《雷公藤甲素对滑膜细胞rasmapks和g蛋白camp信号传导的调控机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《雷公藤甲素对滑膜细胞rasmapks和g蛋白camp信号传导的调控机制研究（78页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 分类号： 。- 密级： ：兰： 1 | ： 单位代码：8 4 5 0 2 学号：8 4 5 0 2 2 0 0 7 0 2 15 9 7 中国中医科学院 2 0 0 7 级硕士研究生学位论文 雷公藤甲素对滑膜细胞R a s M A P K g _ 钴 和G 蛋白一c A M P 信号传导的 调控机制研究 研究生： 专业： 研究方向： 导师： 王建竹 中西医结合基础 免疫抗炎药理研究 林娜研究员 中国中医科学院中药研究所 2 0 10 年5 月北京 强r 。 h 静 ； l I ，1 ：学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行 ；1 。1 7 J 研究工作所
2、取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文 的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的 作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集 体，均己在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任 由本人承担。 论文作者签名：上年 导师签名： d c ，。年占 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国中医科学院研究生院有关保留、使用学位论文 的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借 阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其 他复制手段保存论文。 论文作者签名：互埤 矽，矿年b 月q - E t ， i 荽i i l
3、J 雷公藤甲素对滑膜细胞R a s M A P K s 和G 蛋白一c A M P 信号传导的调控机制研究 文献综述 中文摘要 目录 A B S T R A C T 英文缩略表 前言 1 实验材料 1 1 0 1 4 1 9 。j 二二：j 0 二2 0 i 2 实验方法。 2 2 2 5 3 实裂结果3 5毒 3 1T P 对R A H F L S 增殖的影响 3 2T N F 伐诱导不同时间对R A H F L SR A S M A P K S 信号传导通路活化水平的影响。3 6 3 3T P 对R A H F L SR A S M A P K S 信号传导通路活化水平的影响 3 4T P
4、 对R A - H F L SG 1 2 、G 1 3 和G s 蛋白表达水平的影响 3 5T P 对R A H F L SG I 和G s 基因转录水平的影响。 3 6T P 对R A H F L SC A M P 含量的影响 4 0 4 3 4 4 3 7P T 、C T 对R A H F L SR A S M A P K S 信号传导通路的影响4 5 3 8P D 9 8 0 5 9 、S P 6 0 0 1 2 5 、S B 2 0 3 5 8 0 对G n 、G 1 3 和G s 蛋白表达水平的影响4 6 4 讨论4 9 4 1 慢性滑膜炎症是R A 的典型特征 4 2T N F o
5、 c 是引起并维持R A 滑膜炎症的重要细胞因子4 9 4 3 抑制R A S M A P K S 信号通路活化可能是T P 抑制R A 滑膜炎症的重要分子机制之一5 0 4 4 恢复滑膜细胞G 蛋白C A M P 信号通路平衡可能是T P 抑制R A 滑膜细胞增殖、减轻滑膜炎 症的重要分子机制之一 5 2 4 5 滑膜细胞M A P K 信号传导通路与G 蛋白C A M P 偶联信号通路存在交互调节关系5 3 5 结论。 5 5 6 展望5 6 参考文献。 i 改谢 个人简历6 4 L J 雷公藤甲素对滑膜细胞R a s M A P K s 和G 蛋白c A M P 信号传导的调控机制研究
6、文献综述 E R K 信号传导途径与类风湿关节炎 丝裂原活化蛋白激酶( m i t o g e n a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e s ，M A P K s ) 信号传导途 径是细胞外信号引起细胞核内反应的重要通路，对于维持细胞的正常生理功能具 有重要意义。其中细胞外信号调节激酶( E x t r a c e l l u l a rR e g u l a t e dK i n a s e ，E R K ) 通路 是M A P K s 家族中一条重要的信号传导路径，实验证明该通路异常活化与类风湿 ； 关节炎关节破坏密切相关。 ，+ 1E R
7、K 信号传导通路的活化与生理功能 ? ：羔o 。 + 辱 M A P K s 家族是一类高度保守的苏氨酸酪氨酸蛋白激酶，可通过严格的三级 酶促级联反应( M A P l 0 o 0 5 ) ，对G s 表达的上调率两组有统计学差异( P 0 0 1 ) ；而1 4 0n MT P 对G 砭 表达的抑制率两组无统计学差异( 户 O 0 5 ) ，对G i 3 表达的抑制率与对G 。表达的上 调率两组有统计学差异( p 0 0 1 ) ( 表6 ) ； 以上结果提示与对未诱导的R A - I - I F L S 的调控作用相比，r P 对T N F a 诱导 组G i 2 、G 谄和G s 作用更
