《羟喜树碱诱导的人tenon囊成纤维细胞凋亡及其机制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《羟喜树碱诱导的人tenon囊成纤维细胞凋亡及其机制（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中华实验眼科杂志 2 0 1 3年 3月第 3 1 卷第 3期 C h i n J E x p O p h t h a l m o l ， Ma r c h 2 0 1 3 ， V o 1 3 1 ， N o 3 羟喜树碱诱导 的人 T e n o n囊成纤维细胞凋亡 及其机制 殷 雪傅煜轩袁志兰 2 2】 实 验 研 究 【 摘要】 背景青光眼滤过手术后人 T e n o n囊成纤维细胞( H T F s ) 增生是滤过泡功能下降的主要原因， 羟喜树碱 是诱 导肿瘤细胞及多种非肿瘤细胞凋亡 的药 物。 目前 已有羟喜树 碱诱导成 纤维 细胞凋亡 的相关报 道 ， 但其作用机制 尚不完 全清
2、楚。 目的 探讨羟喜树 碱是 否能诱导 H T F s 凋 亡并研究 其作用机 制。 方法 取 离体 6 h的供 体结 膜囊组织 ， 以组织块 培养 法原代培养 H T F s ， 用含质量分数 1 0 胎牛血清 ( F B S ) 的 D ME M 培养基继续传代 培养 ， 用波形蛋 白及角蛋 白对 培养的细胞进行鉴定 ， 取 3 6代 细胞进行 实验。分别将 0 O l 、 0 0 5 、 0 1 0 g L羟喜树碱加入培养基 中作用 5 mi n ， 未加入羟喜树碱 的细胞作为对照组 ， 采 用细胞计数试剂盒一 8 ( C C K 8 ) 法检测各组 细胞 的增 生能力并 进行 比较 。
3、用 0 1 0 g L羟喜树碱 处理 细胞 ， 继续培 养 2 4 h ， 用 a n n e x i n V P I 双染流式细胞仪检测细胞凋亡率 ， 用 J C 一 1染色检测 H T F s 线 粒体膜 电位 ， 采用 We s t e r n b l o t 法 检测 H T F s 中半胱 氨酸天冬 酶一 3 ( c a s p a s e 一 3 ) 、 c a s p a s e 一 9及线粒体 细胞质 中细胞色素 C ( c y t C ) 蛋 白的表达 ， 对各组 中的测 量结果进行 比较 。 结果0 、 0 0 1 、 0 0 5 、 0 1 0 g L羟 喜树碱 组 的
4、H T F s 增生 值 ( 。 ) 分别 为 0 9 7 1 6 -+ 0 0 6 0 8 、 0 8 0 3 5 -+ 0 0 3 4 6 、 0 7 0 4 8 -+ 0 0 4 4 6和 0 6 2 6 5 0 0 2 8 6 ， 总 体 差异 有 统 计 学 意义 ( F=2 6 3 7 2 ， P= 0 0 0 2 ) ， 0 O 1 、 0 0 5 、 0 1 0 g L羟喜 树碱 组 H T F s A 。 值均低 于对照组 ， 差异均有 统计 学意义 ( P O 0 5 ) ， 以 0 1 0 g L羟喜树 碱 组 H T F s A 。 值最低。A n n e x i n
5、V P I 双染色检测发 现 ， 0 1 0 g L羟喜树 碱组 H T F s 凋亡率 为 ( 1 8 7 2 1 4 1 ) ， 明显高于对照组 的( 3 6 7 O 3 6 ) ， 差异 有统计学意义 ( t = 一 1 0 3 7 4 ， P= 0 0 0 1 ) ； 0 1 0 g L羟喜树碱组 H T F s中 c a s p a s e 一 3 、 c a s p a s e 一 9蛋白的表达强度明显强于对照组 。J C 1染色发现 ， 0 1 0 g L羟喜树碱处理 5 m i n 后 细胞质 中单体 J C 1 的绿色荧光 明显强于对照组 ， 而线粒体 中聚合态 J C 一
6、1的红色荧 光弱于对照组 。We s t e r n b l o t 检 测 发现 ， 0 1 0 g L羟喜树碱组 H T F s 线 粒体 中 c y t C蛋 白表 达灰度 值为 0 0 1 2 4 0 0 0 1 6 ， 高 于对照 组 的 0 0 2 1 6 0 0 0 9 6 ， 而 0 1 0 g L羟喜树 碱 组 H T F s细 胞 质 中 c y t C蛋 白表 达 灰 度 值 为 0 0 6 0 5 0 0 0 2 2 ， 低 于对 照 组 的 0 0 3 0 1 -+ 0 0 0 1 6 ， 差异均有统计学意义 ( 线粒 体 ： t = 4 8 6 5 ， P=0 0
7、1 4 ； 细胞质 ： t ： 一 1 1 1 7 7 ， P= 0 0 0 1 ) 。 结论 羟喜树碱诱导 H T F s 凋亡 ， 引起线粒体 的稳态破坏 ， 激活线粒体凋亡途径 。 【 关键 词】 羟喜树碱 ；成纤维细胞 ；线粒体凋亡途径 ；青 光眼 Hydr o xy c a mpt ot h e c i n i nduc e d a po pt o s i s o f huma n Te no n c a ps ul e fibr o bl a s t and i t s me c han i s m Y N Xu e FU Y u x u a n ， Y U A N Z h i l
