《赭曲霉毒素a诱导人胃黏膜上皮细胞ges1g2期阻滞及可能机制的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《赭曲霉毒素a诱导人胃黏膜上皮细胞ges1g2期阻滞及可能机制的研究（120页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1833580 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应的法律责任。 躲糨枷擗棒一一盖露 。伊f 口年莎月，秒日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的
2、研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名：经器啐 导师签章： 膨 劢I ，9 年石月汐日 謦 目录 m I II I I I I II I i l l l l l l l l lI I I II I I I I I I I l l l l l l l l l Y 18 0 7 8 6 1 中文摘要 l 英文摘要6 英文缩写1 3 研究论文赭曲霉毒素A 诱导人胃黏膜上皮细胞( G E S 1 ) G 2 期阻滞及可 能机制的研究 引言1 5 第一部分赭曲霉毒素A 对G E S 1 细胞周期分布、细胞增殖和细胞凋亡的 影响 前言”“”“”1 7 一月【J 舌
3、“一“一”一”“一”“”一”“”“”l 材料与方法1 8 结果3 l 附图O OOO OO 3 5 附表4 3 讨 仑4 7 小结“一”“一”一“一”一O OO OOO ”一“”一”“”一”4 9 参考文献4 9 第二部分赭曲霉毒素A 对G E S 1 细胞的染色体的损伤作用 前言“一”一一”一”一”“一”“一”“5 2日U 舌“一”一一”一”一”一”一”“一”“一”一”“。 材料与方法O OO OOO OOO OOO 5 3 结果- 5 7 附l 蛩5 9 附表6 6 讨论“6 8 J 、结6 9 参考文献6 9 第三部分赭曲霉毒素A 诱导G E S 。l 细胞G 2 期阻滞分子机制的研究
4、前言”一一”一“一”7 2 一刖舌”“一”“”“”“”一”“一”“”“”一” 材料与方法7 3 结果一”8 l 附图8 4 附表0 000 00 OOO OOO OOO OOOOOO 9 5 讨论o ooooo oooooo oaoooo 000 000 9 9 J 、结一一1 0 0 参考文献1 0 0 综述D OO OOO 1 0 3 致谢0 00 0000 00000 11 6 个人简历B OOO OO OOOOO O 1 1 7 中文摘要 赭曲霉毒素A 诱导人胃黏膜上皮细胞( G E S 1 ) G 2 期阻滞及可能机制的研究 摘要 赭曲霉毒素A ( O c h r a t o x i
5、 nA ，O T A ) 是由曲霉菌属和青霉菌属的某些 菌株产生的一种真菌毒素，其污染非常普遍，广泛存在于小麦、玉米、豆 类等粮食作物以及咖啡、葡萄酒、啤酒、面包等食品中。目前研究已经发 现O T A 具有肾毒性、肝毒性、神经毒性、免疫毒性、致畸性、致突变性 和致癌性等生物学效应。1 9 9 3 年O T A 被国际癌症研究中一t 二, Y 0 为“可能的 人类致癌物”。 河北省赞皇县是我国胃癌高发区，胃癌年均死亡率超过5 9 1 0 万。2 0 0 6 年，我们对当地居民粮食中O T A 的污染状况进行了现场调查，发现当地 居民食用的小麦中O T A 的平均含量为2 4 I x g k g
6、，明显高于世界卫生组织 粮农组织联合专家委员会( J o i n tF A O W H OE x p e r tC o m m i t t e eo nF o o d A d d i t i v e s ，J E C F A ) 暂定的每周容许摄入量( 1 0 0n g k g ) 。O T A 的高污染可 能与胃癌高发区居民胃癌的发生有关，但目前有关O T A 对人胃黏膜上皮 细胞影响的研究国内外未见报道。 本研究利用永生化人正常胃黏膜上皮细胞( G E S 1 ) 作为研究对象， 探讨O T A 对G E S 1 细胞的增殖、凋亡、周期分布和染色体的影响。我们 首先观察了O T A 对G
