《青岛文昌鱼amphihsp90基因克隆、组织表达及其免疫作用初步研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《青岛文昌鱼amphihsp90基因克隆、组织表达及其免疫作用初步研究（90页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号Q 7 1 密级 厶Z 力； 硕士学位论文 S h n n d o n gU n 如e r S i 毋M 倪S t e r ST h e S i S 论文题目：青岛文昌鱼A m p h i H S P9 0 基因克隆、 组织表达及其免疫作用初步研究 B r a c h i o s t o m aB e l c h e r iT s i n 酣a u e n s eA m p h i H S P 9 0 G e n e ：C l o n i n g ，T i s s u eE x p r e s s i o na n dI m m u n e F u n c t i o nS t u d
2、y 作者 专业 导师 合作导师 7 毕佳 发育生物学 陈忠科 2 0 1 1 年5 月2 0 日 勘o 簪 II-I 原创性声明 本人郑重声明：所蹦学擞，是本 在导师的指导下，独立蝴 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任伺其他个人 或集体已经梵越姑磐歌曲钎惆弼课。对本文的觥出重要贡献的个 和集 体，均己在文中以明礁I 力式标明。本声明的法裤萄蔗争任由本人殍相。 日 期：蚍刁 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学确；躲留、使用学位冀蚊的规定，同意掣爿交保留或 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅； 本 授权山东煳以将本学位论文的全部
3、或部分内容编入有关数据库进行检 索，可仑潲影印、缩印或划也复韦怦劂翮鼢吼编本剿啦仑文。 ( 保密论文在解密后应遵守I 雌见翘 论文作者签名刁饱 夕， 匕 f 师签 日期： 1 “ 妒p Jr， 吣 聋N 山东大学硕士学位论文 目录 摘要l A b s t r a c t 。4 符号说明5 第一部分综述。7 1 1 文昌鱼的地位、组织结构及其免疫学研究7 1 2 热休克家族成员在免疫功能调节中的作用研究进展1 3 1 3H S P s 的研究意义和未来展望2 5 参考文献2 7 第二部分青岛文昌鱼H s P 9 0 基因的克隆以及演绎蛋白的进化分析3 3 2 1 前言3 3 2 2 材料和方法3
4、 4 2 3 结果与讨论4 4 参考文献5 7 第三部分A m p h i H S P 9 0 基因和蛋白的表达o 5 9 3 1 前言5 9 3 2 材料和方法5 9 3 3 实验结果6 9 3 4 讨论7 0 参考文献7 2 第四部分A m p h i H s P 9 0 在免疫冲击中的差异性表达7 3 4 1 前言7 3 4 2 实验材料一7 3 4 3 实验仪器7 4 4 4 实验方法7 4 4 5 实验结果7 6 4 6 讨论：7 9 参考文献8 0 本论文的创新之处8 1 本论文的不足之处。8 1 致谢8 2 l 耐 蟾， 1 气 姆 山东大学硕士学位论文 摘要 H S P 9 0
5、 家族是在进化上高度保守的蛋白家族，在细胞中含量较高，在热休克、 重金属、缺氧、酸中毒、细菌病毒侵染等情况下其含量可成倍增加。越来越多的 证据表明，H S P 9 0 能够参与先天性及获得性免疫应答。 文昌鱼( A m p h i o x u s ) 是位于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型，是研究 脊椎动物进化的宝贵材料。本文利用分子生物学的方法和手段，克隆到文昌鱼 H S P 9 0 基因，预测演绎蛋白片段的一级结构，分析该基因在进化中的位置；探讨 该基因在正常文昌鱼成体组织中R N A 和蛋白的表达水平以及致病微生物冲击条 件下该基因在文昌鱼成体组织中表达的差异性变化。为研究文昌鱼H S
6、 P 9 0 基因的 结构及其进化、该基因在文昌鱼免疫过程中的作用提供了一系列实验依据。 本文利用R T P C R 的方法，克隆得到的A m p h i H S P 9 01 4 8 1 b p ，编码4 9 3 个氨 基酸组成的蛋白。该蛋白片段在氨基酸水平上与黑猩猩、鼠( 大鼠和小鼠) 、鸡、 爪蟾、斑马鱼、果蝇等的H S P 9 0 蛋白的相似性为8 0 一8 5 ，且具有典型的H S P 9 0 保守结构域。 经过系统进化分析发现，A m p h i H S P 9 0 介于脊椎动物和无脊椎动物H S P 9 0 蛋 白之间说明该基因的进化地位与文昌鱼的进化地位是基本上一致的。 组织原
