微生物检验 第十二章 真菌.

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1、真 菌真 菌 有细胞壁、典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶有细胞壁、典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶 的真核细胞型微生物。细胞质内有完整的细胞器。的真核细胞型微生物。细胞质内有完整的细胞器。 原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较 原核原核细细细细胞型微生物 胞型微生物 真核真核细细细细胞型微生物胞型微生物 细细细细胞核胞核结结结结构构 核膜 无 核膜 无 有有 核仁 无 核仁 无 有有 分裂方式 分裂方式 主要以二分裂 有 主要以二分裂 有丝丝丝丝分裂，减数分裂分裂，减数分裂 细细细细胞胞质结质结质结质结 构构 质质质质膜 膜 常缺乏固醇 常有

2、固醇常缺乏固醇 常有固醇 内膜 内膜 较简单较简单较简单较简单 ，有中介体 复，有中介体 复杂杂杂杂，有内，有内质质质质网和高网和高尔尔基基 体体 核糖体 核糖体 70S 80S 70S 80S 呼吸系呼吸系统统统统 质质质质膜或中介体 膜或中介体 线线线线粒体粒体 Dimorphism Dimorphism （二相性真菌）（二相性真菌） 机体内寄生37 UnicellularUnicellular MulticellularMulticellular 含动物蛋白培养基 yeast 沙保氏培养基25 普通培养基25 mold 真菌繁殖结构，一条菌丝可生成 多个孢子 Morphology of

3、SporeMorphology of Spore 孢 子 芽 胞 作用真菌繁殖结构 细菌休眠结构， 抵御不良环境 低抗力 不强，加热6070 短时间即可死亡 强，有的可耐 100数小时 CategoriesCategories of spore of spore sexual spore:sexual spore: asexualasexual sporespore 分生孢子 叶状孢子 孢子囊孢子 芽生孢子 厚膜孢子 关节孢子 大分生孢子 小分生孢子 芽生孢子 厚膜孢子 关节孢子 孢子囊孢子 标本标本（ （1 1）皮肤的角质性物质）皮肤的角质性物质 （2 2）各种分泌物和排泄物）各种分泌物和排

4、泄物 （3 3）血液和体液）血液和体液 （4 4）脓汁及渗出物）脓汁及渗出物 （1 1）采集的标本要适宜）采集的标本要适宜 （2 2）在用药前采集标本）在用药前采集标本 （3 3）采集的标本量要足）采集的标本量要足 （4 4）严格无菌操作 ）严格无菌操作 （5 5）采集的标本立即送检 ）采集的标本立即送检 注意 1.1. 镜检真菌形态镜检真菌形态 2.2. 真菌抗原检测真菌抗原检测 3.3. 真菌分离培养与鉴定真菌分离培养与鉴定 4.4. 真菌核酸检测真菌核酸检测 5.5. 真菌毒素检测真菌毒素检测 实验室检验 癣病标本多用癣病标本多用KOHKOH湿片检查法湿片检查法 意义意义 判断某些真菌种

5、的致病性等判断某些真菌种的致病性等, ,如皮肤癣菌、曲霉等如皮肤癣菌、曲霉等 。 直接镜检直接镜检阳性阳性表示：表示： 有诊断意义。有诊断意义。 看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌 的属或种。的属或种。 有假阳性结果。有假阳性结果。 局限性：局限性： 阴性结果不能排除真菌感染；阴性结果不能排除真菌感染； 常用的染色方法常用的染色方法 常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色 ，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞对检测

6、骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞 氏染色或姬氏染色后镜检。氏染色或姬氏染色后镜检。 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染 色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色 （二）、真菌抗原检测（二）、真菌抗原检测 白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖 荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原 常用的方法有胶乳凝集试验、常用的方法有胶乳凝集试验、ELISAELISA、半定、半定 量放射免疫法量放射免疫法 （三）、真菌的分离培养（三）、真菌的

7、分离培养 真菌的培养特点：三低两高真菌的培养特点：三低两高 真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法 平皿培养平皿培养 大试管培养大试管培养 玻片培养玻片培养 菌落性质菌落性质：酵母菌还是霉菌酵母菌还是霉菌 菌落大小菌落大小：病原性真菌菌落小，而条件致病原性真菌菌落小，而条件致 病性真菌菌落大病性真菌菌落大 致病性真菌菌落下沉，有时使致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开培养基开 裂裂；污染性真菌菌落不下沉；污染性真菌菌落不下沉, ,很少引起开裂很少引起开裂 。 菌落颜色菌落颜色 病原性真菌颜色淡，病原性真菌颜色淡， 污染真菌污染真菌 颜色深；颜色深； 菌落的性状是

8、鉴别真菌的重要特征菌落的性状是鉴别真菌的重要特征 真真 菌菌 鉴鉴 定定 1.1.糖糖( (醇醇) )类发酵试验类发酵试验 2.2.同化碳源试验同化碳源试验 3.3.同化氮源试验同化氮源试验 菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远 不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要 时将菌种送有关单位鉴定。时将菌种送有关单位鉴定。 核酸检测核酸检测 毒素的检测毒素的检测 动物试验动物试验 1.1.多烯类抗生素，如两性霉素多烯类抗生素，如两性霉素B B、制霉菌素、制霉菌素、 曲古霉素等。曲古霉素等。 2.2.

