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1、青海大学 硕士学位论文 高原鼢鼠和高原鼠兔心脏对低氧的适应机制 姓名：齐新章 申请学位级别：硕士 专业：动物营养与饲料科学 指导教师：魏登邦 20090401 青海大学硕士学位论文 摘要 I 摘要 为了探讨高原鼢鼠和高原鼠兔心脏对低氧环境的适应机制，以 Sprague-Dawley (SD)大 鼠为对照，称重计算三者的心脏/体重比(HW/BW)、右心室/左心室+室间隔重量比 RV/(LV+S)；应用免疫组织化学方法测定心肌微血管密度(MVD)；通过显微体视学技术比 较心肌线粒体的面数密度(NA)、体密度(VV)、面密度(SV)、比表面()；用分光光度法测定心 肌中的肌红蛋白(Mb)含量、乳酸(
2、LD)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活力；聚丙烯酰胺凝胶电泳观 察心肌 LDH 同工酶谱；用 real-time PCR 检验低氧诱导因子-1（HIF-1） 、Mb、血管内皮生 长因子 165（VEGF165） 、LDH-A 和 LDH-B 基因在心肌内 mRNA 水平的表达。结果显示： 高原鼢鼠和高原鼠兔 HW/BW 显著大于 SD 大鼠(P0.05） 。 （表 4 和表 5） 2.3 高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌 Mb 在 mRNA 水平的表达及其在心肌中 的含量 高原鼢鼠和高原鼠兔心肌中肌红蛋白含量无明显差异（P0.05） ，但二者均 显著高于 SD 大鼠（P0.05） ，但高原鼢鼠
3、显著高于 SD 大鼠（P0.05） 。高原鼢鼠心肌 线粒体比表面（）显著高于高原鼠兔和 SD 大鼠（P0.05） （表 11 和图 3） 图 3. 高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌细胞线粒体 A、B、C 分别代表高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌细胞，M：线粒体，Z：Z 线，7 500， 标尺1m FIG. 3. Mitochondria of cadiocyte of plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat In figure 3, A, B,
4、and C represent mitochondria of cadiocyte of plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae), and Sprague-Dawley rat respectively; M: Mitochondrion; Z: Z line; 7 500; scale bar=1 m. 2.6 高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌中 LDH 活力、LD 含量以及 LDH 同工 酶的差异 乳酸脱氢酶活力结果表明，两种高原动物尽管生存在相对低氧的环境中，但 心肌细胞糖酵解水平比大鼠低
5、，三种动物心脏中 H 亚基含量与 M 亚基的含量之 比， 高原鼢鼠最高， 大白鼠最低， 说明高原动物心脏供氧充足， 以乳酸脱氢为主。 青海大学硕士学位论文 第二章 高原鼢鼠和高原鼠兔心脏对低氧的适应机制 42 虽然，高原鼢鼠心肌细胞糖酵解水平比大鼠低，但乳酸含量显著高于高原鼠兔和 大白鼠，这可能是由于其它组织中产生的乳酸被运输到心脏进行氧化分解所致， 因为心肌组织是乳酸降解的主要场所（表 12 和图 4） 。 表 12 高原鼢鼠、高原鼠兔、SD 大鼠心肌中乳酸含量和乳酸脱氢酶活力的比较 Table 12 Comparison of the activity of LDH and the con
6、tent of LD in cardiac muscle among plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat 物种 Species 样本数 n LDH （U/mL） LD (mmol/L) Plateau zokor Plateau pika Sprague-Dawley rat 6 6 6 16.902.00a 20.552.46a 38.266.78b 0.570.06b 0.450.06a 0.480.02a Values are given as
7、 meanS.D. Means with different superscripts are statistically different in same rank (Duncons) test, =0.05. The values of means with superscript a are significantly bigger than that of b (P 0.05). 图 4. 高原鼢鼠(Myospalax baileyi)、高原鼠兔(Ochotona curzniae)和 SD 大鼠心肌组织 LDH 同工酶谱 1、2 和 3 分别代表高原鼢鼠(Myospalax bai
8、leyi)、高原鼠兔(Ochotona curzniae)和 SD 大鼠心 肌组织 LDH 同工酶谱 FIG. 4 Isoenzyme spectrum of LDH in cardiac muscle of plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat In figure 4, 1, 2, and 3 represent isoenzyme spectrum of LDH in cardiac muscle of plateau zokor (Myospal
