《骨肉瘤组织凋亡诱导因子与波形蛋白表达及其临床意义的探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《骨肉瘤组织凋亡诱导因子与波形蛋白表达及其临床意义的探讨（30页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、骨肉瘤组织凋亡诱导因子与波形蛋白表达及其临床 意义的探讨 E x I a n d ：l i n i c a ls i g n i f i c a n c eo fA I Fa n dVExDresslona n dC l l nI Mi 。n lO tAl M h u m a na s s o c i a t i o n 研究生： 高拯堑 导师：拯芏 二级学科：2 E 銎堂 论文课题起止时间：至Q ! ! 生垒旦= 2Q ! 至生至旦 中国医科大学( 辽宁) 20 12 年4 月 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果
2、。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同 工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：乏型蓉日期：兰! 兰墼塑! ! 蕴 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究 生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保 证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科 大学，且导师为通讯作者，通讯
3、作者单位亦署名为中国医科大学。学 校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密 内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： z 尘每塑：里 目录 一、摘要 中文论著摘要“l 英文论著摘要3 二、英文缩略语5 三、论文 前言”6 6翮吾” 研究对象与方法一6 结果”8 讨论l1 结论l3 四、本研究创新性的自我评价1 4 五、参考文献1 5 六、附录 综j 苤1 6 在学期间科研成绩2 5 致谢2 6 个人简介2 7 中文论著摘要 骨肉瘤组织凋亡诱导因子与波形蛋白表达
4、及其临床意 义的探讨 目的 探讨凋亡诱导因子( a p o p t o s i si n d u c i n gf a c t o r , A I F ) 与波形蛋白( v i m e n t i n ，V I M ) 的表达与骨肉瘤患者的年龄、性别、病程分级、肿瘤的体积、分化程度、肿瘤的 转移之间的关系，其中以 A I F V I M 两者之间的相互关系”以及“两种因子与肿瘤的 分级转移之间的相关关系”为研究重点。 方法 标本取自1 9 9 0 年1 月至2 0 1 0 年1 月在中国医科大学附属盛京医院骨科活 检及手术切除的组织共7 5 例，其中骨肉瘤4 5 例，骨软骨瘤标本3 0 例。所
5、有患 者术前未行放、化疗。骨肉瘤患者，年龄1 2 7 3 岁，中位年龄3 3 2 岁，平均3 8 2 岁；其中低度恶性，组织分化中等的G 1 期骨肉瘤标本1 5 例，高度恶性组织分化 差的G 2 期骨肉瘤标本3 0 例，所有病例术前均未化疗跟放疗。取良性的骨软骨瘤 3 0 例作为对照观察。 采用链霉素亲生物素一过氧化物酶免疫组织化学技术( S P 法) 作V I M 和A I F 抗原检测，用已知的A I F 和V I N 抗原阳性的宫颈癌癌组织作为阳性对照，用P B S 代替一抗作为阴性对照。石蜡切片经脱蜡和水化后，对组织抗原进行修复；每张切片 加2 滴过氧化酶阻断溶液，室温下孵育1 0 m
6、 i n ；后加一滴正常非免疫动物血清，室温 下孵育1 0 m i n ；除去血清，切片分别滴加抗A I F 抗体、抗V I M 抗体，4 “ 0 过夜；每张 切片加一滴生物素标记的二抗，室温下孵育1 0m i n ；然后加一滴链霉素菌抗生物素 2 过氧化物酶溶液，室温下孵育1 0 m i n ( 以上各步间均以P B S 充分振洗) ；滴加新鲜 配制的D A B 显色液，室温5m i n ，P B S 冲洗中止显色反应，苏木精衬染，逐级乙醇脱水 后二甲苯透明，中性树胶封片。 应用微波S P 免疫组化法，检测4 5 例骨肉瘤组织中的A I F 和V I M 的表达水 平，根据染色强度及显色肿瘤
7、细胞比例将染色结果分为“- ，+ ，+ + ”3 级：按切片中 细胞显色有无及深浅。评分：无显色为0 分，棕黄色为1 分，棕褐色为2 分。 根据显色肿瘤细胞的比例记分： 7 1 为3 分。 每例肿瘤的积分= - I - ，按积分高低分为：0 分为阴性( - ) ，1 “ - 3 分为弱阳性 ( + ) ，4 6 分为强阳性( + + ) 。统计学处理采用Z 检验相关分析。 勿七甲 = 口木 4 5 例骨肉瘤组织中A I F 和V I M 在骨肉瘤细胞中表达阳性率分别为 6 6 7 0 ( 3 0 4 5 ) 和7 3 8 1 ( 3 3 4 5 ) ，A l F 与V I M 在骨软骨瘤组织中
