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1、牛奶中抗生素残留及其检测徐州市畜禽水产品检测中心摘要:抗生素在畜牧业中广泛应用，这造成了牛奶中大量残留抗生素。本文论述了牛奶中残留抗生素的原因及其危害性，并列举了目前较为流行的牛奶中抗生素残留的检测方法，介绍了其检测原理。为了了解徐州市牛奶中抗生素的残留情况，随机抽取样品40份，分别采用TTC法和纸片法对样品进行抗生素残留的检测，以农业部2001年发布的无公害食品牛奶中“抗生素不得检出”为判断标准。调查结果显示徐州市牛奶中有部分牛奶存在抗生素的残留。关键词：牛奶，抗生素残留，国标TTC，微生物法Assay on Residue of Antibiotics in MilkAbstracts:
2、Antibiotics are used in stockbreeding abroad, and It is the reason why there is residue of antibiotics in milk. The reason and hazard of antibiotics residue are discussed in this paper. Several kinds of popular antibiotics screening test are listed and their principle is introduce simultaneously. In
3、 order to know the situation of antibiotics residue in milk from Xuzhou, we selected 40 samples at random. And detected the residue of antibiotics in milk by TTC and paper disc. Antibiotics should not be detected from milk according to the standard issued by the department of agriculture in 2001, bu
4、t the test results showed that the residue of antibiotics in milk from Xuzhou is higher. Key words: milk, antibiotics residue, TTC, microbial test抗生素是治疗动物疾病的常用药物，并作为饲料成分被广泛使用。但抗生素容易在动物体内及其产品中残留，经过食用后进入人体，给人类的健康造成危害。目前人们对牛奶的消费量越来越大，牛奶中残留的抗生素会对饮用者的身体健康造成危害，也会对牛奶发酵过程的发酵剂产生抑制作用，从而使牛奶变质造成经济损失。牛奶中抗生素残留的问题
5、日益受到社会的重视。一牛奶中抗生素残留情况的简介1抗生素的种类介绍抗生素类是主要的兽药添加剂和兽药残留物质，约占药物添加剂的60%，在世界及我国的农产品或食品进出口贸易中，常需检测的抗生素残留主要有以下六类： 内酰胺类：内酰胺类抗生素主要用于抗革兰氏阳性细菌感染，也能有效抑制抗革兰氏阴性细菌。尽管仅有少数的这类化合物被用来治疗养殖动物疾病，然而这就有可能以残留物形成出现在食品中。尤其是青霉素G因为价廉广谱，而被广泛应用。因此对内酰胺类药物尤其是青霉素G残留的检测十分重要。这类抗生素主要包括青霉素、头孢霉素、头孢噻呋、阿莫西林等。磺胺类：磺胺类药物作为预防和治疗用药广泛用于食用动物中。磺胺类药物
6、的副作用有过敏反应，尿结石和造血紊乱。这类抗生素主要包括磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺嘧唑等。四环素类：主要用于食用动物和海洋动物的养殖。土霉素和金霉素被加入饲料以促进生长和预防疾病。这类抗生素主要包括四环素、金霉素、土霉素、强力霉素等。氨基糖苷类：氨基糖苷类抗生素主要用于治疗动物的各种感染，并以亚剂量给药方式预防疾病和提高饲料利用率。已经发现这类抗生素损害颅神经，引起失聪和损害肾脏，因此它们在食品中的残留引起关注。这类抗生素主要包括庆大霉素、新霉素、链霉素、二氢链霉素等。大环内酯类：这类抗生素治疗革兰氏阳性菌及李斯特菌和支原体的某些菌株效果较好。常用于治疗动物的感染，牛的呼吸
