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1、 第九章 第九章 维生素类药物的分析维生素类药物的分析 Analysis of Vitamines 维生素维生素A A 维生素维生素B B 1 1 维生素维生素C C 维生素维生素E E 第一节 维生素维生素A(A( Vit A) 2-Cis Neovitamin Aa 2,6-dicis Isovitamin Ab 4-Cis Neovitamin Ab 2,4-dicis Neovitamin Ac 6-Cis Isovitamin Aa Retinol (Vit A alcohol) VA acetate VA polmitate 9 1 2 3 4 5 6 7 8 Vit A含量表示
2、I.U.(international Unit) 国际单位 效价(I.U./g) 按WHO规定 VA acetate VA alcohol 效价(I.U./g) 2.907106 3.33106 1g pure VA acetate 2.907106I.U. 按WHO规定 VA acetate VA alcohol Vit A含量表示 I.U.(international Unit) 国际单位 效价(I.U./g) 效价(I.U./g) 2.907106 3.33106 1g pure VA acetate 2.907106I.U. 第一法 测定VA acetate 环己烷为溶剂 max328
3、nm 吸收度 比值 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 测定 吸收度 (nm) 300 316 328 340 360 如果max为326329nm; -规定值0.02 则不需要校正 如果max为326329nm; 但是，-规定值0.02，则需校正 Vit A UV法校正公式 第一法 A328(校正)=3.25(2A328- A316 -A340) 若 在3%范围，则仍以 A328计算含量 若 在-15%-3%范围， 则以A325(校正)计算含量 若 3%，或-15%， 则采用第二法 第二法 测定其他维生素 第一法未通过，包括： 则A325(校正)=6.815A325-
4、2.555A310-4.260A334 max不在326329nm，必须经皂化： 酯 乙醚提取VA醇，洗涤，过滤 溶于异丙醇 在 300，310，325，334nm处分别测A 当max为323327nm，A300nm/A325nm0.73 若 在3%范围，则仍以 A325计算含量 若max不在323327nm，或者 A300nm/A325nm0.73 表明干扰杂质含量过高，则可采用色谱法将 未皂化部分纯化后再进行测定 第一法 A328(校正)=3.25(2A328- A316 -A340) A 213 nm A 213 nm Vit A sample pure VA acetate impur
5、ities 校正公式由来校正公式由来 用几何图形推导出公式 A325(校正)=7A325-2.625A310-4.375A334 比实际值高出2.62.7% 故扣除2.65%得第二法校正公式 A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334 称取Vit A滴剂0.1082g(标示量50 000I.U./g) ，加环已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一 50 ml量瓶中，加环已烷至刻度，摇匀后置 石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于 以下波长处测得相应的吸收度值，试求此 滴剂中Vit A的标示量百分率： (nm) 300 316 328 340 360 A 0.
6、330 0.508 0.570 0.477 0.190 精密称取Vit A滴剂0.06126g(标示量50000 I.U./g)，置于25ml量瓶中，加环已烷至刻 度，精密吸取2ml置于另一25ml量瓶中，加 环已烷至刻度，并混匀，置石英比色皿中 ，以环已烷为空白，分别于以下波长处测 得吸收度值，试求此滴剂中Vit A为标示量 的百分含量： (nm) 300 316 328 340 360 A 0.330 0.508 0.570 0.477 0.190 第二节 维生素维生素B B 1 1 ( ( Vit B1) Vit B1 Thiamine Hydrochloride NaOH H2O 环合
7、 O2H 硫色素 Thiochtome 结构特点与鉴别 噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧 化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生 成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇 中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色 素荧光反应。为维生素B1所特有 生成沉淀反应 分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂 (碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸 ， 雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀 维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S, 与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS 含量测定 Assay 硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry 非水溶液滴定法 Non-aqueous Titr
8、imetry 硫色素荧光法 Thiochrone Fluoremetry Vit B1 硅钨酸重量法 2Vit B1+过量硅钨酸* 滤过 洗涤* 用热的稀HCl洗 干燥恒重*80 H+ 煮沸*23分钟；过长，沉淀易于 附着于器壁上 Vit B12SiO2(OH)212WO34H2O 沉淀 第三节 维生素维生素C(C( Vit C) 6 1 2 3 4 5 L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸 有生物活性 有生物活性 无生物活性 -2H +2HH2O OH-(H+) H2O 50 蓝色 -3H2O 糠醛 -CO2 戊糖 含量测定 碘量法 2,6-二氯靛酚法 第五节 维生素维生素E(E
9、( Vit E) R1 R2 Vit E (dl-Tocopheryl Acetate) Synthetic Natural Product R1 R2 content(%) -Tocopheryl 52.0 68.0 -Tocopheryl 9.3 22.0 -Tocopheryl 28.0 5.0 -Tocopheryl 10.7 5.0 ChP VE 中检查生育酚 取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二 苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L) 滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得 过1.0ml 固定液：5% SE30 柱 温：25510 检测器：
10、FID 内 标：十六酸十六醇酯 鈰量法(%) GC(%) 97.91 83.53 97.99 82.51 98.48 85.09 14.54 VE 24.40 内标 VE丸剂GC法 VE(纯品) 测得量 (mg) 17.22 17.15 加入量 (mg) 17.3 回收率 (%) 99.54 99.13 中国药典 维生素E 色谱条件与系统适应性试验 System Suitability Tests SST 以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2% ；柱温为265，理论板数按VE峰计算，应 不低于500，VE峰与内标峰的分离度应大于 2。内标：正三十二烷 校正因子测定 取正三十二烷适量，加正
11、已烷溶解并稀释 成每1ml中含1.0g的溶液，摇匀，作为内标 溶液。另取Vit E对照品约20mg，精密称定 ，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶 液10ml，密塞，振摇使溶解；取13l注入 气相色谱仪，计算校正因子 测定法 取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥 形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞， 振摇使溶解；取13l注入气相色谱仪，测 定，计算，即得 JP Vit E: dl-生育酚 色谱柱：ODS 1530cm4mm 510m 流动相：甲醇-水 (491) 流 速：调整到生育酚的tr10min UVD：292nm R2.6 人血清中VA和VE的含量测定 Waters -Bonda
12、pak C18 30cm3.9mm Resolve C18 预柱 甲醇-水 (964)，1.2ml/min UVD：08min 330nm 8min后 292nm 血清样品的制备 血样离心后，分离血清，置5ml塑料试管中 ， 充N2密封，于-40保存备用 4,6 Cholestadienol 胆甾醇，胆固醇 Cholesteral 胆甾-5烯-3-醇 Vit D2 骨化醇 Ergocalciferol 9,10-开链麦角甾- 5,7,10(19),22-四烯-3-醇 22 1 2 3 4 5 6 7 10 Vit D3 胆骨化醇 Cholecalciferol 胆钙化醇 9,10-开链胆甾-5,7,10(19)- 三烯-3-醇 USP 24 Cleanup column 30cm4.6mm C8 Mobile phase A CH3CNCH3OHH2O 25 25 1 The amount of H2O & the flow rate may be varied to meet system suitability requirement. Analytical column 25cm4.6mm porous silica particle 510m Mobile phase B n-amyl alcoholDehydrated hexane 3 1000 UVD：254nm
