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1、山东大学 硕士学位论文 血液光量子疗法对急性白血病患者输注血小板效果的影响 姓名：孙建华 申请学位级别：硕士 专业：血液病学 指导教师：许洪志 20040505 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名：塑：盥日期：丝堡生! ! ! ， 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或
2、机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：型鼙导师签名： 缘凼 期：迎丝： 山东大学硕士学位论文 血液光量子疗法对急性白血病患者输注血小板效果的影响 专业：血液病学 研究生：孙建华 导师：许洪志副教授 摘要 目的探讨血液光量子疗法( 也称紫外线照射充氧血输入疗法，U B I O ) 对急 性白血病患者输注血小板效果的影响：是否可以减少血小板相关抗体的产生，降 低同种免疫反应，使血小板数量提升增多，降
3、低输注无效率，改善临床输注效果， 同时减少输血反应的发生。 方法将5 4 例有输血史且血小板减少的急性白血病患者按随机化原则分为 照射组( 采用血液光量子疗法行血小板输注) 和对照组( 单纯行血小板输注) 。 两组的年龄、性别、妊娠史、输血史、白血病类型及影响输血效果的其他因素如 脾大、感染、弥漫性血管内凝血( D I C ) 、出血和应用环丙沙星、万古霉素、消 炎痛、头孢菌素、肝索、激素、化疗药物、丙种球蛋白、集落刺激因子等药物1 经统计学检验均无显著性差异。采用酶联免疫吸附竞争法( E L I S A ) ，在血小板输 注前后分别定量测定血小板表面相关抗体( P A I g G 和P A
4、I g M ) ；并计数血小板， 计算1 小时和2 4 小时血小板增值( c C I ) ：观察其临床输注效果和是否存在非溶血 性输血反应( N H F T R ) 。 结果 1 照射组和对照组输注血小板前P A I g G 和P A I g M 无显著性差异( P A I g G ： 照射组1 0 5 0 0 _ + 7 7 2 4 ，对照组9 9 5 2 - t - 4 5 9 4 ，P O 0 5 ：P A I g M ：照射组3 6 2 l 3 0 0 9 ，对照组3 2 4 3 2 2 0 2 ，P O 0 5 ) ，而输注后两组P A I g G 比较有显著性 差异( 照射组1 0
5、 8 2 5 + 7 6 7 5 ，对照组1 7 3 3 3 4 7 7 2 ，P 0 0 5 ) 。 2 对照组和照射组的C C I l h 无显著性差异( 照射组6 9 6 9 3 5 3 ，对照组 4 9 5 7 2 0 4 1 ，P O 0 5 ) ，而两组的C C l 2 4 h 有显著性差异( 照射组4 2 ，8 7 2 7 8 4 ， 刘照组1 7 o o 1 3 4 9 ，P o 0 5 ) ，输血总次数( 红细胞、血小板、血浆等) 也无显著性差异( 照 射组1 0 5 0 9 ，4 0 ，对照组8 9 7 7 1 4 ，P O 0 5 ) ，但两组输注有效率有显著 性差异(
6、经校正的X2 检验，x2 值为4 8 0 ，P O 0 5 ) B u ta f t e rt r a n s f u s i o n ，P A I g Gb e t w e e nt h et w og r o u p s ，s h o w s s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( i r r a d i a t i o n g r o u p 1 0 8 2 5 7 6 7 5 ，c o n t r o l g r o u p 1 7 3 3 3 4 7 7 2 ，P 0 0 5 ) 2 T h e r ei sn os i g n i f
7、 i c a n td i f f e r e n c ea c c o r d i n gt oC C I1h o u rb e t w e e nt h et w o g r o u p s ( i r r a d i a t i o ng r o u p6 9 6 9 3 5 3 ，c o n t r o lg r o u p4 9 5 7 _ _ _ 2 0 4 1 ，P O 0 5 ) B u t C C I2 4h o u ro ft h et w og r o u p sh a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( i r r a
8、 d i a t i o ng r o u p4 2 8 7 + 2 7 8 4 ，c o n t r o lg r o u p1 7 O O 1 3 4 9 ，P O 0 5 ) a n d b l o o d ( r e d b l o o d c e l l s , p l a t e l e t so rp l a s m a ) ( i r r a d i a t i o ng r o u p1 0 5 0 9 4 0 ，c o n t r o lg r o u p8 9 7 7 1 4 ，P O 0 5 ) B u ta s t o t r a n s f u s i o n e
