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1、上海交通大学 硕士学位论文 血清胰岛素检测方法的对比分析及临床意义研究 姓名：罗雪娇 申请学位级别：硕士 专业：核医学 指导教师：陆汉魁 20090401 血清胰岛素检测方法的对比分析及临床意义研究血清胰岛素检测方法的对比分析及临床意义研究 摘摘 要要 研究目的:研究目的: 通过对比检测探讨不同血清胰岛素免疫检测系统存在的 差异性及对临床判断胰岛功能的影响。 方法:方法: 随机选取病人 51 例采集血清样品 152 份， 其中正常糖耐量 13 名，空腹血糖受损 8 名，糖耐量减低 9 名及 2 型糖尿病 21 名。采用 4 种 不同的检测方法平行测定血清胰岛素水平， 其中放射免疫法 1 种、
2、化学发 光法 2 种和电化学发光法 1 种。 结果: 结果: 四种方法检测血清胰岛素结果的相互间相关系数在 0.810.99 之间;检测数值之间的差异均显著（p0.0001）, 但此差异对 糖尿病临床诊断无显著影响。另外，在监测血清胰岛素节律方面，四种检 测结果的趋向性表现一致，对临床判断胰岛功能无显著差异。 结论:结论: 不同的胰岛素检测方法既存在高度相关性也存在显著差异;四 种不同的胰岛素检测方法对于临床判断患者胰岛 细胞分泌功能没有显 著影响。 关键词关键词 胰岛素检测,放射免疫,化学发光法,可比性 COMPARATIVE STUDY OF SERUM INSULIN IMMUNOASS
3、AYS AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE COMPARATIVE STUDY OF SERUM INSULIN IMMUNOASSAYS AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE ABSTRACT ABSTRACT Objective:Objective: This study was to analyze the discrepancy among different serum insulin immunoassay systems and its clinical impact on the evaluation of islet secret
4、ary function. Methods: Methods: Fifty-one patients were randomly selected in the study, including 13 patients with normal glucose tolerance, 8 with impaired fasting glucose, 9 with impaired glucose tolerance and the rest 21 with type 2 diabetes. Totally 152 serum samples were measured simultaneously
5、 for insulin levels by four different immunoassay systems, one radioimmunoassay, two chemiluminescence immunosaasys and one electro- chemiluminescence immunoassay. Results: Results: Though the correlation coefficient between different assays ranges from 0.81 to 0.99, serum insulin levels measured by
6、 the four assay methods displayed significant difference from each other (p0.0001). However, those differences had no significant impact on the clinical management. Also in monitoring insulin stimulation test, different serum insulin levels resulting from four assays came up with almost same consist
7、ent tendency, which made no significant impact on the evaluation of cell function. Conclusion:Conclusion: Serum insulin measured by four immunoassay methods presents with significant difference though highly correlated with each other. However, those differences may not affect much on the clinical e
8、valuation of patients with diabetes. KEY WORDS:KEY WORDS: insulin assay, radioimmunoassay, chemiluminescence immunoassay, comparability 上海交通大学上海交通大学 学位论文原创性声明学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究工作所取得的成果。 除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包 含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。 对本文的研究做出 重要贡献的个人和集体， 均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到
