《实验四微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏(张理珉).》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验四微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏(张理珉).（71页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实实 验验 四四 微生物的菌落形态观察、微生物的菌落形态观察、 平板菌落计数及菌种保藏平板菌落计数及菌种保藏 目的要求目的要求 1 1、观察细菌、放线菌、霉菌的菌落形态、观察细菌、放线菌、霉菌的菌落形态 特征，并加以区分。特征，并加以区分。 2 2、掌握平板菌落计数的原则和方法。、掌握平板菌落计数的原则和方法。 3 3、掌握三种类群微生物的单菌落挑取，、掌握三种类群微生物的单菌落挑取， 并接种于斜面，进一步加强无菌操作技并接种于斜面，进一步加强无菌操作技 术。术。 4 4、了解菌种保藏的原理、重要性及常见、了解菌种保藏的原理、重要性及常见 方法。方法。 实验内容实验内容 微生物菌落形态观察及区
2、分（细菌、放线菌微生物菌落形态观察及区分（细菌、放线菌 、霉菌、霉菌、酵母菌酵母菌放在后面介绍放在后面介绍） 平板菌落计数（细菌、放线菌、霉菌）平板菌落计数（细菌、放线菌、霉菌） 挑取单菌落接种于斜面挑取单菌落接种于斜面 介绍菌种保藏的原理和方法介绍菌种保藏的原理和方法 对于一个样品，针对微生物来说对于一个样品，针对微生物来说 最想了解的问题（首要问题）最想了解的问题（首要问题） 存在的微生物种类存在的微生物种类 各类微生物的数量各类微生物的数量 各类微生物的作用各类微生物的作用 说明：说明： 只是针对可人工培养的微生物来说，只是针对可人工培养的微生物来说， 乐观估计可人工培养的部分只占总数的
3、乐观估计可人工培养的部分只占总数的 10%10%（保守估计只有（保守估计只有1%1%）；）； 证据来源有两方面证据来源有两方面分子生物学的分子生物学的 探索；和原位培养的比较。探索；和原位培养的比较。 实实 验验 内内 容容 一一 微生物菌落形态观察及区分微生物菌落形态观察及区分 一、微生物的形态和菌落特征的比较表一、微生物的形态和菌落特征的比较表 单细单细单细单细 胞微生物胞微生物菌菌丝丝丝丝状微生物状微生物 细细细细菌菌酵母菌酵母菌放放线线线线菌菌霉菌霉菌 主主 要要 特特 征征 菌菌 落落 含水状含水状态态态态很湿或很湿或较较较较湿湿较较较较湿湿干燥或干燥或较较较较干燥干燥干燥干燥 外外
4、观观观观形形态态态态小而突起或大而平坦小而突起或大而平坦大而突起大而突起小而小而紧紧紧紧密密大而疏松或大而致密大而疏松或大而致密 细细细细 胞胞 相互关系相互关系 单单单单个分散或有一定排列个分散或有一定排列 方式方式 单单单单个分散或假个分散或假丝丝丝丝状状丝丝丝丝状交状交织织织织，紧紧紧紧密密丝丝丝丝状交状交织织织织 形形态态态态特征特征小而均匀，个小而均匀，个别别别别有芽有芽孢孢孢孢大而分化大而分化细细细细而均匀而均匀粗而分化粗而分化 参参 考考 特特 征征 菌落透明度菌落透明度透明或稍透明透明或稍透明稍透明稍透明不透明不透明不透明不透明 菌落与培养菌落与培养 基基结结结结合程度合程度
5、不不结结结结合合不不结结结结合合牢固牢固结结结结合合较较较较牢因牢因结结结结合合 菌落菌落颜颜颜颜色色多多样样样样 单调单调单调单调 ，一般呈乳脂或，一般呈乳脂或矿矿矿矿 烛烛烛烛色，少数色，少数红红红红色或黑色色或黑色 十分多十分多样样样样十分多十分多样样样样 菌落正反面菌落正反面 颜颜颜颜色的差色的差别别别别 相同相同相同相同一般不同一般不同一般不同一般不同 菌落菌落边缘边缘边缘边缘一般看不到一般看不到细细细细胞胞 可可见见见见球状，卵球状，卵圆圆圆圆状或假状或假 丝丝丝丝状状细细细细胞胞 有有时时时时可可见细丝见细丝见细丝见细丝 状状细细细细胞胞可可见见见见粗粗丝丝丝丝状状细细细细胞胞
