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1、G7 的P H结构域对P K C的作用 季少平 药立 故 张晓 光 苏 成芝 ( 第四军医大学生勃化学与分子生物学徽研室 西安 7 1 0 0 3 2 ) 目 的;以前我 们报告了C R P的P H结 构城基因的克隆与 表达。为 进一步 帅选和鉴 定 OF的P H 结构域的折 配休，明确P K C 在 盯 所介导的 信号转导中 作用. 我们纯化了 所 表达的融 合蛋白， 用以 检侧C A ， 的PH 结 构域与P K C 的给 合及对滩 c 洁性的 形响，以 期 阐 明P K C 与G R P 之 间 的 担 醚关 系 及P K C 在 介导 信 号 转 导 中 所 起 的 im 节 作用 方
2、法:以 谷腌 甘肤 偶联的A e a r o s e b e a d s 纯化表达的P H 结构 城触合蛋白. 调整蛋 白 浓度 后， 利用W e s t e r n b l o t 检测I i i 结构域与P K C 的 结合， 在此基 础上并进一步检侧 了P H 结构域对P K C 活性的作用. 结果: w e s t e r n b l o t 检测到G S T G R P P H 结构 城与P K C 结合， 而单 纯表达的G S T 却 未被测到 与P K C 的结合. 与之相应，已 知的B t k 可与P K C 结合. P K C 活 性实验表明， C R P P H 结构域 对
3、 P K C 的活性其有下调 作用， B t k 对P K C 的活 性其有上调作 用， 而G S T 对 P K C 的活性无明显 影响。 结论:B t s和 G R P P H结构域在体外可与 P K C结合，其中 R F P H结构域对 P K C的 活性具有 抑制作用，而 B t k的 P H结构域对 P K C 的活性 呈上训作用. 表明 P K C可能对 R a s - R a f - M A P K 信号 系统具有调 节作用， 但其具体的调节 机制尚 待研究。 相对而言， G U P H 结构域对 作为信号 枢纽的P “ 的活 性抑制是否具有 生理 意义， 生理意义 何在。 都有特进 一步研究.
