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1、浙江大学硕士学位论文浙江大学硕士学位论文 1 辛伐他丁对糖尿病大鼠氧化应激的影响 及其肾保护作用 浙江大学医学院浙江大学医学院 内科学（肾脏内科学）内科学（肾脏内科学） 硕硕 士士 研研 究究 生生 朱朱 斌斌 导导 师师 沈汉超沈汉超 教授教授 中文摘要中文摘要 研究背景 研究背景 糖尿病患者体内存在着氧化应激水平的升高，并且在糖尿病的并发症如糖 尿病肾病中起促进作用。体内氧化应激水平的升高取决于活性氧（ROS）和抗 氧化防御系统之间的关系，多种环节可导致糖尿病机体 ROS 上升，如糖的自氧 化和糖化氧化作用，进展性糖基化终产物（AGEs）,PKC，NAD(P)H 细胞信号 通路相关活性氧的
2、产生，多元醇通路，线粒体电子传递链的活性增高。体内抗 氧化防御系统含有多种抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD） ，谷胱甘肽-S 转移酶 （GST）,过氧化氢酶（CAT）可对抗活性氧的作用，糖尿病肾脏内存在着抗氧 化防御系统的下降。这种氧化与抗氧化系统之间的失衡导致机体的氧化损伤， 并参与糖尿病肾病的发生发展，但就糖尿病机体血液中氧化产物，及抗氧化酶 水平的变化及其与糖尿病肾病的关系则未见报道。 HMG-CoA 还原酶抑制剂（他丁类药物）为有效的降脂药物，近来的研究 表明，他丁类药物具有不依赖于降脂作用的对机体保护作用，如抗氧化作用及 浙江大学硕士学位论文浙江大学硕士学位论文 2 肾保护作用，但具
3、体机理并不清楚。 本研究拟观察链脲佐菌素造模的糖尿病大鼠血液中过氧化脂质及抗氧化 酶的水平，辛伐他丁干预后的变化，及其与糖尿病肾损伤的关系。 研究方法研究方法 60 只6 周龄雄性SD 大鼠（清洁级）购自浙江省医学科学院，平均体重 205.34 14.45g, 以抽签法选取40只大鼠造糖尿病模型： 以55mg/kg腹腔注射链脲佐菌素， 72 小时后5 只大鼠测血糖300mg/ml 确定造模成功，以抽签法随机分为二组，18 只为糖尿病组（DM）,另 17 只为辛伐 他丁干预组 (DM+S)，健康对照组（CG）为 20 只。DM+S 组自次日起予 2mg/kg 辛伐他丁灌胃。第6 周时DM+S 组
4、随机取9 只大鼠，DM 组选取 9 只大鼠，CG 组 选取 10 只，入代谢笼收集 24 小时尿量测定 24 小时尿白蛋白排泄量，第二天空腹 秤体重，采股动脉血，处死。取双侧肾脏秤重。血液分离血清测定血糖（GLU） ， 低密度脂蛋白（LDL） ，高密度脂蛋白（HDL）,血肌酐（SCr）,取一部分肝素抗凝 血血浆测定SOD，GST，CAT, MDA(MDAp),红细胞抽提液 MDA（MDAe） 。其余 大鼠于第12 周检测以上指标。肾组织经固定，3um 切片并行 PAS 染色。 每张切片随机选取 10 个肾小球测量肾小球截面积，及系膜区比例。 数据统计：实验数据用 SPSS11.5 统计软件进行
5、分析，各组数据经单样本 K-S 分析均符合正态分布， 多组比较采用单因素方差分析， 两两比较用 LSD 法， 6 周及 12 周间比较采用 t 检验，交互因素分析采用双因素方差分析。相关数据 间采用 spearman 直线相关分析及回归分析。 浙江大学硕士学位论文浙江大学硕士学位论文 3 研究结果研究结果 1.各组大鼠体重，肾重，肾重/体重，24h 尿白蛋白排泄的变化： 造模后 6 周、 12 周 DN 及 DN+S 组体重,肾重均比正常对照组轻 （P0.05） ， 而肾重与体重的比率则比正常对照组高（P0.05） ，DN 及 DN+S 组间差别无显 著性意义。 DN 及 DN+S 组的 UA
6、E 比正常对照组高 （P0.05） ， 第 12 周时 DN+S 组 UAE 低于 DN 组（P0.05） 。12 周与 6 周相比，DN 及 DN+S 组肾重增加 （P0.05） ，肾重与体重的比 率 DN 及 DN+S 组均有上升（P0.05）,CG 组则无明显变化。各组 UAE 在 6 周与 12 周相比差别无显著性意义。 2.各组大鼠 GLU、LDL、HDL、TG、SCr 的变化 6 周及 12 周时 DN 及 DN+S 组血糖明显升高(P0.05)，但 DN 及 DN+S 组 之间相比差别无显著性意义，3 组间 LDL、 HDL、TG、Cr 差别均无显著性意 义。 3.各组大鼠 SO
7、D、GST、CAT、MDAp、MDAe 的变化 DN 及 DN+S 组 6 周及 12 周时 MDAp 及 12 周时的 MDAe 均比 CG 组大鼠 高（P0.05） ，且 DN 组高于 DN+S 组（P0.05） ，6 周及 12 周时 DN 及 DN+S 组血浆 SOD，GST，CAT 均明显低于 CG 组（P0.05） ，且 DN 组低于 DN+S 组 （P0.05） 。12 周与 6 周相比 MDAp 及 MDAe 明显升高（P0.05） 4.各组大鼠肾脏组织形态学改变的比较 6 周时 DN 及 DN+S 组 GV 较 CG 组有所升高，尤以 DN 组明显，但各组 浙江大学硕士学位论
8、文浙江大学硕士学位论文 4 间差别无显著性意义。12 周时 DN 组与对照组相比 GV 明显升高（P0.05） ，在 DN+S 组虽也略有升高但明显少于 DN 组的升高幅度（P0.05） 。6 周的 M/T 改 变与同一时间 GV 相似， 12 周时 DN+S 组及 DN 组 M/T 均高于 CG 组 （P0.05） ， DN+S 组升高幅度低于 DN 组但两组间相比差别无显著性意义。 5.相关性及回归分析表明，UAE，GV，M/T 与 MDAp 成正相关，而与 SOD， GST,CAT 呈负相关。MDAe 与 UAE 及 M/T 相关性不明显。 结论结论 1糖尿病大鼠血浆及红细胞中氧化应激水
