《非综合征性前庭水管扩大患者拷贝数变异、kcnj10基因的筛查及基因表达的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《非综合征性前庭水管扩大患者拷贝数变异、kcnj10基因的筛查及基因表达的研究（102页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、l1分类号：R76443密级：非综合征性前庭水管扩大患者拷贝数变异、KCNJl0基因的筛查及基因表达的研究I828422Thestudyofcopynumbervariation，KCNJl0genescreeningandexpressioninpatientswithnon-syndromicEnlargedVestibularAqueduct作者姓名：赵建东学科专业：耳鼻咽喉科学专业导师：韩东一教授辅导老师：戴朴教授答辩委员会主席：，少匀&论文答辩日期：二零一零年五月二十四日院校地址：北京市复兴路28号邮政编码：100853本课题研究由以下基金联合资助：1国家自然科学基金面上项目(N03
2、0872862)2国家自然科学基金海外青年学者合作基金(N030728030)3首都医学发展科研基金(No20051032)本课题研究工作在解放军总医院耳鼻咽喉研究所聋病分子诊断中心完成。特此鸣谢!军医进修学院研究生学位论文原创性声明秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不
3、实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名专、也j3指导教师签名：砩再，一同期：扩6厂，名日期：29，o、j-一名军医进修学院研究生学位论文版权使用授权书本人保证毕业离院后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为军医进修学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其他手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)。论文作者签名舌趣麓指导教师签名：巧一日期：口p厂-日期：2p，。JI一2辱Lr。，一。(1)(3)。(7)(13)(15)(15)(19)结果(25)讨论(28)小结(32)参考文
4、献(34)第二部分非综合征性前庭水管扩大患者KCNJl0基因突变的筛查(41)引言(41)材料与方法(42)结果(47)讨沦(51)小结(54)参考文献(55)第三部分中国人群中非综合征性前庭水管扩大患者常见SLC26A基因突变的表达研究(59)引言(59)材料与方法(60)结果(72)讨论(75)fLP小结(77)参考文献78)综述(81)个人简历(93)致谢(95)、1-jarrayCGHAsn(N)AsP(D)CCNVcDNADFNADFNBEPEREVAFPESGHis(H)HRCTIVSMAPHarrayComparativegenomic比较基因组杂交hybridizationAs
5、paragineAsParticacidcytosinecopynumbervariationComplementarydeoxyribonucleicacid天门冬酞胺天门冬氨酸胞嘧啶核苷拷贝数变异互补DNAautosomaldominantdeafness常染色体显性遗传性耳聋autosomalrecessivedeafness常染色体隐性遗传性耳聋endocochlearpotentialendoplasmicreticulumenlargedvestibularaqueductFosmidpairedendsequencingguanmeHistidineHighresolutionc
6、omputerizedtomographyIntraveningsequence耳蜗电位内质网前庭水管扩大Fosmid末端配对测序鸟嘌呤核苷组氨酸高分辩率CT剪接序列Multiplexamplifiableprobe多重可扩增探针杂交技术hybridizationt，k军医进修学院博士毕业论文mRNANSHIolPCRPDSQMPSFSLC26A4SNPTprobeamplificationmessengerRNA信使RNAnon-syndromichearing非综合征性听力损失impairmentopenreadingframe开放阅读框Polymerasechainreaction多聚酶
7、链反应PendredsyndromePendred综合征QuantitativemultiplexPCRof短片段多重定量PCRshortfluorescentfragmentssolutecarderfamily26A离子转运体26A家族singlenucleotidepolymorphism单核苷酸多态thymine胸腺嘧啶核苷UTRuntranslatedregion非翻译区j，Avestibularaqueduct前庭水管21j军医进修学院博1：毕业论文中文摘要非综合征性前庭水管扩大(nonsyndromicEnlargedVestibularAqueductEVA)是一种最常见的内耳
