《胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液差异蛋白组学研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液差异蛋白组学研究（124页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液差异蛋白组学研究 论文作者签名： 指导教师签名： 论文评阅人1 丞囱随名 评阅人2 ： 丞自隐名 评阅人3 ：拯囱隐名 评阅人4 ： 丞囱隐名 评阅人5 ： 丞囱隐名 答辩委员会主席：昌塞3 数授浙江省生医院 委员l ：戴室3 教授3 浙江太堂医堂院附属邳逸去医院 一 委员2 ：委蜂3 教援3 浙江太堂医堂院隘属箍二医院 一一 委员3 ：昙直适3 教授3 浙江太堂医堂院随属箍二医院 委员4 ：挂勤3 主任医娅! 浙江太堂医堂院附属簋三医院 委员5 ：王噩花3 主任医! 匝3 逝江太堂医堂院附属箍三医院 娈员6 ： 医至贤3 主任医痖! 逝江省童回德医院 答辩日期：2 0
2、 1 2 年6 月 T h e s i sr e V i e w e rl ：AnonYmi鲤 n e s i sr e V i e w e r2 “ A n o n v m i t y ln e s l sr e V l e w e r3 ： A n o n Y m i 鲤 T h e s i sr e V i e w e r4 ：Anonvmity ln e s l sr e V l e w e r ，： A n o n v m i t v C h a i r ： B i nL v ( C o m m i t t o fo r a ld e f e n c e ) C o m m i t
3、t e e m a nl ：盥i 堡gQ 堑 C o m m i t t e e m a n 2 ：星旦g 且 C o m m i t t e e m a n3 ：Y u l i a nW h C o m m l t t e e m a n4 ：Q i nD u C o m m i t t e e m a n 5 ：垦i h 坠垦I 堑垦堕g C o m m i t t e e m a n 6 ： J u n x i a nC h e n D a t eo f o r a ld e f e n c e ：J u n2 0 1 2 作了明确的说明并表示谢意。 的研 发表 或证 文中 学位论文作者
4、签未场忧签字吼哆侈年厶日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝鎏盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权澎至三盘堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者躲砀收 签字日期：矽形年杉月 日 导师签名： 签字日期：日 浙江大学博士学位论文致谢 致谢 值此博士学位论文完成之际，我首先要感谢我的导师蔡建庭教授。导师实事 求是的学风以及严谨的治学态度无不给我留下深刻的印象，并将对我以后的工作 及科研产生深远而
5、积极的影响 本文从选题、设计实施到论文写作都是在导师蔡建庭教授的悉心指导、严格 要求及大力支持下完成的蔡教授谦虚和蔼，诚恳待人的优秀品德是我为人处世 的榜样。在此再次向导师蔡建庭教授致以衷心的感谢和崇高的敬意! 同时还有感谢消化内科的同事，特别是杜勤主任，正是由于他( 她) 们的帮 助、理解和支持，帮我解决了生活上的困难，消除了我的后顾之忧，让我能顺利 的完成博士期间的实验和论文书写我为能在如此和谐的团队工作、学习倍感荣 幸 感谢浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所的余捷凯博士在实验操作上的 关心和指导，感谢消化内科贾立涛博士、吴佳博士、傅燕实验员在实验中对我的 帮助，感谢消化内科陈清字博士在
6、实验的内镜操作中给我的帮助 尤其要感谢我的父母及妻子你们对我的照顾及鼓励是我在科研及工作中勇 往直前的最大动力。另外我还要感谢我可爱的女儿，她活泼可爱，每每看到她的 笑脸我都会觉得充满了喜悦和动力。 本课题研究受到了浙江省卫生厅课题( 编号：2 0 1 0 K Y A l 0 3 ) 的资助，在此 表示感谢。 最后感谢所有关心、支持和鼓励过我的老师、同学及朋友! 浙江大学博士学位论文中文摘要 胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液差异蛋白组学研究 浙江大学医学院 博士研究生 导师 内科学( 消化病学) 陈佳敏 蔡建庭教授 中文摘要 胰腺癌是一种恶性度高，手术切除率低，进展迅速，预后差的消化系统恶性 肿瘤，5
7、 年生存率不足5 ，通常诊断明确时已发生转移据2 0 0 2 年W H o 统计， 世界上每年有胰腺癌新发病例约2 0 万人，占全部恶性肿瘤新发病的2 1 ，每年 死亡人数约1 9 6 万人，占全部恶性肿瘤死亡率的3 4 ，占恶性肿瘤死亡率的第 8 位。在我国目前胰腺癌的发病率也呈逐年增高趋势。由于胰腺癌对放、化疗不 敏感，早期诊断并行肿瘤根治手术是是提高患者生存率的唯一有效的方法。但目 前胰腺癌早期诊断水平差，目前胰腺癌的常用的临床诊断标志物是C A l 9 9 ，但是 在一些良性胆道、胰腺疾病中C A l 9 9 也会升高，例如急、慢性胰腺炎，肝炎和胆 道梗阻等，其对胰腺癌诊断的敏感性和特
8、异性分别为9 3 1 和7 8 3 ，不能令 人满意而影像学检查发现异常时通常已到了疾病中晚期，失去了早期手术的时 机因此探寻更敏感的早期胰腺癌的特异性标志物是临床研究的一个迫切需求 另外胰腺癌与慢性胰腺炎的临床关系尚不明确，胰腺炎的支架治疗对临床症状的 改善有较多研究，但支架治疗在蛋白质水平上对胰腺病理组织学的改善指标目前 未见相关研究 蛋白质是生命活动的具体执行者和体现者，因此深入研究胰腺癌的发病机制， 寻找特异、灵敏的标志物用于早期诊断，客观上要求在蛋白质组的水平进行进一 步探索近年来开展的表面加强激光解吸电离飞行时间质谱( S 毗f - a c eE n h a I l c e d n