7、道疾病及治疗乳腺炎。这类抗生素主要包括红霉素、泰乐霉素、林可霉素等。氯霉素类：这类抗生素在治疗人的疾病时，会产生再生障碍性贫血、再生不良性贫血、粒性白血球减少、舌炎、口腔炎等副作用。因此已经被人类所禁用。农业部也于2002年将其列为禁用的18种兽药之一。这类抗生素主要包括氯霉素、甲砜（氯）霉素、氟砜尼可等。2牛奶中抗生素残留的来源随着畜牧业的发展，在奶牛的饲料中添加一定比例的抗生素已经十分普遍了，主要是预防疾病的发生，这也是牛奶中残留抗生素的主要来源。其次，对乳牛用药不当也是造成牛奶中抗生素残留的又一来源。特别是当使用乳房灌注法治疗奶牛的乳房炎时，容易造成牛奶中残留抗生素。此外在高温季节，一些
8、不法产奶户为了防止牛奶酸败，往往向牛奶中加入各种抗生素，这也是牛奶中抗生素残留的一个来源。经过调查表明：重用经过抗生素治疗的乳牛用过的挤乳器给正常乳牛挤乳，也可使正常牛的牛乳中残留抗生素，由此可见，挤乳是牛奶中抗生素残留的另一个来源。3牛奶中抗生素残留的危害虽然对食品中药物残留食用后是否会引起严重的后果仍有争议，但是目前可以肯定的是，饮用含抗生素残留的牛奶，会对人体造成伤害，尤其是那些长期饮用者。牛奶中含有抗生素，对长期饮用者来说无疑是等于长期服用小剂量的抗生素，那些对抗生素过敏的人服用残留抗生素的牛奶后会发生过敏反应，如皮疹，过敏性休克等等，严重时甚至会危及生命。即使是正常的饮用者也会破坏肠
9、道内的菌群平衡，会使病菌，念珠菌大量增殖而导致局部或全身感染，并引起胃肠疾病和生理紊乱，使体内的某些致病菌产生耐药性，使该种抗生素失去对患者的治疗效果。而且抗生素具有一定的毒性，长期服用含抗生素的牛奶会对服用者的肝肾功能造成一定的伤害，严重的还会引起致癌、致畸、甚至致突变。从牛奶加工的角度看，抗生素残留会抑制发酵细菌的生长，影响牛奶的发酵。使得牛奶的产量和质量大幅度降低。而市场不允许出售含抗生素残留过量的牛奶又造成了牛奶生产者经济上的损失。4牛奶中抗生素的残留现状 我国过去对牛奶中抗生素残留的卫生指标没有明文规定，直到2001年10月农业部发布实施了无公害食品生鲜牛乳行业标准，对生鲜牛乳的卫生
10、指标定为“抗生素不得检出”。所以2001年以前我国市场上出售的生鲜牛奶抗生素残留情况还是比较严重的。王晓光（1992年）测得长春市市售鲜牛奶中抗生素残留阳性率为3.3%。葛华等（1996年）对西宁市市售各种乳制品进行了检测，检测结果抗生素残留阳性率为4.3%。张利琴（1999年），测得西宁市市售鲜奶中抗生素残留阳性率为2%。常建军（2000年）测得西宁市市售鲜奶中抗生素残留阳性率为5.3%。从已知道的信息看，即使是在2001年农业部发布实施了无公害食品生鲜牛乳行业标准之后，我国也并没有严格执行这一标准。马群飞等（2002年）对福建省生鲜牛乳抗生素残留进行测定，结果86件生鲜乳样中共检出抗生素残
11、留阳性17件，检出率高达17.8%。丁洁等（2004年）对南京市牛奶中的抗生素残留进行检测，结果南京市市售奶粉的抗生素残留阳性率为26.7%，消毒牛奶的抗生素残留阳性率为8.0%。从以上信息可以看出我国牛奶中抗生素残留状况十分令人担心，有关部门应该加强对牛奶生产的管理，有效检测和监控牛奶中的抗生素等药物的残留，保证人们饮用牛奶的卫生和安全。二检测方法简介根据WHO提供的数据，欧盟药典确定了食品中各种抗生素残留的最大限制(MRL)，MRL也就是欧盟药典认为食品中含有某种兽药残留的最大量。为了使原料乳和乳制品中的抗生素符合MRL的要求，奶牛厂和监督部门都在寻找准确可行的抗生素检测方法。目前牛奶中抗