9、吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、 伏立康唑、克霉唑、益康唑等。伏立康唑、克霉唑、益康唑等。 3.3.其他类如氟胞嘧啶。其他类如氟胞嘧啶。 抗真菌药物分类抗真菌药物分类- -化学结构分类化学结构分类 临床标本 直接检查 检测抗原 直接镜检 固定标 本染色 墨汁负 染色法 KOH 法 毛发 指甲 皮屑 脑脊液 分离培养 沙氏培养基 2537 观察菌落 分子生物学检测 动物实验 检测抗体 病理检查 镜检、生化反应 小结小结 真菌的致病性 真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性 标本采集注意事项 常用的检查方法：显微镜检查、分离培养 、生化实验 思考题：思考题

10、： 1.简述真菌的致病性特点。 2.真菌标本采集是有哪些注意事项？ 3.形态学检查和培养在真菌检查中的意义。 （一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。 （二）熟悉浅部真菌感染的种类 目的要求 皮下组织感染真菌 毛癣菌属 表皮癣菌属 小孢子菌属 表面感染真菌 皮肤癣真菌 糠秕马拉色菌 着色真菌 孢子丝菌 位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。 因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反 应。 嗜脂性酵母样菌 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur) 症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑） 微生物检验微生物检验 1直接显微镜检查可采用透明胶带粘贴 取材法，将

11、透明胶带直接贴于皮肤表面 ，数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜 检或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可 见孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚 壁，芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短 ，呈腊肠样。 2分离培养与鉴定 毛毛 癣癣 菌菌 属属 毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门丝孢菌目 丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动 物的感染。 临床上常见的有 红色毛癣菌(trichophyton rubrum) 须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌) 许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌) 紫色毛癣菌（T.violaceum） 断发毛癣菌（T.tonsu

12、rans） 毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色, 表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。 大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有 螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状 微生物检验微生物检验 1标本采集采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲 近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。 2直接显微镜检查 皮屑10%KOH液；指甲25%KOH/25%NaOH处理 镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子 。 皮肤癣菌感染的毛发 三.分离培养 标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液 内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙 氏琼脂斜面25培养观察菌落特征。 四.其他鉴定试验 毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验 毛发穿孔试验毛发穿孔

13、试验 将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏 水和23滴10酵母浸膏液的平皿内，高 压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内， 置25孵育四周，每周检查一次，每次取 数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后 ，置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹 者为阳性，否则为阴性。 药物敏感试验药物敏感试验 对灰黄霉素、伊曲康唑等药物敏感。 表表 皮皮 癣癣 菌菌 属属 表皮癣菌属（Epidermophyton）目前 只有一个种，即絮状表皮癣菌（ E.floccosum）, 能引起人类感染。 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌 ，可引起皮肤感染如股癣、足癣、体 癣、手癣和甲癣。 絮状表皮癣菌生物学性状絮状表皮癣菌

14、生物学性状 皮屑和甲屑经+10%KOH液消化 镜检 可见分枝断裂的有隔菌丝，少见孢子 培养后，菌落初为白色鹅毛状，以后 转变为黄色粉末状。镜下可见球拍状 菌丝、卵圆形或巨大棒状薄壁大分生 孢子，无小分生孢子，在陈旧培养物 中可见厚膜孢子。 表皮癣菌：菌落初为 白色鹅毛状,以后变 为黄绿色粉末状。粗 棒状薄壁大分生孢子 。菌丝球拍状 小小 孢孢 子子 菌菌 属属 我国常见的有铁锈色小孢子菌、石膏 样小孢子菌和狗小孢子菌等。 小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感 染甲。 小孢子菌生物学特性小孢子菌生物学特性 皮屑和毛发+10%KOH处理 镜检，皮屑中 有分枝断裂菌丝，在毛发中呈现小孢子镶嵌 的鞘包裹着发干。 在沙氏培养基中可见白色、棕黄色或黄褐 色、粉末或绒毛状菌落。镜下可见梳状、球 拍状或结节状菌丝，卵圆形小分生孢子、厚 壁梭形（纺锤形）大分生孢子。 小孢子癣菌：菌落为 灰色、橘红色或棕黄 色，厚壁大分生孢子 ，菌丝有结节状、梳 状和球拍状 毛癣菌属 表皮癣菌属 小孢子癣菌属 皮下组织真菌感染皮下组织真菌感染 主要有着色真菌和孢子丝菌 着色真菌感染发生在暴露部位，称着色真菌病 。卡氏枝孢霉和裴氏着色芽生菌。 申克孢子丝菌，属腐生性真菌，常因外伤接触 带菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子丝菌 下疳。此菌也可引起深部感染。是一种二相性 真菌。 着色真菌着色真菌 分生孢子：