6、细细细细胞生胞生长长长长速度速度一般很快一般很快较较较较快快慢慢一般一般较较较较快快 气味气味一般有臭味一般有臭味多多带带带带酒香味酒香味 常有泥腥味或抗生素气常有泥腥味或抗生素气 味味 往往有霉味往往有霉味 二、细菌菌落形态的多样性（示意图）二、细菌菌落形态的多样性（示意图） 延展性较强的一些霉菌菌丝（松散）延展性较强的一些霉菌菌丝（松散） 平板中菌落形态平板中菌落形态 三、菌落特征描写方法三、菌落特征描写方法 大小 大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平大、中、小、针尖状。可先将整个平 板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的 标准，或由教师指出
7、一个大小范围。标准，或由教师指出一个大小范围。 颜色颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、 粉红色等。粉红色等。 干湿情况干湿情况 干燥、湿润、粘稠干燥、湿润、粘稠 形态形态 圆形、不规则等圆形、不规则等 高度高度 扁平、隆起、凹下扁平、隆起、凹下 透明程度透明程度 透明、半透明、不透明透明、半透明、不透明 边缘边缘 整齐、不整齐整齐、不整齐 注意：注意：可以进一步细分描述可以进一步细分描述 菌落形态可因培养基成分不同而发生菌落形态可因培养基成分不同而发生 显著变化（枯草芽孢杆菌在营养缺乏显著变化（枯草芽孢杆菌在营养缺乏 时形成的雪花状菌落）时形成的雪花状菌
8、落） 四、各类型菌落的总体特征四、各类型菌落的总体特征 反映细胞结构及特点反映细胞结构及特点 细菌细菌含水量高（多，形成毛细管水），含水量高（多，形成毛细管水）， 湿润，细腻（个体小）。湿润，细腻（个体小）。 细菌菌落说明：细菌菌落说明：光滑型光滑型一般具有荚膜；一般具有荚膜； 表面粗糙、褶皱、折光性强（不透明）菌落表面粗糙、褶皱、折光性强（不透明）菌落 一般具有芽孢；菌落大而扁平一般具有芽孢；菌落大而扁平一般一般 具有鞭毛。具有鞭毛。 放线菌放线菌菌落大小差别不大，相对较小，菌落大小差别不大，相对较小， 干燥（粉状），菌丝细（肉眼分不清楚）。干燥（粉状），菌丝细（肉眼分不清楚）。 霉菌霉菌菌
9、落较大，干燥（粉状，较粗，颗菌落较大，干燥（粉状，较粗，颗 粒），丝状较粗（肉眼可以区分）。粒），丝状较粗（肉眼可以区分）。 以最少的特征指标完成区分或分类最好。以最少的特征指标完成区分或分类最好。 细菌的培养特征细菌的培养特征 包括（群体形态特征）：包括（群体形态特征）： 各种固体培养基上的形态各种固体培养基上的形态 （针对菌落）（针对菌落） 各种液体培养基上的表现各种液体培养基上的表现 形态形态 各种斜面培养基上的表现各种斜面培养基上的表现 形态（针对菌苔）形态（针对菌苔） 各种半固体培养基上的形各种半固体培养基上的形 态（穿刺培养）态（穿刺培养） 其它其它 注意：注意：微生物菌落形态的区
10、微生物菌落形态的区 分除了通过肉眼进行区分判分除了通过肉眼进行区分判 断外，还可以借助其它工具断外，还可以借助其它工具 进行直接接触区分判断（牙进行直接接触区分判断（牙 签、接种工具等）签、接种工具等） 细菌菌落扫描电镜显微照片细菌菌落扫描电镜显微照片 实实 验验 内内 容容 二二 从分离平板上挑取单菌落从分离平板上挑取单菌落 挑取细菌单菌落接种于牛肉膏蛋挑取细菌单菌落接种于牛肉膏蛋 白胨培养基斜面上白胨培养基斜面上接种环接种环 挑取放线菌单菌落接种于高氏挑取放线菌单菌落接种于高氏1 1 号培养基斜面上号培养基斜面上接种环、接接种环、接 种钩种钩 挑取霉菌单菌落接种于马丁氏培挑取霉菌单菌落接种
