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1、化药质控分析方法验证和杂质研究 质控分析方法验证 1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证可接受标准 3. 有关物质方法验证可接受标准 4. 溶出方法验证可接受标准 2 Venturepharm PDS 质控分析方法验证 1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证 3. 有关物质方法验证 4. 溶出方法验证 3 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 v验证内容： 专属性 线性 范围 准确度 精密度（重复性、中间精密度和重现性）、 检测限和定量限 耐用性 系统适用性 中国药典2010年版二部附录 A 药品质量标准分析方法验证指 导原则 4 Venturepharm P
2、DS 1. 方法验证的主要内容 专属性方法不受杂质、降解物、辅料的影响，可正确鉴定被分析物 鉴别反应：仅被分析物呈正反应，阴性对照呈负反应，结构相似及组分 中的有关化合物也呈负反应。 杂质检查：加入的杂质可与共存物质分离并被检出 与原理不同的可信方法比较；强制降解 含量测定：比较加入杂质或辅料前后的测定结果 与可信方法比较测定结果（强制降解样品） 空白对照应无干扰，主成分与各杂质峰 （该杂质峰与其他峰）R2 5 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 专属性试验中需要注意的问题 波长的选择； 每次试验时必须运行空白样品； 试剂、玻璃容器、流动相和过滤介质可能会影响方法的 专
3、属性。 6 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 线性在设计的测定范围内，样品浓度与响应值呈线性关系 线性是定量测定的基础，设计定量测定的项目， 如杂质定量检查、含量和溶出方法均需要验证其 线性 可用同一贮备液精密稀释后配制，或分别精密称 样配制。 7 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 线性在设计的测定范围内，样品浓度与响应值呈线性关系 含量测定：在80%-120%浓度范围内配制样品。（考虑含量浓度、 含量均匀度浓度及溶出的浓度，实际操作采用20%-200%） 相关系数R0.998，Y轴截距在100%响应值的2%以内，RSD2.0% 杂质定量测定
4、：在定量限至一定浓度范围内配制样品。（考虑实 测该杂质的值） 相关系数R0.990，Y轴截距在100%响应值的25%以内, RSD10% 8 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 范围能达到一定准确度、精密度和线性的浓度区间，为规定值 涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量 测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。 分析方法的范围应根据具体分析方法以及对线性、准确度、 精密度的结果和要求确定，无特殊要求时，通常采用以下标 准： 9 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 范围能达到一定准确度、精密度和线性的浓度区间 ，为规定值
5、半成品或成品含量测试：80%-100%或更宽 含量均匀度：70%-130%，据剂型特点有差异 溶出度：限度的20%，或下限的-20%至上限的+20% 定量杂质：规定限度的20%，或采用峰面积归一化法 与含量同测时，为杂质限度的-20%至含量上限的+20% 10 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 准确度方法测定结果与真实值或参考值的接近程度，用回收率表示 准确度是定量测定的必要条件，涉及到定量测定的检测项目均需 要验证其准确度，如杂质定量测定、含量和溶出方法。 分析方法的准确度能够确保： 样品中的待测物全部溶解 待测物全部从检测器中检出 11 Venturepharm
6、PDS 1. 方法验证的主要内容 准确度方法测定结果与真实值或参考值的接近程度，用回收率表示 配制三个浓度下各三个样品，共九个样品平行两次测定 回收率：辅料+对照品 加样回收率：样品+对照品（扣除本底值） Q：制剂中某已知杂质的回收率如何测定？(含已知量被测物的各组分混合 物) 含量测定：配制80%、100%和120%三个浓度。回收率在98.0%-102.0% 之间，RSD 2.0% 定量杂质：配制浓度根据有关物质定量限和该杂限度。回收率在80%- 120%之间（杂质浓度为定量限时放宽至70%-130%），RSD 10% 能否得到制剂 的全部组分？ 12 Venturepharm PDS 1.
