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1、E f f e c to fp r e t r e a t m e n tw i t ha s t r a g a l u sp O l y s a c c h a r i d e so r e x t r a c tf r o mr a b b i ts k i ni n f l a m e db yv a c c i n i av i r u s f 0 i ni + t i o nt h e一。o fintrathecairi ne c t i o no nen e l l r o t o X l C l t y I n t r a t n e c a i t 0 l b u p i v
2、 a c a i n ei np r e g n a n tr a t s 课题来源：国家自然科学基金 专业名称 学位申请人 指导教师 答辩委员会主席 答辩委员会成员 麻醉学 崔睿 徐世元教授 古妙宁教授 招伟贤教授 施冲教授 杨承祥教授 肖晓山教授 黑子清教授 靳三庆教授 论文评阅人屠伟峰教授 李雅兰教授 刘克玄教授 20 10 年0 4 月20 日 -气。了罗-0瓠穗噌芗 l 系统并发症的发病率约为0 0 1 0 0 5 ，而产妇为O 5 8 O 9 2 。根据现有 报道资料分析，其产生原因可能为：麻醉相关因素：麻醉穿刺等操作过程巾 损伤中轴神经或脊髓；局部麻醉药神经毒性损伤；硬膜外腔血肿
3、或感染等； 产科相关因素：产妇分娩或剖宫产体位压迫、牵拉神经，胎儿等机械性因素压 迫产道；其它因素：体位、血管收缩药物、污染以及原因不明等。但其发生 是由其巾某一因素所决定，或为多种因素相互作用的结果目前仍尚不明了。其 中，妊娠分娩期间局部麻醉药阻滞效能敏感性和神经毒性是否改变成为麻醉学 与疼痛治疗学领域关注的重点。 关于妊娠分娩期间局部麻醉药阻滞效能敏感性和神经毒性的研究存在很大 争议。综合文献报道，神经电生理学方面研究认为妊娠与分娩增加局部麻醉药 的r f l 枢、巾轴、周围神经的阻滞效能敏感性和神经毒件作用，冈而减少对此类 药物的需要量。但也有少数研究者提出异议，他们认为妊娠只是引起扩散
4、屏障 和内源性镇痛系统的变化，而脊髓神经根轴突的电生理特件没有改变。而此后 中文摘要 在椎管内麻醉后所致神经系统并发症的调查发现，暂时性神经病学综合征 ( t r a n s i e n tn e u r o l o g i c a ls y n d r o m e ，T N S ) 在产妇中的发病率报道差异很大( 0 0 1 5 “ - - - 8 8 ) ，并认为有关分娩镇痛或剖宫产麻醉所致T h I S 的发生率与多种因素 相关，局部麻醉药的神经毒性作用仪为其中因素之一，女I I 排除其它因素，分娩 镇痛或剖宫产麻醉后T N S 的发生率并不高于非妊娠或分娩者。籍此可认为，目 前尚无充分
5、的病例或动物随机对照研究及大样本调查轻易对两种不同观念予以 否定或肯定，有待进一步深入研究与探讨，方能得到具有充分说服力的证据。 研究认为局部麻醉药脊神经毒性损伤机理与细胞凋亡有关。天冬氨酸特异 性半胱氨酸蛋白酶家族( c y s t e i n y la s p a r t a t es p e c i f i cp r o t e a s e ，c a s p a s e ) 是细胞凋亡 过程中最重要的蛋白酶。目前认为活化c a s p a s e 的途径主要有两条信号转导通路： 死亡受体通路系指细胞表面的死亡受体通过其细胞外结构域与相应的死亡配体 结合，将细胞外凋亡信号传人细胞内，激活c
6、 a s p a s e 8 基因，而后激活下游的 c a s p a s e 3 基因，最终启动细胞凋亡；线粒体通路则指氧自由基、钙超载等凋亡 刺激冈素使线粒体通透件增加，线粒体跨膜电位下降，释放细胞色素C ，后者激 活c a s p a s e 9 基因和下游的c a s p a s e 3 基冈，诱导细胞发生凋亡。死亡受体通路和 线粒体通路分别以c a s p a s e 8 和c a s p a s e 9 基冈的激活为特征。细胞凋亡是受细胞 内源性基因、酶类和信号转导途径调控的“瀑布式“ 激活过程，鞘内注入布比 卡因后脊神经细胞的凋亡及其信号转导机制是我们研究的主要方向。 产妇不同于