11、于马丁氏培 养基斜面上养基斜面上接种环、接种钩接种环、接种钩 一般流程图（无菌操作）：一般流程图（无菌操作）： 拿起平板并打开拿起平板并打开用接种工具挑用接种工具挑 取单菌落取单菌落放于酒精灯外焰旁（不放于酒精灯外焰旁（不 得过近？）得过近？）放下平板拿起斜面并放下平板拿起斜面并 取下塞子取下塞子用已粘有菌体的接种工用已粘有菌体的接种工 具在斜面上划具在斜面上划“之之”字线或直线字线或直线 接种工具取出、灼烧接种工具取出、灼烧塞好胶塞塞好胶塞 作标记（菌种名称、接种人、接种作标记（菌种名称、接种人、接种 日期等）。日期等）。 接种斜面的演示图接种斜面的演示图 操作要点：操作要点： 始终保持无菌
12、操作；始终保持无菌操作； 棉塞或硅胶塞不放于桌棉塞或硅胶塞不放于桌 面，只能夹于拿接种工具面，只能夹于拿接种工具 的手中（小手指和手掌中的手中（小手指和手掌中 间或无名指和小手指中间间或无名指和小手指中间 ）；）； 一般在斜面培养基上以一般在斜面培养基上以 “之之”线划接种（充分利线划接种（充分利 用斜面，得到最大量的菌用斜面，得到最大量的菌 体）；体）； 有时也进行直线接种划有时也进行直线接种划 线（斜面培养特征观察）线（斜面培养特征观察） 说明：说明： 注意试管斜面的拿法（手掌向上，斜面注意试管斜面的拿法（手掌向上，斜面 向上），与接种工具的配合使用；向上），与接种工具的配合使用； 记号笔
13、标记时，过火烤一下，字不容易记号笔标记时，过火烤一下，字不容易 掉；掉； 挑取单菌落于相应斜面，管口标记学号挑取单菌落于相应斜面，管口标记学号 ，橡皮筋捆扎（三支）；，橡皮筋捆扎（三支）； 三支斜面的接种情况作为一次考核，记三支斜面的接种情况作为一次考核，记 入平时成绩。入平时成绩。 实实 验验 内内 容容 三三 平板菌落计数平板菌落计数 一、相关知识介绍一、相关知识介绍 1 1、微生物增殖和样品微生物数量的计、微生物增殖和样品微生物数量的计 量平板菌落计数量平板菌落计数 使单细胞形成菌落，一个单菌落代表一个单使单细胞形成菌落，一个单菌落代表一个单 细胞，从而反映出微生物的数量。细胞，从而反映
14、出微生物的数量。 （1 1）利用计数器在显微镜下直接计数（以后介）利用计数器在显微镜下直接计数（以后介 绍）；绍）； （2 2）最大或然数（）最大或然数（Most probable numberMost probable number， MPNMPN，又称稀释培养测数法、最大可能数）；，又称稀释培养测数法、最大可能数）； 适用具有特殊生理功能的类群适用具有特殊生理功能的类群存在但存在但 不能人工培养形成单菌落，可以利用生化手段不能人工培养形成单菌落，可以利用生化手段 检测出；利用统计学原理计算，结果粗放，只检测出；利用统计学原理计算，结果粗放，只 能得到数量级（近似数）。能得到数量级（近似数）
15、。 （3 3）菌体浊度的测定（只针对单细胞微）菌体浊度的测定（只针对单细胞微 生物）；生物）； 利用分光光度计在利用分光光度计在600nm600nm测定吸光度测定吸光度 值。值。 （4 4）细胞干重和湿重的测定（有时湿重）细胞干重和湿重的测定（有时湿重 以体积计量）；以体积计量）； （5 5）各种细胞物质含量的测定（蛋白质）各种细胞物质含量的测定（蛋白质 、核酸、核酸、 ATPATP、磷、叶绿素等定量测定、磷、叶绿素等定量测定 ）建立了多种快速检测方法；建立了多种快速检测方法； 说明：后两种对丝状菌比较有意义。说明：后两种对丝状菌比较有意义。 2 2、常见微生物检测项目、常见微生物检测项目 （1 1）常规微生物项目：细菌总数、大肠）常规微生物项目：细菌总数、大肠 菌群、大肠杆菌、酵母总数、霉菌总数菌群、大肠杆菌、酵母总数、霉菌总数 （2 2）致病微生物项目：沙门氏菌、李斯）致病微生物项目：沙门氏菌、李斯 特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O-O