9、平升高并与肾损伤呈正相关，抗氧化 酶水平下降并与肾损伤呈负相关。 2 辛伐他丁能减轻糖尿病肾病大鼠的氧化损伤， 使机体血浆内过氧化脂质下降， 抗氧化酶水平升高，从而起到保护肾脏延缓糖尿病肾病进展的作用，且这种作 用不依赖于其降血脂效应。 浙江大学硕士学位论文浙江大学硕士学位论文 5 Effects of simvastatin on oxidative stress in streptozotocin induced diabetic rats :A role for glomeruli protection Medical college of Zhejiang university Int
10、ernal medicine Postgraduate Zhu Bin Tutor Prof. Shen Hanchao Abstract Background Many reports have demonstrated that increased oxidative stress in diabetes plays an important role in the progression of diabetic complications, including nephropathy . Oxidative stress is determined by the relationship
11、 between reactive oxygen species (ROS) and the antioxidant defense system including antioxidant enzymes. ROS has been implicated in the pathogenesis of diabetes mellitus. Increased ROS leads to lipid peroxidation which amplifies oxidative injury and causes damage to biomacromolecules such as protein
12、 and nucleic acid. Many mechanisms are involved in the production of ROS including glucose autoxidation, non-enzyme protein glycation, generation of advanced glycation end products (AGE), activation of protein kinase C (PKC) and NADPH oxidase. It has been demonstrated that glomeruli are especially s
13、ensitive to oxidative injury that contributes to the progression of diabetic nephropathy. 浙江大学硕士学位论文浙江大学硕士学位论文 6 HMG-CoA reductase inhibitors (statins), including simvastatin, have been shown to be effective lipid-lowering agents. Recently, many studies have demonstrated that statins have pleiotropi
14、c effects independent of their cholesterol-lowering effects. A report by Jones et al. suggested that statins have antioxidative effects that benefit cardiac myocytes. Rikitake et al. demonstrated the antioxidative properties of fluvastatin which intercept atherosclerosis in cholesterol-fed rabbits.
15、Statins also have protective effects on glomeruli， but the precise mechanisms remain unclear. The present study was designed to investigate the effects of simvastatin on oxidative stress as well as on the antioxidative defense system and how these affect early stage diabetic nephropathy by analysis
16、of proteinuria and glomerular morphometry in streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats. Materials and Methods At week 6, 9 rats from DM+S group, 9 rats from DM group and 10 rats from CN group as well as the other rats at week 12 were sacrificed under pentobarbital anesthesia (5 mg/100 g). 24-Hour urine was collected for measurement of 24-hour urinary albumin excretion (UAE). 5 ml of blood was collected from the femoral artery with 3 ml centrifuged to obtain serum for measurement
