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1、实验二 革兰氏染色法和芽孢染色法 革兰氏染色法 n实验目的 学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 n实验原理 革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年创 立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。 第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫 色；第二步：媒染:碘和结晶紫形成大 分子复合物，能被细胞壁阻留在细胞内 ；第三步：酒精脱色:细胞壁成分和构 造不同，出现不同的反应G+菌：细 胞不能被酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌 ：酒精将细胞脱色，细胞无色；第四步 :番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝 色
2、。 革兰氏染色原理 n实验器材 1）菌种： 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 2）染色剂：结晶紫，番红 3）器材：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、 双层瓶、擦镜纸等 革兰氏染色法 n实验步骤 混合涂片法涂片、干燥、固定 结晶紫初染1min， 水洗 碘液媒染1min，水洗 用滤纸吸去残水后 ，将玻片倾斜，在白色背景下，用95%乙醇脱色，直 至流出的乙醇无色时，立即水洗 番红复染2min， 水洗 干燥后，镜检 注：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不 足，阴性菌被染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被染成 阴性菌 革兰氏染色法 实验结果 阳性菌（蓝紫色） 阴性菌（红色） 细菌芽孢染色法 n实验目的 学习并掌握
3、芽孢染色方法；初步了解芽孢杆 菌的形态特征。 n实验原理 芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。 芽孢染色法原理 用弱碱性染料孔雀绿在加热条件下染色，使染料 不仅进入菌体，也可进入芽孢内。进入菌体的染 料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色后难以被水 洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保 留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色， 使芽孢和菌体易于区分。 n实验器材 1）菌种：枯草芽孢杆菌 2）染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番 红水溶液 3）器材：显微镜、滴管、酒精灯、载 玻片、接种环等 细菌芽孢染色法 n实验步骤 1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复 染2-3min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水 洗 番红染液复染2min 水洗 镜检 细菌芽孢染色法 实验结果 芽孢（绿色） 营养细胞（红色）
