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1、荧光细胞化学测定及细胞活力的测定 实验目的 学习荧光显微镜的使用 了解荧光显微技术原理和方法 以及荧光技术在细胞化学方面的应用 荧光显微技术 利用短波光照射物质，激发其发射荧光在荧光显微镜下可以检 视的方法 自发荧光、次生荧光 1. 指有些生物体受到短 波光照射后，直接发 出的荧光 2. 生物材料受到短波光 照射后并不发光，当 它吸附荧光染料后产 生荧光 实验原理 实验用品 材料： 洋葱 新鲜紫鸭趾 草花粉或蚕 豆原生质体 悬液，人口 腔上皮细胞 用品： 荧光显微镜 ，载玻片， 镊子，烧杯 荧光显微镜 ，载玻片， 盖玻片，镊 子，烧杯， 牙签 试剂： (1) O.01 吖 啶橙生理盐水 溶液
2、(2) O.02 异 硫氰酯荧光素 生理盐水溶液 (3) O.Ol 罗 丹明生理盐水 溶液 (4) 荧光增白 剂溶液，将荧 光增白剂溶于 0.4M山梨醇溶 液中，使浓度 达到0.1。 试剂： 1二丙酸酯 荧光素溶液： 取l0mg二丙酸 荧光素于5ml 丙酮中，将此 溶液逐滴加入 5ml PH5-6生 理盐水或 0.65M的甘露 醇溶液中，直 到出现永久性 乳白沉淀为 止。 20.01吖 啶橙的生理盐 水溶液 利用荧光增白剂 观察植物细胞壁 实验方法 5 / 12 实验方法 6 / 12 DNA分布的观察 实验方法 7 / 12 蛋白质分布的观察 实验方法 8 / 12 线粒体观察 二丙酸酯荧
3、光素是非荧 光性的亲酯 性化合物; 进入细胞活力 较强细胞内,细 胞内活酯酶,将 二丙酸酯荧光 素的荧光素分 解 在荧光显微 镜下发出黄 绿荧光 9 / 12 实验方法 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞 活力的测定 实验方法 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞 活力的测定 新鲜紫鸭趾 草花粉或蚕 豆表皮 加二丙酸酯 荧光素溶液 一滴5-lO 分钟 荧光显微镜 下观察 收集观察 用无细胞 和无染料 的培养液 洗二次 离心收集 染色液数 滴直接加 入细胞培 养液 悬浮细胞 细胞经吖啶 橙染色 活细胞核呈 黄绿色或亮 绿色荧光 细胞质为淡 红色 11 / 12 实验方法 吖啶橙鉴定细胞死活 实验方法 吖啶橙鉴定细胞死活 口腔粘 膜上皮 细胞 滴加1-2 滴0.01 吖啶橙生 理盐水溶 液 染色5分 钟后于荧 光显微镜 下观察 谢谢
