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1、大孔吸附树脂用于川草乌中总生物碱的分离提取 杨桦邓晓静易红 中国巾医研究院中药研究所1 0 0 7 0 0 ) 大孔吸附树脂是 一 类有机高聚物吸附剂， 其吸附作用是6过农面吸附、 表面电性或形成氢键等， 现广泛 应用于天然产物的分离制川、 草乌常合用于中药处方之中， 其主要有效成分为乌头类生物碱_应用大孔 吸附树脂分离提取川、 草乌中的乌 头类总生物戚尚末见报道为了 提高产品质量， 减少服用剂量， 我们用正 交设计法优选了 应用大孔树脂分离提取制川、 草乌中乌头类总生物碱的I _ 艺条件 1 实验材料 1 . 1 仪器、 材料与试f, ; U V - 7 5 4 紫外叮见分光光度i 伙 r
2、海第 二 分析仪器厂) ; 乌头碱标准品: 含量测定用. 购于中国药品生物 制品检定所; 制川乌、 制草乌饮片购于北京市药材公司其他试剂均为分析纯大孔吸附树脂型号与来源: D 一 1 0 1 型, D一 2 0 1 型( 天津制胶厂) ， A 13 一 8 型( 天津南开大学化工厂) , x .A D 一 7 型 美国罗门哈斯公司) 1 . 2 试剂的配制 1 . 2 . 1 乌 头碱标准溶液 精密称 取乌头碱标准品1 2 . 5 m g . 置5 0 . 1 量瓶中， 加0 . 0 1 n w l / L H C l 使溶解， 并加至 刻度 ， 摇匀。 1 . 2 . 2 p H 缓冲剂(
3、p H 3 . 0 5 ) : 精 密称取无水乙 自 鲜 内 。3 g ， 加适量水 溶解后， 加冰 醋酸1 1 . 2 m 1 ， 加水至1 0 0 0 m 1 混匀 用p H 计测 定该济液的p H 值为3 . 0 5 1 . 2 . 3 0 . 1 %澳甲酚绿溶液: 精密称取澳甲酚绿2 0 0 m g , 用O . O .S m o l / l . N a O H溶液3 . 5 m 1 研磨， 加水溶解至 2 0 0 m 1 , 滤过， 以 氯仿除去 脂溶性杂质 2 实验方法与结果 2 ， 1 样品溶液的制备 分别称取制川乌、 制草乌饮片各5 0 g 共置煎锅内. 加水浸泡半小时 煎煮两
4、次( 沸腾后， 控制台6 0 C. 保 持微沸) ( 第一煎: 水1 2 0 0 m 1 , 2 h ; 第二煎: 水 1 0 0 0 . 1 , 1 . 5 h ) 一水煎液过滤后合并， 放置过夜， 离心半小时( 2 5 0 0 ) 取h 清液 调节体积至8 0 0 n il , 即得8,1/g样品溶液A , 2 . 2 含量测定方法 2 . 2 . 1 标准曲线的制备 精密量取乌头碱标准液0 . 2 , 0 . 4 . 0 . 6 , 0 . 8 , 1 . 0 , 1 . 2 m l ， 分别置 ( fi分液漏斗( I 0 0 r a ) 中， 加乙酸盐缓冲液5 . O n il 与澳甲
5、酚绿指示液2 . 0 m 1 , 加蒸馏水使总体积达列 1 0 . 0 . i , 摇匀。丙精密加人氯仿 1 0 . 0 m 1 ， 充分振摇3 n il n , 静置1 h 后， 分取氯仿液， 用干 燥滤纸过滤， 弃去初滤液， 收集续滤液至已放人。 . 5 8 无 水硫酸钠的试管中， 放置半小时， 月 1 l 1 v 一 7 5 4 紫外可见分光光度1 十 ， 4 1 6 ,-波长处测定吸收度， 以蒸馏水同法 操作， 所得氯仿液 作为空白 片 算回 归方程: A 二 。 0 0 2 8 6 0 - 0 . 0 3 0 1 3 , , 二 0 . 9 9 9 4 , 乌头 碱含量在5 0 -
6、3 0 0 1 , g 内 符合比尔定律。 2 . 2 . 2 样品测定方法: 提取; 残清以少量 水( 4 , l ) 溶解， 置 分液漏牛 中， 并以浓氨水( 1 m 1 ) 调p H值， 至1 0 一 I 1 , 用氯仿萃取5 次( 氯仿用量依次为1 0 m l , 1 0 . 1 , 1 0 . 0 , 8 n il , 8 m 1 )收集氯仿液至蒸发皿中并水浴蒸下， 残渣以。 . O l m l / L H C I 溶解至 1 0 m 1 容量瓶中、 并加此酸至刻度. 混匀:得样品液 B ,测定: 精密量取样品液 B 2 r n l ， 按标 准曲线方法操作， 测定总生物碱含量。 2