9、f f i c i e n c y t h ee f f i c i e n c y o f i r r a d i a t i o n g r o u p i s h i g h e r t h a nt h a to f c o n t r o lg r o u p ( b yc o r r e c t e d x 2 t e s t x2 = 4 8 0 ，P 6 0 0 1 0 9 L 时，持续振荡对于 保持血小板的活力和功能是必要的。本实验应用的机器单采血小板悬液血小板密 度高，持续振荡有利于紫外线更均匀的照射和防止局部有害代谢产物的堆积，充 氧可保证血小板的气体交换，两者均有利于保
10、持合适的p H 值，以维持血小板的 活力和功能。 混在血小板浓缩液中的白细胞，特别是具有H L A I I 类抗原的白细胞，是导 致受血者致敏的关键，如果采用物理方法清除表达H L A I I 类抗原的白细胞或对 其进行灭活，可抑制H L A 同种免疫。采用清除血小板中自细胞的方法，如离心 与白细胞滤器过滤，当每次输入的白细胞数少于1 0 6 次时，可以大大降低同种免 疫反应的发生率。尽管目前第三代白细胞滤器可以使血小板中自细胞降至1 0 6 ，L J ， 但仍有1 5 2 0 H L A 同种免疫反应的发生率，可能与A P C 的存在有关旺5 ) 。 2 l 山东大学硕士学位论文 K a h
11、 n 等瞳”1 9 8 5 年提出使用U V B 照射灭活浓缩血小板中的白细胞可以作为白细 胞过滤的替代方法。早在1 9 7 1 年L i n d a h lK i e s s l i n g 等“”就已发现经u V 照射的 白细胞存混合淋巴细胞反应( M L C ) 中不能分化增殖，也不能刺激其它同种异 体反应细胞。1 9 9 0 年C a p o n 等。”应用T e f l o n 塑料袋存储血小板并经紫外线照 射，体外实验证实经紫外线照射，淋巴细胞在M L C 中作为反应细胞和刺激细胞 的功能均消失，且血小板聚集功能不受影响。P a m p h i l o n 等圆应用3 J c m
12、2 U V B 照射单采血小板，结果发现能消除其中混杂的淋巴细胞在M L R 中作为刺激细胞 的能力同时也失去对植物血凝素( P H A ) 的反应能力。而A n d r e u 等0 0 1 研究 发现仅以o 7 5 J c m 2 照射浓缩血小板即可消除其中自细胞在M L C 中的刺激能力及 对P H A 的反应能力。由于在受体T 细胞与供体A P C 之间相互作用时包含有许多 的细胞表面分子，如H L A I I 、T C R 、淋巴细胞功能相关抗原1 ( L F A 1 ) 、C D 2 、 淋巴细胞功能相关抗原- 3 ( L F A 3 ) 、C D 4 、C D 8 等，经紫外线照
13、射后这些分子 的结构与功能会发生改变，以O 1 J e m 2 U V B 照射后，H L A D R 表达降低，并1 二 1 8 h 后消失，此外白细胞表面H L A D R ，D P ，D Q 的表达与U V B 照射剂量及放 置时问有关。F i e b i g 等8 ”应用流式细胞仪定量检测经U V B 照射浓缩血小板，研 究C D l 4 + 细胞表面粘附分子的表达，结果发现U V B 照射能抑制细胞问粘附分子 1 ( I C A M 1 ) 和H L A D R 表达的升高，而这些分子是与抗原递呈有关的重要分 了。在许多临床实验中证实U V B 照射能有效的预防H L A 同种免疫，
14、如应用紫 外线照射的血小板悬液输注给急性白血病患者，结果发现1 3 产生淋巴细胞毒 抗体，并且出现J f 小扳输注无效，而U V B 照射组只有5 0 产生抗体。舢。 理想的紫外线照射应对白细胞进行有效的灭活，而对血小板的功能无影响。 林一J 二忠等。”的实验表明，各种血液成分的吸收光谱如下：血浆吸收峰在2 2 0 n m 、 3 0 0 n m 、4 2 5 n m 处：淋巴细胞的吸收峰在2 1 5 n m 处：血小板的吸收峰在2 4 0 r m l 、 2 9 0 n m 处，各组份吸收率在紫外部分2 0 0 n m 3 0 0 n m 处最高，在红外部分最低， 并逐渐下降。U V B 照
15、射预防H L A 同种免疫的研究有不少报道，但以往的研究所 用照射剂量各不相同，结果也不一致。K a l m 等0 4 报道以3 1 0 n m 紫外线照射3 0 分钟，剂量为1 7 8 2 J c m 2 。可以抑制淋巴细胞活性，且不影响血小板体内功能。 P a m p h i l o n 等。卯报道以O 3 J c m 2 U V B 照射，即能有效地抑制混合淋巴细胞反应， 但随保存时问的延长会影响血小板功能，若以6 J c m 2 进行照射，则对血小板聚集功 山东大学硕士学位论文 能有明显影响。J o h n s o n 等曾用0 6 J c m 2 、2 4 J e r a 2 及1
16、0 J c m 2 的U V B 对浓缩 血小板进行照射，保存9 6 h 后，乳酸脱氢酶( L D H ) 、1 3 一血小板球蛋白( B T G ) 含量与A T P 代谢均与对照组无明显差异，但如以1 0 J c m 2 的U V B 照射会对血小板 体外功能有明显影响，而以4 J c m 2 , 8 J c m 2 U V B 照射浓缩血小板时，会使8 4 , 板在保 存过程中P 选择素( P S e l e c t i n ) 表达增加，且与照射剂量相关。研究表明以1 0 J c m 2 以下U V B 照射血小板，并保存2 4 4 8 h 时，不会对血小板的代谢及功能造成明 显的影响。而A n d r e u 等认为以3 J c m 2 以下剂量照射不会造成对血小板功能的损 害门，B o c c a c c i
