《血红素加氧酶1对大鼠肝纤维化及肝星状细胞增殖、活化与凋亡的调控作用研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血红素加氧酶1对大鼠肝纤维化及肝星状细胞增殖、活化与凋亡的调控作用研究（133页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：密级：单位代码：10114学号：Dr2009028血红素加氧酶1对大鼠肝纤维化及肝星状细胞增殖、活化与凋亡的调控作用研究研究生：杨慧指导教师：赵蕉丛教援合作指导教师：申请学位门类级别：医堂盟专业名称：凼科堂!佳鎏痘堂2研究方向：压痘的基础生!晦废所在学院：出酉医型太堂箍二!鱼廛医堂院2012年3月23日I丫IIIIllzilllllllllll2lllllll7lllll7U14学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其
2、他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：i、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉；4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：褊牡日期：竺!兰年鱼月么一日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入
3、有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：指导教师签名：(本声明日期：塑竺年月上日日期：堡!蛑五月L日学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)山西医科大学博士学位论文目录中文摘要I英文摘要英文缩写正文1前言1第一部分血红素加氧酶1对大鼠肝纤维化及相关信号分子表达的影响一3实验一血红素加氧酶1的表达对大鼠肝纤维化进程的影响3材料与方法一3结果19讨论32参考文献36实验二血红素加氧酶1对肝纤维化大鼠肝脏PPA脚及
4、NF-vzB表达的影响40材料与方法40结果43讨论48参考文献5l第二部分血红素加氧酶1对大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡的影响OoIQO53实验三大鼠肝星状细胞HSCT6的培养及最佳药物浓度与作用时间的筛选53材料与方法53结果58讨论64参考文献65实验四血红素加氧酶1的表达对大鼠肝星状细胞增殖与活化的影响66材料与方法66结果71讨论79参考文献80实验五血红素加氧酶1的表达对大鼠肝星状细胞凋亡的影响82材料与方法82山西医科大学博士学位论文结果85讨仑89参考文献QO91第三部分血红素加氧酶1对大鼠肝星状细胞调控作用的信号分子机制93实验六血红素加氧酶一1对大鼠肝星状细胞PPARY及N
5、FKB表达的影响93材料与方法QOOQ93结果97讨论104参考文献105实验七血红素加氧酶1的表达对大鼠肝星状细胞分泌细胞因子的影响107材料与方法一QODOOIQ107结果108讨论110参考文献111全文小结113综述114正文114参考文献120作者简介124致谢1254山西医科大学博士学位论文血红素加氧酶。1对大鼠肝纤维化及肝星状细胞增殖、活化与凋亡的调控作用研究摘要肝纤维化是各种慢性肝病的共同病理学基础，是形成肝硬化的必经病理阶段，也是临床治疗慢性肝病的关键环节。其组织学特征表现为以胶原为主的细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)成分合成增多、降解相对不足而在
6、肝内过量沉积。肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)是产生ECM的主要来源，HSC的增殖活化是肝纤维化发生的中心事件。通过抑制HSC增殖、诱导HSC凋亡来阻断甚至逆转肝纤维化的发展，是抗肝纤维化治疗的重要策略。血红素加氧酶1(HemeOxygenase1，HO1)是人类和哺乳动物组织中广泛存在的一种加氧酶，是催化血红素的起始酶和限速酶。HO1及其催化产物一氧化碳(CarbonMonoxide，CO)、胆红素及转铁蛋白在体内有显著的抗炎、抗氧化、调控细胞凋亡等重要作用。有研究显示，HO1在肝移植、急性肝损伤和缺血再灌注损伤等多种肝脏损害中，对肝细胞均具有保护作用。在慢性肝病
