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1、2004IN97W-6U笋硬t4IM-1居戈摘实验主要研究了蛇莲方(SLF)要的免疫抗癌作用。肿瘤方法，观察SLF25癌Heps和H，的抗肿瘤作用。10gkg对小鼠肉瘤S，、首先采用动物移植性EAC腹水瘤、小鼠肝结果显示，SLF能显著抑制SHHeps和H等实体瘤的生长，抑瘤率分别达到34.042.2%32.2.34.9%和35.4-38.5%延长EAC腹水瘤、肝癌Heps小鼠的生存时间，生命延长率分别为14.3-20.0%24.030.2%SLF抗癌作用不及化疗药CTX和5-Fu，但它在抑瘤的同时并未出现与化疗药类似的白细胞数下降、脾和胸腺萎缩等副作用。为此考察了SLF的抗癌增效作用，结果显示
2、，SLF与化疗药(CTXor5-Fu)联合用药后，抑瘤作用(对S.和Heps)增强，白细胞数和脾、胸腺指数得到明显改善。这表明，SLF有一定的抗癌增效作用。接下的实验主要研究了SLF抗癌的初步机制，首先考察了SLF的细胞毒作用，选择二种不同来源的瘤株(Sw。和HL60)，用拒染法观察含药(SLF)血清体外对细胞增殖的作用，结果表明，含药(SLF)血清仅在510gkg剂量下有微弱的抑制作用，与空白血清对照组相比无显著性差异，说明SLF的抗癌作用并非通过细胞毒作用，可能与调节机体免疫等有关。为此，研究了SLF的免疫和抗炎作用。实验表明，SLF能增强幼稚小鼠的胸腺、脾脏指数:增强小鼠炭粒廓清功能，提
3、高巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力促进荷瘤小鼠或正常小鼠溶血素抗体的生成增强二氯硝基苯(DNC13)诱导正常小鼠和CTX所致免疫低下小鼠的小鼠迟发性超敏反应(DTH)反应能力显著抑制巴豆油致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致小鼠足肿胀抑制醋酸所致的小鼠毛细血管通透性的升高。综上所述，SLF具有一定的抗癌和抗癌增效作用，其作用并非通过细胞毒作用，而与增强机体免疫等多方面有关。一1一2004hfilfff(=r1酬夕2f-AbstractTosurveytheantineoplasticandimmunomodulatingactivitiesofSHELMNFANG(SL月.Fourkindsofmurinet
4、umormodelsinvivosarcoma180(SSgo)ehrlichascitescarcinoma(EAC)hepatocellularcarcinoma(Reps)andhepotoma22(H22)wereemployedtoinvestigatetheanti-tumoreffectsofSLF.AstheresultswefoundthatSLFhadobviouslyinhibitoryeffectsonthegrowthofSigoHepsandH22withtheinhibitoryratesof34.0-42.201o.32.2-34.9%and35.438.5%r
5、espectively.SLFcouldsignificantlyreducetheproductionofasciticliquidsandprolongthelifeofmicebearingEACandHepA.Itcouldnotsignificantlyincreasethymusandspleenweightsandwhitebloodcellsofmicebearingtumor.Resultsalsorevealedthattheanti-tumoreffectsofSLFaswellascombinedwithCTXor5-Fuwerenotsosignificantlyco