7、 方法验证的主要内容 准确度 原料药： 可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定； 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果 进行比较 13 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 准确度 制剂： 用含已知量被测物的各组分混合物进行测定； 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的 被测物进行测定（加样回收试验法） 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果 进行比较 14 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 准确度 杂质 ： 往样品中加入已知量的杂质进行测定； 若不可能得到某种杂质或降解产物，可把此方法的分析 结果与另一已
8、验证的或药典的分析方法获得的结果进行 比较 。 15 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 精密度多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度 使用偏差d、标准偏差SD和相对标准偏差RSD表示 偏差 d=xi-x 测量值与平均值之差 标准偏差 相对标准偏差 16 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 精密度多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度 使用SD和RSD表示时取样测定次数应至少6次。 重复性：同一分析人员在相同条件下测定结果的精密度； 可采用3样各测3次或1样测6次 含量测定RSD 2.0%，杂质定量RSD 15% 中间精密度：同实
9、验室的不同人员、时间和设备测定结果的精密度 含量测定RSD 2.0%，杂质定量RSD 20% 重现性：不同实验室不同分析人员测定结果的精密度 17 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 检测限和定量限被分析物可被检测和被准确定量的最低值 检测限：3S/N ；定量限：10S/N S主峰信号 ；N主峰附近1-3min处的噪音 Q: 含量、溶出测定？（LOD/LOQ） 杂质定性测定？定量测定？ （LOD/LOQ） LODLOQ 未检出可检出可定量 18 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 耐用性测定条件发生微小变动时,测定结果不受影响的承受程度 变动因素
10、： 含量测定：MP5%; pH0.2%; 柱温5; v20% 有关物质： MP5%; pH0.2%; 柱温5; v20%; 5nm; 三根色谱柱 若测试条件要求苛刻，则建议在方法中予以写明。 可接受标准： 含量（有关物质）测定主峰（各杂质峰）的拖尾因子2.0；主峰与 杂质峰（杂质峰与其它成分峰）达到基线分离；各条件下测得结果（ n=6）的RSD 2.0% 19 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 耐用性 通过对改变条件后与标准条件下结果的比较来评估方法的耐用性，改变 条件后与标准条件下的结果的差异计算公式如下： Difference% =100-100Rm/Rs Rm为
11、改变条件后的含量结果；Rs为标准条件获得的含量结果 可接受标准：原料药与制剂：主成分含量差异1.5% 杂质： 杂质水平接受标准 0.2%绝对值0.05% 0.2%-1.0%相对值20% 1.0%相对值10% 20 Venturepharm PDS 1. 方法验证的主要内容 系统适用性对整个系统（分析设备、电子仪器与实验操作、测试 样品）进行评估的指标 含量测定/杂质检查 配制6份同浓度供试品/杂质溶液进行分析，结果可接受的标准如下表所 示 RSD峰面积RSD保留时间拖尾因子T及分离度理论塔板数 含量测定 （主峰） 2.0%1.0%T2.0,主峰与杂峰基线分离符合标准规定 杂质研究 （杂质峰）
12、2.0%1.0%T2.0符合标准规定 21 Venturepharm PDS 不同分析方法对验证项目的要求： 验证项目鉴别杂质定性测定杂质定量测定含量及溶出度等 准确度-+ 精密度重复性-+ 精密度中间精密度-+ 专属性+ 检测限-+- 定量限-+- 线性-+ 范围-+ 耐用性+ 22 Venturepharm PDS 方法再验证 某些情况下，需要对分析方法再次进行全面或部分验证，以保证分 析方法可靠。验证内容由改变程度决定。 原料药合成工艺改变可能引入新杂质，验证杂质检查法和含量 测定方法的专属性； 原料药来源变更可能影响杂质及含量测定的专属性和准确度， 需对杂质检查法和含量测定进行再验证；
13、 制剂处方组成改变、辅料变更可能影响鉴别专属性及含量测定 的准确度，需验证鉴别和含量测定方法； 质量标准中部分内容变化，如LC测含量的波长改变重新进行检 测限、专属性、准确度、精密度、线性等内容的验证。 23 Venturepharm PDS 质控分析方法验证 1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证可接受标准 3. 有关物质方法验证 4. 溶出方法验证 24 Venturepharm PDS 2. 含量方法验证可接受标准 准确度配制80%、100%、120%供试品各三份，分别测定其含量；各浓 度下测得的平均回收率在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的 RSD2.0% 线性取80
14、%-120%（或50%-150%）浓度范围内的6份供试液；测得回归 线的相关系数R0.998，Y轴截距在100%响应值的2%以内，响应因子的 RSD2.0%。 重复性6份相同浓度供试液，1人在尽可能相同的条件下测定，测得6份 供试液含量结果的RSD 2.0% 中间精密度6份相同浓度供试液，分别由2人用不同仪器测定，测得12个 含量结果RSD 2.0% 专属性空白对照应无干扰，主成分与各有关物质峰分离度R2，主峰纯 度因子980 25 Venturepharm PDS 2. 含量方法验证可接受标准 检测限主峰与噪音峰信号的强度比S/N3 定量限主峰与噪音峰信号的强度比S/N10，6份定量限浓度溶
15、 液测得主峰保留时间的RSD 2.0% 耐用性考察MP5%; pH0.2; 柱温5; V20%时色谱行为变 化，各测2次；主峰的拖尾因子2.0；主峰与杂质峰达到基线分离 ；各条件下测得结果（n=6）的RSD 2.0% 系统适用性配制6份同浓度供试品溶液；主峰峰面积RSD 2.0%，保留时间RSD 1.0%, 拖尾因子2.0，理论塔板数符合质量 标准规定，主峰与杂质峰达到基线分离。 26 Venturepharm PDS 质控分析方法验证 1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证 3. 有关物质方法验证可接受标准 4. 溶出方法验证 27 Venturepharm PDS 3. 有关物质方法验证可接受标准 准确度根据有关物质定量限和该杂限度，配制三个浓度的溶液各 三份。各浓度下的平均回收率在80%-120%之间（杂质浓度为定量限 时放宽至70%-130%），RSD 10% 线性在定量限至一定浓度范围（考虑实测该杂的值）内配制6份 样品；测得回归线的相关系数R0.990，Y轴截距在100