7、位杂交的结果表明，A I I l p h i H S P 9 0 在文昌鱼成体组织中广泛表达( 包 括表皮、鳃丝、肠上皮、精巢膜和卵巢膜) ，而免疫组织化学结果表明H s P 9 0 在 文昌鱼体内表达则大量在肌肉和鳃柱中表达，少量在表皮中表达，A m p h i H S P 9 0 这种蛋白表达模式与基因表达模式的不一致性可能有两个原因：其一是肌肉内有 丰富的H S P 9 0 ，可能与H S P 在肌细胞内行使分子伴侣的角色有关，H S P 可与肌动 蛋白、微管蛋白和酪氨酸激酶等结合，参与细胞最基本的代谢活动；各种上皮组 织中H S P 的m R N A 表达丰富，可能与H S P 9 0
8、 蛋白分泌有关。其二，使用异源性抗 体的可信度较低造成的。蛋白表达的真实性有待于进一步的研究证实。 利用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对文昌鱼进行免疫冲击，采用半定量 R T P C R 的方法检测A m p h i H S P 9 0 基因水平表达量的变化，结果发现，无论是经 大肠杆菌还是金黄色葡萄球菌冲击后，对照组A m p l l i H S P 9 0 基因的表达量没有 2 推测A l p h i H S P 9 0 ，免疫冲击 哮 q 、 _ ， n 审 山东大学硕士学位论文 A b s t r a c t H S P 9 0f a m i l yi sah i 曲l yc o n s e
9、 r v e d 伽n i l yo fp r o t e i n si I le V 0 1 u t i o n a r i l y ，i th a Sa h i g hl e v e li nc e l l s ，a st h ec a s eo f h e a ts h o c k ，h e a V ym e t a l s ，h y p o x i a ，a c i d o s i s ， i n f e c t i o no fb a c t e r i ao rv i m s e s s u c h ，i tm a yb ed o u b l e di t sc o n t e n
10、 t M o r ea n dm o r e e v i d e n c e ss h o w e dt h a t ，H S P 9 0c o u l db ei n v o l v e di ni I l n a t ea n da c q u i r e di m m u n e r e s p o n s e s A m p h i o x u si s at r a n s i t i o nt y p el o c a t e db e t w e e ni n V e r t e b r a t e sa n dV e r t e b r a t e s ， a n di st
11、h ev a l u a b l em a t e r i a li nt h es t u d yo fV e n e b r a t ee V o l u t i o n I nt h i sp a p e r ，t h e H S P 9 0g e n eo fa m p h i o x u s 、V a sc l o n e db yP C R T h ep r i n l a l ys n u c n l r eo ft h ep u t i t i V e p r o t e i n 行a g m e n to fA m p h i H S P 9 0w a sp r e d i
12、c t e d H o m o l o g ya n a l y s i so fA m p l l i H S P w a sc o m p l e t e d T h ee x p r e s s i o n1 e V e lo fR N Ao rp r o t e i no fA 血p h i H S P 9 0i nn o m a l a d u l ta m p h i o x u st i s s u e sw a sd e t e c t e d b yI S Ho r I M M S T h ed i 虢r e n c ec h a n g e so f t h i s g e
13、 n e i n e x p r e s s i o n u n d e rt h e c o n d i t i o n so ft h e i m p a c t o fp a t h o g e n i c m i c r o o r g a n i s m s i na d u l t锄p h i o x u st i s s u e s c o m p a r e dw i mt h a t o fh e a l t h 锄p h i o x u s w a ss h o w e db yP C R T h o s er e s u l t e sp r o V i d e das e “e so fe x p e r i m e n t a l e v i d e n c e sf o rs t u d y i n gi t ss t r u c t u r e ，t h ee V o l u t i o na n dt h er o l ei ni m m u n ep r o c e s so f a m p h i o x u s T h ec l o n e dA m
