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1、山东师范大学硕士学位论文 学号：2008021118 姓名：张小刚 联系电话：0531-86180143，15120054756 E-mail：shuijingdexiao552001 所在学院：生命科学学院 山东师范大学硕士学位论文 硕 士 学 位 论 文 论文题目 H19/IGF2H19/IGF2 印迹模型中印迹模型中 miRmiR- -483483 和和 miRmiR- -6 67575 功能研究功能研究 学科专业名称 细胞生物学细胞生物学 申 请 人 姓 名 张小刚张小刚 指 导 教 师 安利国安利国 教授教授 郑晓飞郑晓飞 教授教授 论文提交时间 20112011 年 4 4 月 5
2、 5 日 单单 位位 代代 码码 1044510445 学学 号号 20080211182008021118 分分 类类 号号 Q78Q78 研究生类别研究生类别 全日制硕士全日制硕士 3 独独 创创 声声 明明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 （注： 如没有其他需要特别声明的，本栏可空） 或其他教育机构的学位或证书使用过的 材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的 说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 导师签字：
3、 学位论文版权使用授权书学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 山东师范大学山东师范大学 有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被 查阅和借阅。本人授权 山东师范大学山东师范大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期：201 年 月 日 签字日期：201 年 月 日 目目 录录 摘要 1 Abstract 3 缩略词 6 综述 7 第一部分 H19/IGF2 印迹模型中 miR
4、NA 表达关系研究 13 实验材料 14 实验方法 16 结 果 20 讨 论 32 小 结 35 第二部分 miR-483 靶基因的筛选及功能研究 36 实验材料 39 实验方法 42 结 果 48 讨 论 53 小 结 55 结 论 56 附录 实验设备及仪器 57 参考文献 58 致 谢 63 攻读硕士期间发表的文章攻读硕士期间发表的文章 64 山东师范大学硕士学位论文 1 H19/IGF2H19/IGF2 印迹模型中印迹模型中 miRmiR- -483483 和和 miRmiR- -675675 功能研究功能研究 中文中文摘要摘要 H19/Igf2(胰岛素样生长因子 2， insuli
5、n-like growth factor 2)印迹基因隶属于一 个基因印迹群，分别位于人染色体 11P15.5，在进化上具有高度的保守性。H19 基因为母源性印迹基因，而 Igf2 基因为父源性印迹基因，两者相距 90kb，表达 调控相关，对个体的生长、发育及行为发展有重要的作用。H19/Igf2 印迹基因在 基因结构和类型上涉及到了编码基因、非编码基因、印迹基因、宿主基因、内含 子基因、microRNA 基因和反义基因，是研究基于 RNA 介导的遗传信息表达调 控网络模式的最佳模型之一。 首先， 为研究H19/Igf2印迹基因模型中miR-483、 miR-675及其宿主基因Igf2、 H1
6、9 之间在不同遗传背景、不同生理病理状态下共同的表达模式和表达调控规 律，我们选取各种不同的细胞系，同时利用不同实验手段，检测分析上述各基因 之间的表达调控关系，建立其表达调控模型。其次，本研究同时关注了 miR-483 的靶基因的预测和筛选， 筛选获得了 miR-483 的一个靶基因PDGFB (血小板来 源的生长因子 ，platelet-derived growth factor beta polypeptide)，为下一步继续研 究 miR-483 的功能以及调控奠定基础。 取得的主要进展有： 1Igf2 及 H19 基因除在少数细胞系中皆低表达外，在多数细胞系中其表达 呈拮抗关系；而
7、miR-483 及 miR-675 在各细胞系中的表达与其宿主是协同一致 的。 结果显示， Igf2 基因在 HEK-293T、 A549 细胞中表达相对较高， 而在 HepG2、 HeLa、 HCC-Lm3及BEL-7402细胞中表达水平较低； H19基因在HepG2和HeLa、 HCC-Lm3 及 BEL-7402 细胞中表达相对较高， 而在 HEK-293T 和 A549 细胞中表 达水平较低；而在 K562 细胞中两者皆低表达；miR-483 及 miR-675 在各细胞系 中的表达与其宿主是协同一致的。 2miR-483 很可能参与 IGF2 信号通路介导的肿瘤细胞的增殖和凋亡调控。
8、 结果显示，Chromeceptin 处理 HEK-293T、A549 和 HepG2 细胞 6h 后，IGF2 与 miR-483 在各细胞中表达变化不一致，IGF2 在各细胞中的表达水平无明显变化， 而 miR-483 则表达明显下调。Chromeceptin 很可能通过抑制 IGF2 信号通路抑制 了 miR-483 的生成过程，从而使成熟 miR-483 的表达下调。 山东师范大学硕士学位论文 2 3miR-483 及 miR-675 表达会受其他因子的调控而与其宿主基因的表达不 一致。结果显示，CoCl2诱导 HepG2、HeLa 和 A549 细胞缺氧 24h 后，miR-483 及 miR-675 在各细胞系中的表达与其宿主基因 Igf2 及 H19 的表达皆不一致。 HepG2 和 HeLa 细胞中 H19 表达无明显变化， A549 细胞中 H19 的表达有所下调， 而各细胞中 miR-675 的表达明显上调；各细胞中 IGF2 表达皆下调，