7、进展过程中诱导HO1表达，可以减少I型胶原的分泌，有效阻止肝纤维化的进展。过氧化物酶体增生因子激活受体(peroxisomeproliferator-activatedreceptorPPAR)是一种配体激活的转录因子，其亚型PPARv主要分布于HSC。在肝纤维化进展过程中，卜调PPARY表达可以抑制HSC激活、诱导HSC凋亡，进而减轻肝纤维化的程度。核转录因子一KB(nuclearfactorkappa1ightchainenhancerofactivatedBcells，NFKB)是具有转录激活功能的蛋白质，活化的NFrd3可促进HSCs增殖及胶原的产生、诱导TNFa、IL6及TGFB等相
8、关细胞因子与纤维化因子的释放、并减少HSCs凋亡，在促进在肝纤维化进程中同样发挥重要作用。研究发现，PPAR7可以直接与NFKB的亚基p50p65结合，或通过竞争结合协同活化因子p300和CBP来抑制NF1(BDNA合成、转录与表达，诱导HSC的凋亡。对肝纤维化发生、发展起重要的负调控作用。已有其他领域的研究显示，HO1同PPA脚之间存在相互调控，HO1启动子区的基因多态性影响PPAI的转录活性；HO1的启动子区域还有NFKB结合位点，诱导HO一1表达可以抑制NFkB、TNFa及IL6等相关细胞因子的分泌。有关HO1对肝脏保护机制的研究目前主要集中于HO1的分解产物如胆绿素、一氧化碳(CO)和
9、自由铁的抗氧化及抗炎作用等方而，而HO-1对肝纤维化相关信号分子调控方面的研究尚未见报道。为此，本课题从在体动物实验和体外细胞实验两方面入手，观察HO一1的表达对大鼠肝纤维化及HSCT6增殖、活化与凋亡的影响，同时研究HO一1表达对HSCT6中PPARV、NFkB及其下游炎性信号分子与凋亡相关因子表达的影响，以进一步探讨HO1调控HSCT6增殖、活化及凋亡，进而阻止肝纤维化进展的信号分子机制。山西医科大学博士学位论文本课题包括以下三部分：第一部分血红素加氧酶一1对大鼠肝纤维化及相关信号分子表达的影响第二部分血红素加氧酶1对大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡的影响第三部分血红素加氧酶1对大鼠肝星状细
10、胞调控作用的信号分子机制第一部分血红素加氧酶一1对大鼠肝纤维化及相关信号分子表达的影响目的：研究在构建实验性肝纤维化大鼠模型的过程中抑制诱导HO1的表达对大鼠肝纤维化进程及相关信号分子表达的影响。方法：采用复合因素构建肝纤维化大鼠模型。实验分组：正常对照组，4周模型组，6周模型组，ZnPPIX干预组，Hemin干预组。在造模第46周分别给予HO-l的诱导剂Hemin及抑制剂ZnppIX隔日腹腔注射进行干预。HE、Masson染色观察肝脏病理组织学变化；免疫组织化学染色观察肝组织中HO1及aSMA的分布与表达；全自动生化分析仪检测血清各项生化指标；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中透明质酸
11、(HA)及III型前胶原(PIIIP)水平；分光光度法检测组织中羟脯氨酸(Hyp)含量；采用Real-timePCR技术检测肝组织中0LSMA、HO1、PPAR7及NFrB的mRNA表达；采用Westernblot技术检测肝组织中HO1、PPA脚及NFKBp65的蛋白表达。结果：1、HE及Masson染色结果表明肝纤维化模型构建成功。Hemin干预组胶原纤维的增生、肝小叶的破坏及假小叶的形成程度明显低于同期模型组及ZnppIX干预组(P；傅一心芷山西医科大学博士学位论文3O252O151O5OONormal4weeks6weeksZnpp-lXHemin图23各实验组大鼠肝组织NFKB的mRNA表达Fig2-3ThemRNAexpressionofNFKBinliversofratsbyRealtimePCR12各实验组大鼠肝组织中NF1出p65的蛋白表达Westernbolt对各实验组大鼠肝组织内NFKBp65蛋白表达的检测结果同mRNA的变化相一致。结果显示：随着肝纤维化造模时间的延长，NFKBp65蛋白在肝组织中的表达逐渐增加(F=