8、强；与单纯T N F a 诱导组相比，1 1 P 中剂量与高剂量对 T N F a 诱导的R A - I - I F L SG i 2 的抑制作用及对G s 的增强作用组间比较均无统计学 差异，这可能提示T P 对吼与G 。的调节作用较强，较低剂量即可引起效应蛋白 的较大改变；与空白组相比，只有1 1 P 低剂量组与高剂量对未诱导的R A - H F L S 产生的效应存在组间显著性差异，其原因可能是未诱导的R A - R F L S 蛋白异常改 变水平本身较低，T P 对其作用只表现出逐渐升高的趋势。 A 嘞l 一一一- 一_ 一竹l G ；3恒! 竺笪笪笪剑 G 。l 虫竺蔓鲁矗熊l G
9、P , P 1 ) H I 撇( o 叫叫 - l t I + l + I I l I 撇( 棚)一I - I 2 8 I 2 81 4 0l2 8I 掮l1 4 0 T P ( n M ) 0 02 82 81 4 02 82 81 4 0 T N F a ( 10n 0 m 1 ) 图5 不同浓度T P 对P 渔- H F L S 、G i 3 和G s 蛋白表达水平的影响 表5 不同浓度T P 足J “ R A - H F L S 嘞、铴和G 5 蛋白表达水平的影响( 孟，n f f i3 ) 药物浓度相对I D V 4 1 0，m蟠嚣磕露暨孽， 启屉4卫，启屉4 2 O 1 1 1 1
10、 O 0 n O B 雷公藤甲素对滑膜细胞R a s - M A P K s 和G 蛋白- c A M P 信号传导的调控机制研究 注：与空白组比较t P 0 0 5 ，槲A O 0 1 ；与单纯T N F a 组比较伙O 0 5 ，k 0 0 1 表6 不同浓度T P 对R A H F L SG i 2 、G i 3 表达的抑制率及对G s 表达的上调率 比较( 庙，n = 3 ) 1 0 5 9 0 7 5 6 0 4 5 3 0 1 5 0 注：与T P 组比较) 0 0 5 ，A p 0 0 1 G i 2G 1 3G s 4 2 雷公藤甲素对滑膜细胞R a s - M A P l (
11、 s 和G 蛋白c J 6 山口信号传导的调控机制研究 图6 高剂量T P 对R A - H _ F L SG i 2 、G i 3 蛋白表达的抑制率及对G s 表达的上调 率比较 3 5T P 对R A - H F L SG I 和G - 基因转录水平的影响 琼脂糖凝胶电泳结果经扫描后图像数据分析显示，与空白组相比，T N F a 诱 导6h 可显著上调G i m R N A 表达，同时下调G s m R N A 表达( p 0 0 1 ) ( 图7 ) ； 与单纯T N F a 诱导组相比，2 8 n M T P 即可显著抑制T N F a 诱导的R A - 跚L S G im R N A
12、 转录水平，并显著上调G 。m R N A 表达( 户 0 0 1 ) ，且随着T P 浓度的升 高，这种抑制作用或增强作用也随之增强( P o 0 1 ) ，当T P 浓度达1 4 0 n M 时， 对G im R N A 转录水平的抑制率可达9 8 1 ，而对G 。m R N A 转录水平增加率可达 2 3 3 3 。同时T P 不同浓度组之间比较，除低剂量与中剂量组对G i 基因转录的抑 制作用无显著性差异，同时中剂量与高剂量组对G s i 基因转录的增强作用差异无 显著性外，其他各组间比较，均具有组间显著性差异僻0 0 5 或R 0 0 1 ) ( 表7 ) ； 与空白组相比，1 4
13、0n MT P 可使未诱导的R A - H F L SG i m R N A 转录水平降至 远远低于空白水平，并同时上调G sm R N A 转录水平，其抑制率和上调率分别为 9 6 7 和4 0 0 ( 尸 O 0 5 ) ( 图7 ) ； T N F - a 诱导给药组与T N F a 未诱导给药组比较，1 4 0n M1 1 P 对G im R N A 转 录水平的抑制率两组无统计学差异( D 0 0 5 ) ，而对G sm R N A 转录水平上调率两 组有统计学差异( p 0 0 1 ) ( 表7 ) 。 G im R N A E = = Z j E ，_ G sm R N A G
14、A P D Hm R N A 芒! = 巴Z j e Z j 4 3 雷公藤甲素对滑膜细胞R a s - M A P K s 和G 蛋I 刍- c A M P 信号传导的调控机制研究 T N F - a ( 10n g m L ) 图7 不同浓度T P 对R A - H F L SG i 和G s m R N A 转录水平的影响 表7 高剂量T P 对R A H F L SG im R N A 转录的抑制率及对G sm R N A 转录的上 调率比较( 函，n 一3 ) 注：与1 1 P 组比较- p 0 0 1 。 3 6T P 对R A - H F L Sc A M P 含量的影响 放射免疫分析法检测结果显示，与空白组相比，T N F a 诱导6h 可显著下调 R A H F L S 胞浆c A M P 含量，其下调率为1 2 5 ；而T P 可上调T N F a 诱导引起 的R A - H F L Sc A M P 含量的降低，低、中、高剂量上调率分别