7、一般病人，对多数产妇而言，妊娠分娩足正常的生理过程，减 少和避免产后并发症、尤其是神经系统并发症的发生，对提高产妇产后生活质 量，显得尤为重要。目前关于局部麻醉药神经毒性损伤防治的研究尚未取得确 切效果。黄芪多糖( A s t r a g a l u sp o l y s a c c h a r i d e s ，A P S ) 是r f l 药黄芪的主要有效成分 之一，其不但具有清除自由基、抵抗脂质过氧化反应，有效减轻神经细胞的凋 亡的作用，而且还可以通过激活细胞免疫，升高I L 1p 水平而促进脊神经损伤后 的修复，对脊神经再生有一定作用。黄芪多糖能否减轻布比卡冈的脊神经毒性 损伤反应目前
8、暂未见研究报道。 牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液( E x t r a c tf r o mr a b b i t s k i ni n f l a m e db y 博士学位论文 v a c c i n i av i r u sf o ri n j e c t i o n ) 是用牛痘疫苗接种家兔皮肤，将发生炎症反应的皮肤 组织进行提纯后得到的非蛋白性生物活性物质，具有镇痛、免疫调节、改善植 物神经功能、促进神经轴突生长、促进雪旺细胞繁殖、拮抗缺氧缺血造成的神 经细胞损伤、拈抗谷氨酸等毒性物质造成的神经细胞损伤等作用。牛痘疫苗致 炎兔皮提取物能否减轻鞘内注入布比卡因的脊神经毒性损伤反应也未见研
9、究报 道。 本研究通过制备孕鼠鞘内注入布比卡因的模型，探讨妊娠分娩期间局部麻 醉药阻滞效能敏感性和神经毒性是否改变，鞘内注入布比卡因导致神经细胞凋 亡的信号转导通路，以及黄芪多糖和牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液预先给药 对布比卡因脊神经毒性的保护作用，为药物防治妊娠分娩期间局部麻醉药神经 毒件损伤提供一定实验依据。 第一部分鞘内注入布比卡因对孕鼠神经功能及背根神经节细胞c a s p a s e 8 和 c a s p a s e 9 基因的影响 目的比较孕鼠和非孕鼠鞘内注入布比卡因对神经功能及背根神经节细胞 c a s p a s e 一9 和c a s p a s e 8 基因表达的影响，探
10、讨妊娠分娩期间脊神经对布比卡因的 阻滞效能敏感性是否改变及其机制。 方法健康妊娠1 7 日及非孕雌性S D 大鼠，取鞘内置管成功的两种鼠各1 8 只，孕鼠体重3 5 0 - - 一4 0 0 9 ，非孕鼠体重2 0 0 2 2 0 9 ，完伞随机方法分成6 组( “ = 6 ) 。孕鼠对照组( P N 组) 与2 布比卡因孕鼠组( P 2 B 组) 及4 布比卡因 孕鼠组( P 4 B 组) ；非孕鼠对照组( N 组) 与2 布比卡因非孕鼠组( 2 B 组) 及 4 布比卡因非孕鼠组( 4 B 组) 。P N 与N 组：鞘内注射生理盐水3 0 ul ，其余4 组相应鞘内分别注入2 或4 布比卡
11、因3 0 ul 。鞘内注药后1 0 m i n 、2 0 m i n 、3 0 m i n 、 l h 、2 h 、4 h 、l d 、2 d 、3 d 和4 d 测定甩尾反应潜伏期T F L ，用最大效应百分比 M P E 表示，并进行下肢运动功能M F 评分。4 d 后各组大鼠行断颈处死，分离背 根神经节，W e s t e r nb l o t 分析c a s p a s e 8 和c a s p a s e 9 蛋白表达水平以及R T P C R 检测c a s p a s e 8 和c a s p a s e 9 m R N A 的表达。 采用S P S S l 3 0 统计学软件进