8、低表达；A I F 和V I M 在骨肉瘤组织中表达无显著相关性( P 0 0 5 ) ：A I F 与V I M 在骨肉瘤中的表达与性 别、年龄、病程、肿瘤体积、分化程度无关( P o 0 5 ) 。A I F 的表达与骨肉瘤瘤的 转移无关( P O 0 5 ) ，V I M 的表达与骨肉瘤的转移相关( P 0 0 5 ) A I Fa n dV I Me x p r e s s i o ni n o s t e o s a r c o m aW a sn o tr e l a t e dt os e x ，a g e ，p r o g r e s s ，d i f f e r e n t
9、i a t i o n ，l y m p hn o d e m e t a s t a s i s ( P 0 0 5 ) V I MW a sr e l a t e dt om e t a s t a s i s ( P O 0 5 ) V i m e n t i n I M ) a n dt h em e t a s t a s i so fo s t e o s a r c o m ai sa ni m p o r t a n ti n d i c a t o rf o rt h e e v a l u a t i o no fo s t e o s a r c o m am e t a
10、 s t a s i s ；a p o p t o s i s - i n d u c i n gf a c t o r ( A I F ) i sh i g h l y e x p r e s s e di no s t e o s a r c o m at i s s u e sb u tt h ee x p r e s s i o nW a s n os i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o n C o n c l u s i o n V i m e n t i n ( V I M ) a n dt h em e t a s t a s i so
11、fo s t e o s a r c o m ai sa ni m p o r t a n t i n d i c a t o rf o rt h e e v a l u a t i o n o fo s t e o s a r c o m am e t a s t a s i s ；a p o p t o s i s i n d u c i n gf a c t o r ( A I F ) e x p r e s s i o n i no s t e o s a r c o m at i s s u e s ，b u te x p r e s s i o nW a sn os i g n i
12、 f i c a n tc o r r e l a t i o n K e yw o r d s a p o p t o s i si n d u c i n gf a c t o r ：v i m e n t i no s t c o s a r c o m a ，i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 4 5 论文 骨肉瘤组织凋亡诱导因子与波形蛋白表达及其临床意 义的探讨 上- - 蔓兰， 刖声 骨肉瘤( o s t e o s a r c o m a ) 是骨的原发恶性肿瘤，好发于青少年的长骨，尤以股 骨下段和胫骨上段多见。骨肉瘤早期临床症状无特异
13、性，且病情进展较快，大多 数病例就诊时已经进入临床I IB 期。l l 】肿瘤的发生是细胞增殖与凋亡平衡失调的 结果，细胞凋亡在肿瘤的发生发展中主要起负调控作用。细胞凋亡有c a s p a s e 依 赖性和c a s p a s e 非依赖性两种途径，凋亡诱导因子F ) 介导了独立于c 嬲p 蕊e 通 路之外的另一条凋亡途径，2 1 近年来很多研究表明A I F 在多种组织中表达，如宫颈 癌、胃癌、睾丸癌等。3 1 波形蛋白( V I M ) 是一种I 型中间丝蛋白，主要在间叶起 源组织及间叶性肿瘤细胞中表达，如果一种细胞表达一种以上的中间丝蛋白，其 中一种必然为V I M 。4 作为非上
14、皮源性肿瘤比较特异性的标记，V I M 被广泛应用 于肿瘤细胞分化起源的鉴别诊断。大量研究表明，V I M 并非是间叶性肿瘤的特异 性标记，在乳腺癌、肝细胞肝癌、前列腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、 胃癌等恶性肿瘤中，V I M 均可与角蛋白共表达，而且与癌细胞的分化程度、侵袭 性和转移密切相关，可作为评判患者预后的一个指标我们采用免疫组化方法定量 检测A I F 和V I M 在骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达，探讨A I F 和V I M 与骨肉瘤临床病 理的关系，以了解其在骨肉瘤中的可能作用。 材料与方法 ( 一) 标本来源 石蜡标本取自1 9 9 0 年1 月至2 0 1 0 年1 月在中国医科大学附属盛京医院骨 科活检及手术切除的组织共7 5 例，其中骨肉瘤4 5 例，骨软骨瘤标本3 0 例。所 有患者术前未行放、化疗。骨肉瘤患者，年龄1 2 7 3 岁，中位年龄3 3 2 岁，平 6 均3 8 2 岁；其中低度恶性，组织分化中等的G 1 期骨肉瘤标本1 5 例，高度恶性 组织分化差的G 2 期骨肉瘤标本3 0 例，所有病例术前均未化疗跟放疗。取良性的 骨软骨瘤3 0 例作为对照观察。标本均经4 的甲醛固定，石蜡包埋、连续切片4 5 1 t r n 厚。 ( 二) 试剂 兔抗人A
