《拟南芥种子特异表达基因启动子分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《拟南芥种子特异表达基因启动子分析（86页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予 指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中 明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位 论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门 或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全 部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论 文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：鱼l 盘塾 导雌名：聱丛 日 期：坦鱼兰五旦a 符号说明 4 - M U ：4 一m e t h y l u m b e l l
2、i f e r o n e ，4 甲基伞形酮 4 - M U G ：4 一m e t h y l u m b e l l i f e r y l p - g l u c u r o n i d e ，4 一甲基伞形- B - 葡糖苷酸 A m p ：A m p i c i l l i n ，氨苄青霉素 c D N A ：C o m p l e m e n t a r y ，D N A 互补D N A C T A B ：C e t y l t r i m e t h y l a m m o l l o n i u mb r o m i d e ，十六烷基三乙基溴化铵 d d H 2 0 ：D i
3、 s t i l l e d a n td e i o n i z e dw a t e r ，重蒸水 D E P C ：D i e t h y lp y r o c a r b o n a t e ，焦碳酸二乙酯 D M S O ：D i m e t h e ys u l f o x i d e ，二甲基亚砜 d N T P ：D o o x y r i b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e ，脱氧核糖核苷三磷酸 d s D N A ：D o u b l e - s t r a n d e dD N A ，双链D N A E e o l
4、 i ：E s c h e r i c h i ac o l i ，大肠杆菌 E B ：E t h i d i u l nb r o m i d e ，溴化乙锭 E D T A ：E t h y l e n ed i a m i n et e t r a a c e t i ca c i d ，乙二胺四乙酸 K a n ：K a n a m y c i n ，卡那霉素 L B ：L u r i a b e r t a n im e d i u m ，L B 培养基 M O P S ：3 - ( N m o r p h p l i n o ) p r o p a n e s u l f o n
5、i c ，3 - N 吗啉代丙磺酸 M S ：M u r a s h i g ea n dS k o o gm e d i a ，M S 培养基 N O S ：N o p a l i n es y n t h a s e ，胭脂碱合成酶 N P T I I ：N e o m y c i np h o s p h o t r a n d f e r a s eI I ，新霉素磷酸转移酶I I P B S ：S o d i t u np h o s p h a t eb u f f e r ，磷酸钠缓冲液 P C R ：P o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i
6、 o n ，聚合酶链式反应 R N a s e A ：R i b o n u c l e a s eA ，核糖核酸酶A S D S ：S o d i u md o d e c y ls u l f a t e ，十二烷基硫酸钠 T E ：T r i s H C I ：E D T Ab u f f e rT r i s H C I ，E D T A 缓冲液 T r i s ：T t r i s h y d r y x y m e t h yl a m i n o m e t h a n e ，三羟甲基氨基甲烷 X g a l ：5 - B r o m o - 4 一c h l o r o 一3
7、一i n d o l y l p D - g a l a c t o s i d e ，5 溴一4 一氯- 3 - 吲哚p D 半 乳糖甘 p G U S ：p g l u c u r o n i d a s e ，t 3 一葡糖醛酸酶 l 3 6 6 8 8 8 9 1 2 1 3 油棕7 S 球蛋白启动子9 1 2 1 4 棉花a 球蛋白B 基因启动子9 1 2 1 5 醇溶谷蛋白启动子9 1 2 1 6 水稻谷蛋白1 基因启动子。1 0 1 2 1 7U s P 启动子10 1 2 1 8 水稻球蛋白启动子1 0 1 2 1 9 玉米球蛋白启动子1 1 1 2 1 1 0g b s s
8、l 种子特异启动子1 1 1 2 1 1 1S B E l 启动子。1 1 1 2 1 1 2 A G P 小亚基基因启动子1 1 1 2 1 1 3F A D 2 基因启动子。1 2 1 2 1 1 4 岖1 基因启动子1 2 1 2 1 1 52 S 清蛋白基因启动子1 2 1 2 1 1 6 云扁豆蛋白基因启动子1 2 1 2 2 种子特异启动子的应用1 2 1 2 3 种子特异启动子的结构特点1 4 1 3 启动子的生物信息学研究1 6 1 3 1 生物信息学的研究意义1 6 1 3 2 启动子顺式调控元件的生物信息学分析1 7 1 3 2 1 潜在已知顺式调控元件的分析1 8 1 3
9、 2 2 未知顺式调控元件的预测。1 8 1 3 2 3 识别结果的处理 1 3 3 生物信息学与实验结合 1 4 研究目的与意义。 2 材料与方法 2 1 材料 2 1 1 植物材料 2 1 2 植物材料培养与处理 2 1 3 菌株和载体 2 1 4 酶与各种生化试剂 2 1 5 实验引物 2 2 实验方法 2 2 1 网络资源及数据库 2 2 - 2 植物表达载体的构建 2 2 2 1 拟南芥基因组D N A 的提取( 小量法) 2 2 2 2 种子特异启动子序列的扩增。 2 2 2 3 凝胶电泳中D N A 片段的回收 2 2 2 4D N A 片段与克隆载体的连接 2 2 2 5 大肠
10、杆菌感受态细胞的制备3 4 2 2 2 6 大肠杆菌细胞的转化3 4 2 2 2 7 质粒D N A 的提取3 4 2 2 2 8 克隆载体的酶切鉴定3 6 2 2 2 9 拟南芥表达载体的构建3 6 2 2 3 植物表达载体的转化3 7 2 2 3 1 根癌农杆菌G V 3 1 0 1 感受态细胞的制备一3 7 2 2 3 2 冻融法转化农杆菌3 7 2 2 3 3 农杆菌的培养3 7 2 2 3 4 农杆菌介导转化拟南芥。3 7 2 2 3 5 转基因拟南芥的鉴定3 8 2 2 4 转基因植物的G U S 表达分析。3 8 2 2 4 1 转基因拟南芥植株G U S 组织化学染色分析3 8
11、 2 2 4 2 转基因拟南芥植株G U S 基因表达的定量分析3 9 2 2 5 种子特异基因内源转录水平表达情况4 0 2 2 5 1T I U Z O L 法提取I 斟A 4 0 2 2 5 2 去除基因组D N A 4 0 2 2 5 3 对蛆反转录4 1 2 2 5 4r e a l t i m e P C R 检测。4 1 3 结果与分析。4 3 3 1 拟南芥种子特异表达基因的信息学分析4 3 3 1 1 种子特异表达基因的获得、筛选4 3 3 1 1 1G e n e v e s t i g a t o r 芯片数据获得拟南芥种子特异表达基因4 3 3 1 1 2U n i G e n e 去除假阳性基因4 4 3 1 2 种子特异表达基因启动子序列分析4 4 3 2 启动子实验分析4 5 3 2 1 拟南芥转化载体的构建4 5 3 2 2 转基因拟南芥植株的获得4 5 3 2 3 转基因拟南芥组织化学染色4 6 3 2 4 转基因拟南芥G U S 活性的测定4 7 3 - 3 基因内源表达分析4 8 3 4 启动子缺失分析结果4 9 3 4 1 启动子缺失载体构建、转基因植株获得