6、mparedwiththeCTXor5-Fugroups.SLFcouldresistthedecreaseofwhitebloodcellsandthymusandspleensweightsofthemicebearingSgoorHepsinducedbyCTXor5-Fueffectively.InordertodemostratemechanismsofantineoplasticofSLFSLFwascultruedwithSgoandhumanpromyelocyticleukemiaHL60CellinvitroandexperimentdemonstratedthatSLFh
7、adnodirectkillingeffectsontumorcells.ThefollowedstudyshownthatSLFcouldincreasetheindexofspleenandthymusofyoungmiceandrestorephagocyticfunctionofthemacrophageandtheationofserumhemolysinantibody.SLFalsocouldsignificantlyinhibitethecrotonoil-inducedearedemacarrageenin-inducedfootpadswellingandholdbacki
8、ncreasingofvascularpermeabilityinducedbyaceticacidinmice.SLFwasshowntohaveadefiniteantineoplasticeffect.Itcouldpromotetheimmunefunctionofmicebearingtumorandmitigatethetoxicandside一2一2004bPh!7VA4iVfIfl1iiE-effectsofchemotheuticagents.一3一2004窟j户国药拜才笋动公OMI彭，它月吐舀癌症是人类最主要的死亡原因之一，治疗难度极大。近几十年来癌症发病率一直呈上升趋势，
9、据WHO报告，1990年全球癌症新发病例数约807万，比1975年的517万增加了37.4%，1997年全球癌症死亡人数约620万，按目前趋势预测，至2020年随着世界人口达80亿，将有2000万新发癌症病例，其中死亡人数将达1200万，且其中大部分将发生在发展中国家。我国肿瘤引起的死亡率在所有病因中占17.9%，居第2位，且发病率呈上升趋势，在我国癌症发病率最高是胃癌，其次是肺癌、肠癌、肝癌、乳腺癌等。长期以来，国际社会花费巨资用于寻找治疗癌症的新药和方法。治疗肿瘤的方法可分为:外科治疗，放射治疗，化学治疗，生物治疗，内分泌治疗，中医药治疗及综合治疗。近年来，治疗肿瘤的新技术新方法不断涌现，
10、如肿瘤冷冻治疗、高热治疗、立体定向放射外科、肿瘤诱导电化学疗法、单克隆抗体及其交联物治疗等，使部分癌症的治愈率有所提高。另外大量的临床证明，西医西药治疗肿瘤虽然效果较好，但副作用较大外科手术适用于某些局部性肿瘤早期和中期的治疗，但多数病人靠手术治疗是不能防止肿瘤的复发和远处转移的:放、化疗虽然有相当高的治愈率，但常引起如骨髓抑制、免疫低下等毒副反应，使患者难以坚持治疗，化疗药物在治疗过程中出现的耐药性，己成为目前临床治疗中的难题之一。如能寻找到克服方法，无疑会进一步提高许多肿瘤的治愈率。而各种治疗方法所带来的患者生存质量的下降问题，使如何保留机体以及各受累器官的功能从而提高病人的生活质量成为当
11、前受到广泛重视的课题。基于上述种种原因，国内外许多研究人员逐步把研究重心转向中草药，并相继发现了一大批具有抗癌作用的潜在新药(或其复方制剂)。另外，在我国运用中草药治疗肿瘤十分普遍。大量的临床报道显示，中草药可明显改善肿瘤患者的临床症状，提高生存质量，延长生存期，在一定程度上稳定或缩一a-2004刀中阔男声笋人李硬关创9之兰论戈小肿瘤的效果法等相结合，。此外，有计划的把中草药和手术治疗、放疗、化疗、免疫疗既可以增加疗效，又可减轻毒副作用。一5一2004居功脚药又笋砰1-Ylyt-&t第一章蛇莲方抗肿瘤的药效研究蛇莲方是在临床抗癌验方的基础上，结合现代抗肿瘤药物筛选手段，进行精简、重组而得到，该