12、行分析，计量资料以均数标准差( 戈J ) 表示， 中文摘要 置管前后T F L 组问比较采用单因素方差分析，置管前后的比较采用配对，检验。 M P E 值比较采用重复测量设计的方差分析。c a s p a s e 。8 ，9 蛋白和m I 喇A 表达比较 采用单因素方差分析，多重比较采用B o n f e r r o n i 法( 方差齐) 或D u n n e t t T 3 法( 方 差不齐) 。运动功能评分以中位数( 第1 0 ，9 0 位点百分位数) 表示，多组比较采 用K r - u s k a l W a l l i s 检验。P 0 0 5 ) ，见表4 1 。 4 3 第四部分
13、牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液预先给药对孕鼠鞘内注入布比卡因脊神经毒性 的影响 2 2 各组大鼠鞘内注药后M P E 的比较 各组大鼠鞘内注药后对T F L 的最大效应百分比M P E 的影响，见表4 2 和 图4 1 。经重复资料的方差分析，显示组间大鼠M P E 存在差异( F = 2 2 3 2 9 ，P = 0 0 0 0 ) ，注药后M P E 随时间未发生显著变化( F = 1 5 6 9 ，P = 0 2 2 9 ) ，而分组 与时间之间存在交互作用( F - - 3 1 8 2 ，尸= 0 0 3 8 ) 。说明各组之间的差异在不同 时间点不一样，故有必要对每一时间点分别比较组间
14、的差别；进一步进行单独 效应分析发现：在1 d 时点，R 2 B 组和R 2 A 组M P E 高于N 组( P O 0 5 ) ，在2 d 5 d 之间R 2 B 组M P E 高于N 组和R 2 A 组( 尸 0 0 5 ) ，在2 d 和3 dR 2 A 组M P E 高 于N 组( 尸 0 0 5 ) ；各组内的不同时点进行比较，R 2 A 组大鼠M P E 在鞘内注药 后1 d 达高峰，然后呈下降趋势，而R 2 B 组大鼠M P E 在鞘内注药后持续增高至 5 d 。 2 3 各组大鼠多次鞘内注药后M F 评分的比较 实验过程中，各组大鼠均未出现运动功能障碍。 2 4 病理组织学观察
15、结果 N 组大鼠背根神经节细胞形态和结构基本正常。R 2 A 组有部分神经细胞萎 缩、空泡化。与N 组和R 2 A 组比较，R 2 B 组神经细胞萎缩、空泡化数量明显增 加。 2 5各组大鼠背根神经节细胞凋亡数量比较 与N 组和R 2 A 组比较，R 2 B 组凋亡细胞数量明显增加，差异有统计学意义 ( 氏O 0 5 ) ，见表4 3 。 2 6 各组大鼠背根神经节细胞c a s p a s e 9 阳性细胞数量的比较 与N 组和R 2 A 组比较，R 2 B 组c a s p a s e 9 阳性细胞数量明显增加，差异有 统计学意义( 氏0 0 5 ) ，见表4 4 。 博士学位论文 表4
16、1 各组大鼠置管前和置管后T F L 的比较( i s ，l = 6 ) T a b4 - 1T h et a i l f l i c kl a t e n c i e sb e f o r ec a t h e t e ra n da f t e rc a t h e t e r ( M e a n S D ，垆6 ) 石n 电 图4 1 各组鞘内注药后M P E 的比较( i s ，刀= 6 ) F i g4 - 1 T h em a x i m a lp o s s i b l ee f f e c t ( M P E ) i nt a i l f l i c ka f t e rt h ei n t r a t h e c a ld r u g s ( M e a n _ S D ，玎= 6 ) 4 5 最大效应百分比MPE) 第四部分牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液预先给药对孕鼠鞘内注入布比卡因脊神经毒性 的影响 表4
