ％214 羔 二免后1 3 天7 只3 只 4 2 ．8 ％43 羊 组二免后4 3 天7 只7 只 1 0 0 ％2l4 2 ．3 口蹄疫抗体不同检测方法结果比较见表3 方法血清样品猪源细胞毒牛源细胞毒方法效价( L 9 2 ) 兰21 ：6 41 ：6 4 8 由 茔31 ：3 21 ：3 2 血凝 7 和 芏51 ：3 21 ：3 2抑制 7 试 验 牛1 1 ：1 0 2 41 ：2 0 4 8试验1 1 牛9 1 ：3 21 ：1 2 89 0 5 9 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立2 0 周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 3 小结与讨论 3 ．1 牛口蹄疫疫苗各组免疫试验结果表明，初次二免3 0 天后血凝抗体平均效价仅有1 9 4 ．8 1 ，6 0 天达到 最高水平1 9 8 ．2 7 ，9 0 天后开始下降为1 9 7 ．4 ，1 2 0 天下降到1 9 6 ．6 1 。
1 2 0 天后开始再次一次性免疫，3 0 天后抗体即达到1 9 6 ．2 5 ，6 0 天达到1 9 8 ．5 ，9 0 天下降至1 9 7 ．2 7 ，1 2 0 天下降到1 9 5 ．9 二次性免疫，3 0 天可以达到1 9 7 ．7 5 ，6 0 天到达顶峰I g l 0 ．8 6 ，9 0 天下降到1 9 8 ．1 ，1 2 0 天下降到1 9 6 ．7 即牛的口蹄疫 灭活苗免疫，首次二次免疫后到1 2 0 天抗体效价下降到1 9 7 以下，必须再次免疫再次免疫，二次性免疫 三个月内抗体效价明显高于一次性免疫，但到1 2 0 天时均下降到1 9 7 以下，因此建议牛的口蹄疫灭活苗免 疫程序为，牛一年需免疫三次，在首次二次免疫后，每隔4 个月再行一次性免疫即可 3 ．2 成年羊免疫组二次免疫2 0 天后抗体达到1 9 4 ．6 ，到1 2 0 天仍具有较高抗体水平1 9 8 ．7 ，2 月龄羔羊 组两次免疫2 0 天后，抗体上升较快达到1 9 7 ，到6 0 天已达到1 9 8 ．7 免疫后2 0 天，成年羊与羔羊抗体 上升幅度的差异较大，除了不同年龄的羊免疫反应敏感性有差异外，不同批次的诊断液质量标准有差异， 也是一个重要因素。
但可以看出，成年羊在首次二次免疫后每隔6 个月免疫一次较好，商品羊如能6 个月 出栏的话，一次性二免则可以达到保护 3 ．3 比较了间接血凝试验和细胞中和试验，检测牛、羊口蹄疫免疫血清抗体，羊血清，当血凝效价在1 9 8 和1 9 7 时，猪源细胞毒与牛源细胞毒的中和效价均为1 ：6 4 和1 ：3 2 ，未出现明显差异牛血清H A 效价在 I g l l 和1 9 9 时，猪源细胞毒中和效价分别为1 ：1 0 2 4 和1 ：3 2 ，而牛源细胞毒的中和效价则分别为1 ：2 0 4 8 和1 ：1 2 8 这一结果表明不同源细胞毒中和效价有一定差异，但牛，羊口蹄疫免疫血清抗体检测的结果表 明，间接血凝试验方法与细胞中和试验方法仍具有良好的相关性，且间接血凝试验方法简便，易行，更适 宜推广应用。