12、处方主要由白花蛇舌草、半枝莲、半边莲、月参、V仁等中药组成，具有清热解毒，活血利尿等作用。本章主要研究蛇莲方的体内体外的抗肿瘤及抗癌增效作用。第一节蛇莲方抗移植性肿瘤的作用动物移植性肿瘤试验是抗癌药物筛选中最常用的模型，目前所应用的大多数抗癌化疗药物，都经动物移植性肿瘤试验而被发现，其优点是接种一定量瘤细胞或无细胞滤液(病毒性肿瘤)后，可以使一群动物带有同样的肿瘤，且生长速率较一致，个体差异较小，接种存活率近100%。对宿主的影响也类似，试验周期短，易于客观判断疗效。本节主要采用上述实验方法，考察了蛇莲方对荷瘤小鼠肉瘤180实体型(S180)、艾氏腹水瘤(EAC)、肝癌腹水型22M22)和肝癌
13、(Heps)等四个瘤株生长的影响。1材料1.1药物蛇莲方(简称SLF)，中药材按处方量，水提浓缩，制成浸膏，计算产率，并用蒸馏水配制成所需浓度:注射用环磷酞胺(CyclophosphamideCTX)，上海华联制药有限公司，批号011104氟尿嗜健注射液(Fluorouracih5-Fu)，南通制药总厂，批号:0212100.9%氯化钠注射液，金陵药业浙江天峰制药厂，批号:011202白细胞稀释液:冰醋酸2ml、蒸馏水98m1、10gil亚甲蓝溶液3滴，应用前新鲜配制。1.2动物和瘤株昆明种小鼠，体重2012g侮批实验采用I-1一性别，III中国药科大学实验动物中心提供小鼠肉瘤180实体型(S
14、arcoma180S18o)、小鼠.艾氏腹水瘤(EhrlichascitescarcinomaEAC)、小鼠肝癌腹水型20049功fibiwl犬4A1-4113tigt22(Hepotoma22H22)和小鼠肝癌(HepatocellularcarcinomaHeps)，山上海医药工业研究院提供，按常规传代培养。1.3仪器PB303-N型电子天平，Mettler-toledo公司DT200型电子秤，常熟市衡器厂XB-K-25型血球计数板，楚门医用仪器厂手术器械一套:80-1型电动离心机，余坛恒丰仪器厂:721型分光光度计，上海第三分析仪器厂:SW-CJ-1B型标准型净化工作台，苏州净化设备厂X
15、SP-18A型生物显微镜，江南光电(集团)股份有限公司。2方法和结果2.1SLF对荷瘤小鼠S生长的影响m取雌性小鼠50只，随机分为5组:空白对照组予NS、阳性对照组予CTX25mgkgSLF各剂量组分别予SLF2510gkg。无菌条件下抽取生长至第7d的荷瘤S，小鼠腹腔瘤液，用无菌生理盐水按1:4稀释后，于小鼠右腋下接种0.2m1只。接种24h后，灌胃受试药物或生理盐水，连续10d。末次给药后24h，小鼠称重，脱颈椎处死，剥离肉瘤，电子天平称重，计算瘤重抑制率。瘤重抑制率(%)二(给药组平均瘤重一对照组平均瘤重)对照组平均瘤重X100TablEffectsofSLFongrowthofSuw(
16、Tsn=10)-一一一种一一一一一一一一.一一一一一一一GroupsDosegkg，dTumorweights一toryrate%NS一二一一一一2.588t0.446一一一一CTX0.025x100.936士0.308一8SLF2x101.707土0.29134.05x101.623t0.265.一310 x101.497士0.24542.2一一一一一一一一一一一一一-一-一一，一ComparedwithgroupNS:p0.05)e3讨论排斥染料法可以反应药物对细胞增殖的影响。但由于中药粗提物本身的渗透压、pH值、疑质、无机盐离子等非特异性理化因素会严重干扰实验的结果，科学性差，难以反映药效的真实性，因而在实验中采用了含药血清替代粗提物加至细胞中。中药血清药理学是日本学者在1984年提出的，它同中药粗制剂直接进行的体外实验不同，既具有体外实验条件可控性强、药物效应易于检测、可深入揭示药物的作用机理，又能够防止中药粗制剂本身对实验的干扰，而且这种血清所含有的药物成分是经过体内一系列生物转化后发挥作用的有效成分，包括在药物作用下机体