8、畸形，其在感音神经性聋的患者中约占10左右。临床表现为学龄前发病的感音神经性听力损失，部分患者存在有低频骨气导差，表现为混合性听力损失；其听力损失从轻度到极重度不等，听力常呈现波动性或进行性下降，最终达重度或极重度，从而影响语言的学习或正常的交流。前庭水管扩大的患者在听力下降前常有感冒、发热、轻微头部外伤或其它使颅内压增高的诱发因素，因此对于该病的早期发现、早期诊断、早期干预成为预防或推迟其发病的有效措施。前庭水管扩大是一种常染色体隐性遗传性疾病，其与染色体7q3l上的SLC26A4基因突变有密切关系。在前庭水管扩大的患者中，约有6592的患者可以检测到该基因的突变。SLC26A4基因属于阴离
9、子转运家族，有12个跨膜区，N末端和C末端位于细胞内，表达于甲状腺、肾脏和内耳。介导硫酸根、碳酸氢根、甲酸根、草酸根、氢氧根、氯、碘及果糖等多种单价或二价的离子的转运，在机体离子成分平衡的维持中发挥重要作用。当SLC26A4基因发生突变后，突变体的蛋白表达及功能均发生变化，从而导致疾病的发生。随着对SLC26A4基因研究的逐渐深入，发现该基因突变具有很大的异质性：包括基因突变的形式、基因突变发生的位点及不同种族该基因突变图谱等均存在有很大的异质性。近年来的研究表明虽然非综合征性前庭水管扩大和SLC26A4基因突变有密切的关系，但国内外的研究均发现在相当一部分前庭水管扩大的病人中，未找到SLC2
10、6A4基因突变或仅找到一个单等位基因突变。为了明确这部分病人的致病机理；探讨其它遗传因素在这部分病人的耳聋发病中的作用，本课题研究了拷贝数变异和参与内淋巴钾离子调节的基因-KCNJl0基因突变在非综合征性前庭水管扩大的发病中的作用。为完善耳聋基因诊断的程序和方法提供依据。同时针对中国人群所特有的SLC26A4突变图谱，选取了几种常见的热点突变，进行了SLC26A4基因突变后的表达研究，以期为进一步探索SLC26A4基因突变的致病分子机制奠定基础。fL乞军医进修学院博士毕业论文第一部分应用MLPA方法对非双等位基因突变的SLC26A4基因拷贝数变异的筛查拷贝数变异(CNVs)是指在人类基因组中广
11、泛存在的，从1000bp到数百万bp范围内的缺失、插入、重复和复杂多位点的变异。是近年来发现的在人类基因组中除SNPs之外，另一类丰富的多态性来源，CNVs除广泛存在于正常个体的基因组中，也与染色体重组和一些遗传性疾病的发生有密切关系。常规的一些检测技术无法检测到CNVs的存在。为了解拷贝数变异是否在非综合征性前庭水管扩大的发病机制中起作用，本部分研究应用多重连接探针扩增技术(multiplexligationdependentprobeamplification，MLPA)技术对解放军总医院聋病分子诊断中心所收集到的非综合征性前庭水管扩大的患者中没有检测到SLC26A4基因任何突变及仅检测到
12、单个等位基因突变的患者进行SLC26A4基因拷贝数变异的筛查，寻找可能存在的致病性的拷贝数变异。在39例未找到SLC26A4基因突变及68例仅找到SLC26A4单等位基因突变的非综合征性前庭水管扩大的病人中；均未发现有明显的拷贝数变异的存在。基于试验结果我们推断有以下几种可能：(互)SLC26A4基因的外显子中确实不存在有拷贝数变异；因此拷贝数变异不构成非综合征性大前庭水管扩大的致病机制。(喜)SLC26A4基因中存在有拷贝数的变异，但这些拷贝数变异没有存在于开放阅读框架区，而是存在于内含子区或卜、下游的调控区等部位，用现有的MLPA检测试剂盒无法检测到。在SLC26A4基因周围或其他对SLC
13、26A4起调控作用的基因中，存在有拷贝数变异，这些拷贝数变异通过改变这些基因的表达或功能，间接地影响SLC26A4基因，从而导致非综合性前庭水管扩大的出现。军医进修学院博。卜毕业论文主要表达在血管纹，对于耳蜗电位(EP)的形成起重要作用，血管纹产生耳蜗电位(EP)并向耳蜗内淋巴分泌钾离子。耳蜗电位是耳蜗转导电流的主要驱动力量；钾离子电流是最主要的耳蜗转导电流。耳蜗转导电流产生了听力。KCNJl0突变可以导致耳蜗电位的消失，从而导致听力的损失。近年来的研究表明在Pendred综合征和非综合征性的前庭水管扩大中有KCNJlO基因突变的存在，由此推测KCNJl0基因突变在非综合征性的前庭水管扩大的发
14、病机制中起作用。为了解KCNJl0基因突变是否在非综合征性前庭水管扩大的发病机制中起作用，本部分研究对解放军总医院聋病分子诊断中心所收集到的非综合征性前庭水管扩大的患者进行了KCNJl0基因突变的筛查。在107例携带SLC26A4单杂合突变及未检测到突变的病例中，共检测到3例KCNJl0基因突变，其中有812GA杂合突变2例，1042CT杂合突变l例。在3ll例己筛查到SLC26A4基因双等位基因突变(纯合突变和复合杂合突变)患者中共筛查到12例KCNJl0突变；其中812GA杂合突变1l例；1042CT杂合突变1例。在229例正常人中共筛查到14例KCNJlO突变；其中812GA杂合突变11例，1042CT杂合突变2例，811CT杂合突变1例。对那些带有SLC26A4双等位基因突变，同时又带有KCNJl0基因突变患者的父母进行上述两个基因的筛查，结果表明其父母中必有一方为同时带有SLC26A4和KCNJl0单杂合的携带者，但是临床症状却表现正常，既没有听力的下降，也没有前庭水管的扩大。这同国外有关研究的观点截然不同。根据以上实验结果我们初步得出以下几种推论：(芏)KCNJl0的单杂合突变在中国人群中是一种普遍存在的现象；中国人群中KCNJl0最常见的突变类型是812GA；KCNJl0虽然在耳蜗电位及听觉形成过程中起