7、 . 3大孔吸附树脂的预处理和再生方法 2 . 3 . 1 大孔吸附树脂预处理: 大孔吸附树脂D- 1 0 1 型, n一 2 0 1 型用药用乙醇洗至流出液与水1 : 2 混合不产 生棍浊， 改用大量水洗， 水浸泡备 用 大孔吸附树脂A B - 8 型用丙酮浸泡数大， 装柱啥用丙酮洗至流出液与水混合不产生棍浊， 改用大量水 洗， 水浸泡备用。 大孔吸附树脂 X A 0一 7 型装柱后用水洗至流出液体呈中性( 原碱性) ， 备用 6 6 9 2 . 3 . 2 大孔吸附树脂的再 生: 用0 . 0 5 m o l / L N a O H 洗至流出液无色， 用蒸溜水洗至中性后用9 5 %乙醇洗至
8、无 色， 以大量水洗去醇， 即可。 2 . 4 上柱与洗脱方法 2 . 4 . 1 上柱: 取预处理好的适宜树脂适量( 相当1 2 m 1 水体积) 装柱， 将上柱样品液用 1 m o l / L 及0 . 1 m o l / L H C l 或。 . 0 5 m o l / L N a O H 调至 预定P H 值( 以P H 计精确 测定) ， 精 密量取相当5 g 生药量样品液( 即4 0 m 1 ) 上柱( 流速 3 m 1 / n u n ) ， 以蒸馏水清洗杂质( 约3 5 m 1 )流速6 m l / m i n ) 再用预定浓度的乙醇5 0 n d 洗脱( 流速3 m 1 /
9、m i n ) 。收集 醇液至蒸发皿中， 水浴蒸干。 2 . 5 正交试验与 结果 由 方 差分 析 结果可 知 因素B ( 乙 醇 浓 度) 有非 常显 著差异 ( P 0 . 1 ) , 故最佳提 取工艺为A , B , C , , 即 采用A B - 8 型树 脂, 8 O %乙 醇浓度, p H 5 的 样品液 由于乙醇浓度为影响其提取效果的主要因素， 现将上因素水平表中3 3 %低浓度乙醇换为9 5 %高乙醉浓 度， 其他因素不变。 由方差分析结果可知， = v 1 素对提取工艺均无显著性差异( P 0 . 1 ) 结合极差分析结果， 最佳提取工 艺为A , B 3 C , ， 即仍
10、为A B - 8 型树脂, 8 0 %乙醇浓度, p H 5 的样品液 可见， 弱极性树脂、 较高浓度乙醇及弱酸性药液对川、 草乌总生物碱有较好分离提取效果、 由方差分析 结果可知， 三因 素对提取工艺 均无显著性差异、 由计爪及直观分析仍是A , B , C , ( A R - 8 型树脂, 8 0 %乙醇浓 度, p H 5 的样品 液) 为最佳提取方案。为更准确确定提取工艺， 安排因素水 平表如表7 ( 略) 。 重复试验: 取样品液A ， 以 最优提取方案( A B - 8 型树脂, 8 0 %乙醇, p H为5 的样品液) 为条件重复试验， 平行操作三份。试验结果较稳定， 数据可靠
11、2 . 6 大孔树脂柱不同洗脱部位的固体含量与总生物碱含量测定 路) 3 小结与讨论 3 . 1 本文经正交实 验法优选了 用大孔吸附树脂提取分离制川乌、 制草乌水煎液中乌头类总生物碱的各种工艺条 件， 如大 孔吸附 树脂的 类型和厂 家， 样品 溶液的p H 值， 以 及乙醇洗脱液的浓度 等。 实 验表明不同浓度的乙醇对乌 头 类总 生 物 碱 的 洗 脱 的 效 果 有 显著 影 响， 大 孔树 脂 的 类型 与 厂 家及P H 值也 有一 定 的 影 响。 3 . 2 从实验结果看， 应用本实验筛选出的最佳 艺条件. 可分离提取出样品溶液中8 5 %以上的乌头类生物 碱， 同时除去浸膏总
12、量8 2 %的水溶性固体杂质这将为含川乌、 草乌的中药复方制剂提供一种较好的精制 方法。对于提高制剂中有效成分的含量， 缩小服用量都具有重要意义。 3 . 3 本实验中乌头类总生物碱的含量测定方法采用了酸性染料比色法， 此方法已有多篇文献报道， 具有灵 敏、 准确、 重现性好的优点。但应注意消除微量水分的干扰。( 参考文献略) 大黄中结合葱醒的药动学 原国强常明魏凤玲( 中日友好医院1 0 0 0 2 9 ) 大黄具有促进肠蠕动和致泻作用的研究曾有报道， 实验均用生药的不同剂量提取液、 单一成分或总慈 酿衍生物， 由于产地和品种不同， 提取方法不同等， 产生促进肠蠕动和致泻作用的主要成分结合蕙醒的含量 差异较大， 如不测定结合蕙酿的含量进行实验， 难以确定生药最小有效剂量， 最大药效强度及半效剂量等。 本实验通过研究大黄中不同剂量的结合葱酿对小鼠的促进肠蠕动和致泻作用， 探讨其半效剂量和量 一效、 时一 效关系， 并测定主要药动学参数。 1 实验材料 1 . 1 动物 昆明小鼠， 雄性， 体重1 8 - 2 0 g ， 北京医科大学实验动物中心提供。 1 . 2 药品 结合蕙醒由 本院药学部提供( 从大黄 中提取) ， 含量测定按文献方法。 均炭末0 . 0 5 8 W 和。 . 0 2 以 m l 西黄 6 7 0