7、E S 1 细胞周期分布、细胞增殖和凋亡的影响；然后 检测了O T A 对G E S 1 细胞染色体的损伤作用；基于以上研究结果，最后 以两条与染色体损伤和细胞周期阻滞密切相关的信号通路一A T M C h k 2 和A T M p 5 3 为研究靶点，系统地探讨了O T A 诱导G E S 1 细胞G 2 期阻滞 和细胞损伤的分子机制。本研究结果为揭示O T A 暴露与人胃黏膜损伤乃 至胃癌发生的可能关系奠定了基础，对提高我国农村居民，特别是胃癌高 发区居民食品安全水平具有重要意义。 第一部分赭曲霉毒素A 对G E S 1 细胞周期分布、细胞增殖和细胞凋亡 的影响 目的：探讨赭曲霉毒素A 对
8、体外培养的人胃黏膜上皮细胞( G E S 1 ) 细胞周期分布、细胞增殖和细胞凋亡的影响。 中文摘要 方法： 1 采用噻唑蓝( M T T ) 比色法观察不同浓度( O 0 1 1 0 0 # m o l L ) O T A 作用2 4h 对G E S 1 细胞存活率的影响。2 采用流式细胞定量检测技术 ( F C M ) 、吉姆萨( G i e m s a ) 染色和免疫荧光技术分析O T A 处理后G E S 1 细胞周期分布情况。3 采用蛋白质免疫印迹( W e s t e r nB l o t ) 、反转录聚合 酶联反应( R T - P C R ) 方法检测O T A 处理后细胞周期
9、关键调节分子一 C d c 2 5 C 、C d c 2 和C y c l i n B l 在蛋白水平和m R N A 水平上的表达情况。4 采 用免疫共沉淀技术检测C d c 2 C y c l i n B l 复合物的形成情况。5 细胞经 A n n e x i nV - F I T C 和P I 染色后采用流式细胞定量检测技术分析O T A 对 G E S 1 细胞凋亡的影响；同时采用W e s t e r nB l o t 检测凋亡相关分子 C a s p a s e 3 的激活情况。 结果： 1 1O T A 对G E S 1 细胞存活率的影响 M T T 法检测结果显示，O T A
10、 对G E S 1 细胞有明显的抑制作用 ( P 肌肉 脂肪【l7 】或者是肾 脏 肌肉 肝脏 脂肪【1 8 】。O T A 除了常分布于肝脏、肾脏、肌肉和脂肪组 织外，研究者们还发现，将雄性大鼠灌喂2 8 9gO T A k g d a y ，8 天后，在 大鼠的大脑、小脑、中脑腹侧、纹状体和海马中出现O T A 的沉积【悖】，这 综述 提示O T A 可能会引起神经系统的损伤。研究还发现，胎儿血清中O T A 的 浓度是母体的两倍，这表明O T A 可以通过胎盘从母体转移到胎儿体内【2 0 1 。 2 2 3O T A 的代谢 O T A 是通过粪便和尿液排出体外的，肾脏是人类对O T A
11、 进行代谢的 主要器官。研究发现，经肾小球滤过的O T A 可以通过肾小管中的转运蛋 白( M R P 2 【2 1 】和B C R P t 2 2 】) 被重吸收。重吸收使O T A 的排泄延缓，导致 O T A 在肾组织中大量积累，进而引起肾脏的损伤。有学者在对实验动物 肾脏的各部分结构进行检测时发现，在肾乳头和肾髓质中O T A 的含量最 高。这个结果提示O T A 可能对肾乳头和肾髓质中的结构有损伤作用。 3O T A 的毒性作用 O T A 的毒性作用的强弱依据物种、性别以及给药方式的不同而不同。 O T A 的口服半数致死量( L D 5 0 ) 狗为0 2m g k gb w ，
12、而雄性大鼠为3 0 3 m g k gb w 。腹腔注射O T A 会产生比口服O T A 更强的毒性作用。D iP a o l o 2 3 】 等人发现，当人吸入曲霉菌属赭曲霉后会发生少尿和肾小管坏死等急性中 毒症状。近来有报道【2 4 】发现，O T A 存在于孢子和空气浮尘中，这一报道 进一步支持了D iP a o l o 等人的发现。D e g e n 2 5 】等人研究发现，工作环境粉 尘中O T A 的暴露量和血浆中O T A 的水平相关。O T A 对很多动物都会产 生毒性作用，肾脏是它作用的主要靶器官。另外，O T A 还会破坏凝血功 能障碍，引起脾、脑、肝、肾和心脏出血和血栓的形成；可以损伤仓鼠的 胃肠道和淋巴组织；可以引起小鼠的骨髓中毒。 3 1 肾毒性 O T A 对鸟类和哺乳类动物的肾脏有损伤作用，但对成年反刍动物的 肾脏没有毒性作用。通过对四个国家( 丹麦、匈牙利、斯堪的纳维亚和波 兰) 猪肾病的研究发现，O T A 是该病的主要致病因素。分别给予每公斤 含4 0 0 0 肛g ，1 0 0 0f l g 和2 0
