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1、徐州医学院硕士学位论文缩 略 词 表Abbreviation缩略词AMLCMLCRCTLGM-CFUHSCsLDRLSCsMNCPBSPESFSLD英文全称acute myelogenous leukemiachronic myelogenous leukemiacompletely releasecytotoxic T lymphocytegranulocyte-macrophage colony-forming unithaemopoietic stem cellslow dose radiationleukemic stem cellsmononuclearcellphosphate b
2、uffered salinePlating efficiencysurviving fractionsub-lethal damage1中文全称急性粒细胞白血病慢性粒细胞白血病完全缓解细胞毒性 T 淋巴细胞粒-巨噬细胞集落形成单位造血干细胞低剂量辐射白血病干细胞单个核细胞磷酸盐缓冲生理盐水集落形成率存活分数亚致死损伤徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明本论文：LDR对人 CML干祖细胞增殖与凋亡影响的实验研究是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明
3、确的声明并表示了谢意。作者签名：日期： 200 年月论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：导师签名：日期： 200 年月54徐州医学院硕士学位论文论文审阅认定书研究生在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专
4、家评审。导师签名：55日期： 200 年月徐州医学院硕士学位论文第一章：HSCs 与 LSCs 放射敏感性的实验研究中 文 摘 要目的：通过检测正常人造血干细胞（haemopoietic stem cells，HSCs）和慢性粒细胞白血病患者白血病干细胞（leukemic stem cells，LSCs）辐射后细胞存活曲线各参数，探讨两者放射敏感性和亚致死损伤（sub-lethal damage,SLD）修复能力的差异，为LSCs 的靶向治疗提供理论依据。方法：取健康产妇脐血及初诊的慢性粒细胞白血病病人骨髓，采用免疫磁株分离法（ EasySepHuman CD34 selection Kit
5、） 分 别 分 选 出 CD34+CD38- 的 HSCs 和CD34+CD38-CD123+的 LSCs 细胞。实验依据细胞类型分两组：即 HSCs 组与 LSCs组，各组依照射剂量不同（0Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy）分为 7 个亚组，每组每个剂量点均设 3 个平行样本。接种于 1%甲基纤维素半固体培养基，照射后培养 14 天即行集落形成实验。根据各组接种的细胞数、形成的集落数，计算细胞存活分数（surviving fraction，SF），采用多靶单击模型和线性二次模型拟合绘制细胞存活曲线，根据 D0、Dq、SF2 及 比等放射生物学参数，比较两种细胞的放射敏感
6、性和亚致死损伤（sub-lethal damage,SLD）修复能力的差异；流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期分布及凋亡情况。结果 （1） 90%的 HSCs 细胞处于 G0/G1 期，而 50%的 LSCs 处于 G0/G1 期，两种细胞的凋亡指数均较低；（2）两种干细胞对射线均较敏感，呈现良好的剂量效应关系；（3）多靶单击模型中，HSCs 的 SF2、D0、Dq 值分别为 0.3508、2.247、0.083，LSCs 的 SF2、D0、Dq 值分别为 0.2972、1.828、0.037； 4）线性二次模型中，HSCs和 LSCs 的 值分别为 4.577 和 7.879。2（徐州医学院硕
7、士学位论文结论 （1）HSCs、LSCs 对射线均较敏感，且照射后亚致死损伤修复能力均较差；（2）LSCs 细胞对射线的敏感性是 HSCs 的 1.23 倍；（3）两种细胞辐射敏感性的差异可能与细胞周期分布差异有关。关键词：造血干细胞； 白血病干细胞；放射敏感性3徐州医学院硕士学位论文第二章：LDR 对人 CML 干祖细胞增殖与凋亡影响的实验研究中 文 摘 要目 的 ： 探 讨 低 剂 量 照 射 (low dose radiation ， LDR) 在 体 外 对 人 造 血 干 细 胞(hematopoietic stem cells，HSCs)和白血病干细胞（ leukemic stem
8、 cells，LSCs）增殖与凋亡的影响，并探讨其可能作用机制。方法: 取正常人脐血及初诊的慢性粒细胞白血病病人骨髓，用免疫磁株分离法，分离纯化 CD34+CD38-的 HSCs 和 CD34+CD38-CD123+的 LSCs，实验依据细胞类型分成两组：HSCs 组和 LSCs 组；每组 LDR 设 5 个剂量点（0cGy、5cGy、7.5cGy、12.5cGy、20cGy）。细胞计数及克隆形成法分析 LDR 对两种细胞增殖抑制的影响，流式细的胞仪检测其对周期分布的影响，Annexin/PI 检测细胞凋亡率情况。结果：（1）各剂量点 LDR 处理后，LSCs 细胞增殖速度明显加快、细胞数量增
9、加；（ 2）克隆形成实验显示： LDR 照射后， LSCs 细胞的克隆形成能力明显增加（P0.05）；（3）LSCs 经 LDR 照射后 6h 出现 G0/G1 期细胞比例减少（P0.05），G2/M 期细胞比例增加（P0.05）；（5）LDR 后 HSCs 和 LSCs的凋亡率极低，不能引起 HSCs 和 LSCs 的凋亡。结论：（1） LDR能特异性促进LSCs的增殖分化；（2）其作用机理可能是通过改变LSCs周期进程，使G0/G1期的LSCs进入增殖周期，而与细胞凋亡无关；（3）LDR对HSCs的增殖、细胞周期分布和凋亡均无明显影响。关键词：低剂量辐射； 凋亡； 白血病干细胞4徐州医学院
10、硕士学位论文PartThe empirical study of LSCs VS HSCs radiosensitivityAbstractObjective To measure parameters of survival curves of HSCs and LSCs in vitro, in otherwords,to compare the difference of radiosensitivity and the repaireing ability ofsublethal damage repaire(SLDR) between HSCs and LSCs.Methods We
11、 utilized the EasySepTM magnet for CD34+ CD38-cells isolation from thecord blood of term deliveries and CD34+CD38-CD123+ cells isolation from the BM ofpatients who were firstly diagnosed as CML.The test were divided into two groups ofHSCs vs LSCs. According to different dosage of irradiation ,each g
12、roup were redividedinto seven subset of dosage groups,including 0 Gy,1Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,and10Gy.Every dosage group contains three parallel samples.The final concentration was1%methylcellulosesemisolidculturewasusedtodetectcolonyforming assay(CF) and measurethe cell survival rate when HSCsandLSCswereradiated with 6MV X-ray at the dose rate of 2Gy/min according to the each dosagegroups.Then the cells were incubated at 37 in humi