9、本 声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海交通大学上海交通大学 学位论文版权使用授权书学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、 使用学位论文的规定， 同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文 被查阅和借阅。 本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 保密保密，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密 不保密。 （请在以上方框内打“” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期：
10、年 月 日 上海交通大学硕士学位论文 1 前言前言 胰岛素检测对于糖代谢疾病的研究有着重要的作用，尤其是在低血糖病因分析、 糖尿病的发病机制研究以及评估胰岛 细胞分泌功能方面有重要的作用，其中动态 测量细胞储备胰岛素有助于临床确定糖尿病的病情和治疗方案。 目前实验室检测胰岛素的种类比较多，但常用方法有放射免疫法、酶联免疫法、 化学发光法、电化学发光法等 1。许多研究显示，不同的检测方法或检测系统在检测 胰岛素的灵敏度、特异性和稳定性等方面均存在显著差异，给临床采用胰岛素检测结 果进行辅助诊断和治疗监测可能带来了一些偏差或使临床医生及病人产生困惑 2。 尽管胰岛素检测的实验研究已有 50 多年的
11、历史，但迄今为止血清胰岛素的测定 标准化问题仍没有解决。许多研究显示，不同的胰岛素检测方法之间产生的差异非常 大，即使使用同一种方法，甚至同一种试剂盒，不同的实验室检测同一份血样，胰岛 素含量的测定值也相差很大。许多研究表明，造成胰岛素检测结果差异的原因是多方 面的，包括免疫技术差异、参考标准试剂差异，也有病人血液多种成分的干扰（尤其 胰岛素自身抗体等）和其他样本的特殊性问题。 本研究通过对目前临床实验室常用的四种胰岛素免疫检测方法进行系统性分析 比对，研究不同方法之间检测结果的差异性，分析产生差异的原因，探讨这些差异是 否直接影响了临床诊断糖尿病或者判断胰岛 细胞分泌功能。 上海交通大学硕士
12、学位论文 2 材料和方法材料和方法 一一. 患者血样资料 患者血样资料 随机选择 51 名来我院就诊的患者，男 22 例，女 29 例；平均年龄 47.5（2785） 岁。共采集血清样本 152 份，其中正常糖耐量患者 12 人，血样 42 份;空腹血糖升高 或糖耐量下减者 17 名，血样 54 份;2 型糖尿病的患者 21 名,血样 56 份。 所有患者均采集静脉全血 3ml 于普通玻璃管中，半小时后对血样离心分离（ 2000g， 10 分钟） ， 血清置80冰箱保存。 在进行胰岛素测定时解冻至 4冰箱保存， 并在 48 小时内完成比对检测。 静脉快速推注精氨酸（Arg）仅诱发快速胰岛素分泌
13、相(AIR) ,而静脉滴注 Arg 可 诱发胰岛素双相反应。第一相(即 AIR)是 Arg 刺激后短时间(25 min) 内,出现的一 个胰岛素快速分泌阶段,将胰岛细胞储存的胰岛素释放进入血液循环,循环中胰岛素 浓度快速升高也较快下降。 AIR 反映细胞储备的胰岛素对急性刺激产生反应的能力, 即细胞的分泌能力。 精氨酸刺激试验是以 26 min 胰岛素(C 肽) 均值与空腹胰岛 素(C 肽) 的差值来评价细胞分泌功能 3。选择 14 例接受精氨酸刺激试验的患者， 分别计算四种检测方法检测的各时点血清胰岛素的平均值， 分析不同的血清胰岛素检 测方法对临床判断糖尿病患者胰岛 细胞分泌功能是否有影响
14、。 上海交通大学硕士学位论文 3 二二. 质控标本 质控标本 采用 Bio-RAD Lyphochek Immunoassay plus control 的胰岛素冻干质控品，分 低、中、高三种浓度水平 LOT:40170。将质控品按操作要求溶解后等同于血清样本一 起进行随机检测，并进行五天的连续检测，分别计算各检测方法检测胰岛素低、中、 高浓度质控品的平均值、变异系数及总变异系数以及与原始参考值之间的差异。 三三. 仪器及试剂 仪器及试剂 四种检测方法和配套试剂的相关信息统计参见表 1。四种检测方法的灵敏度、定 标曲线和发光值及室内质控检测值均在本实验室可控范围内。 表 1： 四种检测方法的相
15、关资料 供应商 检测设备 样本量 (uL) 测定方法 检测灵敏度 （uU/mL） 最高检测浓度 (uU/mL) Linco 放射免疫 测量仪 100 RIA(M) 2.0 200 Bayer ADVIA Centaur 25 CLIA(A) 0.5 300 Roche Insulin E2010 20 ECLIA(A)0.2 1000 Diasorin Liaison 50 CLIA(A) 0.23 500 注：1. 四种胰岛素分析法都依据世界卫生组织（WHO）IRP66/304 进行标准化。 2RIA：放射免疫分析法；CLIA：化学发光免疫分析法；ECLIA：电化学发光 免疫分析法。 上海交
16、通大学硕士学位论文 4 四四. 统计分析 统计分析 所有的统计分析均在 SAS8.2 上完成。对四种胰岛素检测方法的测量值进行两两 比较，了解不同方法检测结果之间有无显著性差异，研究不同方法检测结果之间的相 关性及一致性。样本的正态性检验用 W 检验法。如符合正态分布，则用配对 t 检验， pearson 相关分析；反之则用符号秩和检验，spearman 相关分析。 五五. 临床评价 临床评价 由两位有经验的糖尿病专家根据每个病人的胰岛素检测结果， 评估不同的检测方 法是否会对患者病情的判断及治疗方案的选择产生影响。 上海交通大学硕士学位论文 5 结果结果 一一. 质控品检测值及各检测方法的精密度 质控品检测值及各检测方法的精密度 由表 2 可以看出，四种检测方法连续五天检测低、中、高三个浓度的胰岛素质控 品的总变异系数（精密度）为 1.65.9%，尽管有差异，但各检测系统的总体稳定性均 在可控状态。但同一胰岛素质控品在不同检测方法实测值之间存在差异，Linco RI