9、ax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat respectively. 2.7 高原鼢鼠、高原鼠兔和高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌大鼠心肌 LDH-A 和和 LDH-B 在在 mRNA 水平的表 达 水平的表 达 青海大学硕士学位论文 第二章 高原鼢鼠和高原鼠兔心脏对低氧的适应机制 43 高原鼢鼠和高原鼠兔心肌组织中肌肉型乳酸脱氢酶 mRNA 含量显著高原 SD 大鼠，二者之间无明显差异（表 13 和表 14） 。高原鼠兔的心脏型乳酸脱氢酶 含量显著高于高原鼢鼠 （P0.05） ， 高原鼢鼠含量
10、显著高于 SD 大鼠 （P0.05） （表 15 和表 16） 。 表 13 高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌中 LDH-A 基因 mRNA 水平的表达 Table 13 The real time PCR results of LDH-A gene in heart of plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat LDH-A GAPDH Species No. Copy number LogSQCopy number LogSQ Normalized
11、 value 1 1400.00 3.146 160.00 2.204 1.43 2 1600.00 3.204 210.00 2.322 1.38 3 1100.00 3.041 140.00 2.146 1.42 4 2300.00 3.362 250.00 2.398 1.40 5 1900.00 3.279 180.00 2.255 1.45 Plateau zokor 6 1200.00 3.079 130.00 2.114 1.46 1 1600.00 3.204 360.00 2.556 1.25 2 1100.00 3.041 170.00 2.230 1.36 3 880.0
12、0 2.944 140.00 2.146 1.37 4 900.00 2.954 230.00 2.362 1.25 5 1500.00 3.176 280.00 2.447 1.30 Plateau pika 6 930.00 2.968 190.00 2.279 1.30 1 81.00 1.908 240.00 2.380 0.80 2 130.00 2.114 66.00 1.820 1.16 3 490.00 2.690 140.00 2.146 1.25 4 95.00 1.978 46.00 1.663 1.19 5 120.00 2.079 60.00 1.778 1.17 S
13、prague- Dawley rat 6 140.00 2.146 62.00 1.792 1.20 表 14 高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌中 LDH-A 基因 mRNA 水平的表达差异 Table 14 Comparison of the content of LDH-A mRNA in cardiac muscle among plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat Species n logCLDH-A/logCGAPDH Plateau
14、zokor 6 1.4230.031b Plateau pika 6 1.3050.052b Sprague-Dawley rat 6 1.1280.164a Values are given as meanSD. Means with different superscripts are statistically different in same rank (Duncans) test, =0.05. The values of means with superscript a are significantly less than that of b (P 0.05). 青海大学硕士学
15、位论文 第二章 高原鼢鼠和高原鼠兔心脏对低氧的适应机制 44 表 15 高原鼢鼠、高原鼠兔和 SD 大鼠心肌中 LDH-B 基因 mRNA 水平的表达 Table 15 The real time PCR results of LDH-B gene in heart of plateau zokor (Myospalax baileyi), plateau pika (Ochotona curzniae) and Sprague-Dawley rat LDH-B GAPDH Species No. Copy number LogSQCopy number LogSQ Normalized va
16、lue 1 640.00 2.806 160.00 2.204 1.27 2 250.00 2.398 210.00 2.322 1.03 3 340.00 2.531 140.00 2.146 1.18 4 550.00 2.740 250.00 2.398 1.14 5 520.00 2.716 180.00 2.255 1.20 Plateau zokor 6 310.00 2.491 130.00 2.114 1.18 1 4300.00 3.633 360.00 2.556 1.42 2 1500.00 3.176 170.00 2.230 1.42 3 990.00 2.996 140.00 2.146 1.40 4 2600.00 3.415 230.00 2.362 1.45 5 3500.00 3.544 280.00 2.447