12、生素残留的检测方法有很多，比较常用的是微生物法，如纸片法TTC法等。此外还有其他理化方法，主要包括:高效液相色谱法、色谱/质谱连用法、免疫法等等。纸片法，即PD（paper disc）法。根据所用菌种的不同，常用的纸片法可以分为枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片法。这两种方法主要是用来检测牛奶中的-内酰胺类抗生素。它们的操作过程基本相同只是所选的菌种不同。枯草杆菌纸片法的结果易出现假阳性，为了确定阳性物质是否是青霉素，要对加热后的乳样用青霉素酶处理，以灭活乳样中的青霉素，然后再进行检测。而嗜热脂肪杆菌纸片法不仅可以检测奶样中的-内酰胺类抗生素，并且可以确定样品中是否还存在其他抑菌物质。因此，实践
13、中嗜热脂肪杆菌纸片法在奶样检测中的应用比枯草杆菌纸片法更为广泛。国标TTC法，TTC即氯化三苯基四氮唑(tripheye tetrazolium chloride)，这是目前我国规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409-85)。在牛乳中加入菌种，一般是嗜热链球菌，经过培养后加入TTC指示剂，观察颜色变化，从而确定牛奶中的抗生素残留情况。如果牛奶中含有抗生素残留则培养后菌种并不增殖，此时加入的TTC指示剂不发生还原显色状态；如果没有抗生素的残留则培养后菌种可以增殖，此时加入TTC指示剂则TTC被还原成红色。高效液相色谱法，高效液相色谱法是目前广泛应用的一种理化检测方法，它引用了气相色谱
14、理论，在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分离速度快，效率高和操作自动化。高效液相色谱法测定牛奶中的药物残留都要经历样品处理（包括样品的提取，脱蛋白，离心，层析柱净化，衍生化等步骤），残留药物的分离和残留药物的检测。色谱/质谱联用法，色谱/质谱联用法由于实现了高效层析分离和检测联机，可以用电脑控制层析条件和数据处理。它的特异性，灵敏度和重复性都很好，并且可以一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物检测，对分析牛奶中青霉素类抗生素，质谱作为一种专一检测器已经获得了广泛的应用。免役法，目前药物残留免役分析技术主要分为两大类：一是相对独立的分析方法，即免役测定法如RIA，ELIS
15、A，固相免役传感器等。二是将免役分析技术与常规理化分析技术联用，如利用免役分析的高选择性作为理化测定中的净化手段，典型的方式为免役亲和色谱。牛奶中的抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题，应该重视和加强检测工作，并努力研究发展一些简单，快速的多残留分析技术，实现分析过程的自动化或智能化，以提高分析效率，降低成本，保证消费者的健康。本次实验是在徐州市兽医卫生监督所完成的，主要采用的是国标TTC法。三实验材料与方法材料新鲜牛奶:取自单位A，单位B，单位C，徐州周边地区的私人奶牛养殖户即单位D。随机抽取40份作为待检测样品。其中单位A 10份，单位B 10份，单位C 10份，单位D 10份。菌种:嗜
16、热乳酸链球菌，取自徐州绿建乳品公司。试剂:TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)，化学纯，购买自仪器水浴箱一个，温箱一个，高压锅一个，100温度计一个，蜡笔一只，试管架一个，灭菌10毫升吸管，灭菌1毫升吸管，灭菌15150mm试管。、实验方法国标TTC法（GB44789.27-84）1原理TTC即 氯化三苯基四氮唑(tripheye tetrazolium chloride)，这是目前我国规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409-85)。在牛乳中加入菌种，一般是嗜热链球菌，经过培养后加入TTC指示剂，观察颜色变化，从而确定牛奶中的抗生素残留情况。如果牛奶中含有抗生素残留则培养后菌种并不增殖，此时加入的TTC指示剂不发生还原显色状态；如果没有抗生素的残留则培养后菌种可以增殖，此时加入TTC指示剂则TTC被还原成红色。2牛奶样品的预处理:将生鲜牛乳在1