9、 浙江大学博士学位论文 中文摘要 L a s e rD e s o 巾t i o 棚o n i 冽o nT i m e - o f F l i g h tM a s sS p e c 仃0 m e 町，S E L D I - T F - M S ) 技 术为这一探索提供了优良的技术平台。S E L D I T O F M S 技术由蛋白质芯片系统和 质谱仪组成，尤其适用于低丰度蛋白质或多肽的检测。这一方法最大的优势在于 高通量，高灵敏度的实现了质谱技术对临床样本的直接检测。s E L D I T o F M s 技 术问世后被认为是最有前景的肿瘤早期检测技术。另外该技术在其他疾病，如心 脏病、
10、肾移植、艾滋病、阿尔茨海默病等也陆续有相关应用研究的报道。 本课题旨在应用s E L D I 蛋白质指纹图谱和生物信息学技术从胰液中筛选胰 腺癌蛋白质肿瘤标志物并构建检测模型( p a 吮m ) ；建立组织蛋白质指纹图谱的检 测方法从而寻找胰腺癌与慢性胰腺炎胰液间的差异表达蛋白质；并进一步分析慢 性胰腺炎胰管支架治疗前后胰液蛋白组学的差异以期找到适合胰腺癌早期诊断 的候选肿瘤标志物，为探索胰腺癌发病机制提供新思路。 韵 第一部分胰液蛋白质指纹图谱在胰腺癌中的研究 一 日的： 通过S E L D I T O F M S 技术研究胰腺癌与慢性胰腺炎患者的胰液蛋白质组学 差异，寻找可早期诊断胰腺癌的
11、蛋白质标志物。 嚣 方法： 1 E I P 胰管插管抽取胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液，预处理标本 2 将蛋白芯片与胰液样本预处理后结合、冲洗，加能量吸收分子( E 蝴) ， 设置s E L D I 质谱仪参数，质谱检测及数据处理 结果： 1 检测胰腺癌胰液样本6 例，慢性胰腺炎组胰液样本8 例，N o n p a r a m e t r i c 州n c o x s o nTt e s t ) 检验筛查p 值小于O 0 5 的差异蛋白质。 2 共检测到4 0 2 个经过信噪比和强调过滤的高质量质谱蛋白质峰，发现有2 0 个蛋白质峰含量有统计学差异( P ；叮|，碰 鳖3 仑0 E巴石c兰。9 浙江
12、大学博七学位论文 第二部分结果 p e a l 【2 0 0 8 e m f 为M Z2 0 0 7 9 7 2 的质谱表达图： T h p - hm a 删p 裂，一l7 V ，、 7 】F 亏F ，岱一 彳_ = 二匕，= ，r 埘 口2 01 O O 2 0 2 0 2 02 0 4 02 0 2 02 1 M - “c 呻 g e l2 0 0 8 e m f 为M z2 0 0 7 9 7 2 的模拟热图： M a s s ，C h a 四e ( M ，刁 釜 罂 旦 三 竺 焉 罡 3仑口BJa2_39Q竹 浙江大学博士学位论文 第二部分结果 p e a l 【5 1 8 0 e
13、m f 为M z5 1 7 9 9 4 的质谱表达图： g e 5 18 0 e m f 为M Z5 1 7 9 9 4 的模拟热图： M a s s ，C h a 叼e ( M 阁 参 岙 兰 兰 童 星 6 7 l_叠o E墨_泉|d 浙江大学博士学位论文第二部分结果 p e a l 【4 1 4 1 e m f 为M z4 1 4 0 8 8 5 的质谱表达图： g e l 4 1 4 1 e m f 为M z 4 1 4 0 8 8 5 的模拟热图： 参 墨 兰 三 旦 罡 1 s d i 匕o Eeo仑_泉岂 浙江大学博学位迨茎 釜三墅坌笙墨 - _ _ _ - _ _ _ - -
14、_ _ l - - _ - _ 一一一。一一 P e a l 【6 5 1 1 e I n f 为M z6 5 l O 8 7 4 的质谱表达图： g e l 6 5 1 1 e I I l f 为M z6 5 1 0 8 7 4 的模拟热图： M a s s C h a 帕e ( M 周 誊 罂 旦 三 宝 要 星 墨丁oD E匕ao暑oea田 浙江大学博士学位论文 第二部分结果 2 2 生物信息学分析 进入网站h t t p ： e b e X p a s y o 瞅a g i d e 州，通过网站检索与蛋白质峰值相匹配的 蛋白质，选择p Ir 肌g e ：m i l l 值为4 ，I m
15、 x 值为1 4 ，M w 值输入实验发现蛋白质峰 的l I l z 值，M wr 觚g e 输入O 3 ，c h e c k 衙p r o t e 协s e q u e n c e s 一栏选择w i t hc y s t e i n e s i I lr e d u c e df o m ( 一S H ) ，O 唱a I l i s mn a m eo rc l a s s i f i c a t i o no rN c B I T a X I D 一栏中输入 h o m os 叩i e n s ，在T a g g i n g 一项里选择D i s p l a yo n l yt h es e q u e n c e sm a t c h i I l gt h et a g ， 在D a t a b a s e ( s ) o nw h i c ht h es c a ns h o u l db ep e r 旬册e d 里选择U n i P r o t K B S w i s s P r o t 。 将检索查询到的蛋白质链接至U n i P r o t l S w i s s P r o t 数据库即可查询到其相关的 结构、功能等信息。 查询结果发现：5 9 5 1 2 4 9 I I l z 鉴定为辅酶Q ( N A D Hd e h y d r o g e