8、 a n D e p a r t m e n t o f O p h t h a l m o l o g y ， A f fil i a t e d J i a n g s u P r o v i n c e H o s p i t a l of N a n g Me d i c a l Un i v e r s i t y， Na n g 21 0 0 29， Chi na Co r r e s po n di n g a u t h o r： YUAN Zh i l an， Emai l ： z hi l a n y ua nr ip s i n a c o rn A b s t r a
9、c t 】 B a c k g r o u n d T h e h y p e r p l a s i a o f h u m a n T e n o n c a p s u l e fi b r o b l a s t s( H T F s )i s a c o m mo n c a u s e o f f i l t e r i n g s u r g e r y f a i l u r e i n g l a u co mo us e y e Re s e a r c he s d e mon s t r a t e d t h a t hy d r 0 x y c a mp t o t
10、 h e c i n i s a c e l l c y c l e a r r e s t i n g d r u g a n d i n d u c e a p o p t o s i s o f c a n c e r a n d f i b r o b l a s t s H o w e v e r ， i t s m e c h a n i s m i s c u r r e n t l y l e s s u n d e r s t o o d Ob j e c t i v e Th i s s t u dy wa s t o i nv es t i g a t e whe t h
11、 e r h yd r o x yc a mp t o t h e c i n i nd uc e t h e a po pt o s i s o f HTFs a n d e x pl o r e t h e p os s i b l e me c h a n i s m M e t h ods Hu ma n Te no n c a p s u l e t i s s ue wa s o bt a i n e d f r o m Ey e Ba n k o f J i a n g s u Pr o v i nc e Ho s pi t a 1 HTFs we r e c u l t u r
12、 e d u s i n g e x p l a n t me t ho d i n v i v o a n d pa s s a g e d i n DMEM c o n t a i n i n g 1 0FBSTh e c e l l s we r e i d e nt i f i e d us i n g v i me n t i n a n d k e r a t i n by i mmu n0 c h e mi s t r y， a nd t h e c e l l s o f g e n e r a t i o n 36 i n t he l o g a r i t h mi c
13、g r o wt h ph a s e we r e u s e d i n t h e e x p e r i me n t Th e c e l l s we r e i n c u ba t e d wi t h 0 01， 0 05 o r 01 0 g L h y d r 0 x y c a mpt o t he c i n f o r 5 mi n ut e s r e s p e c t i v e l y， a n d t h e c e l l s wi t h o u t a ny hy d r o x y c a mp t o t h e c i n we r e s e
14、 r v e d a s t h e c o n t r o l g r o u pCe l l v i a bi l i t y t h e n w a s a s s e s s e d b y c e l l c o u n t i n g k i t 一 8 ( C C K8)f o r t h e o p t i ma l i n h i b i t i o n c o n c e n t r a t i o n T h e c e l l s w e r e t r e a t e d b y 0 1 0 g L h y d r o x y c a mpt o t he c i n
15、 f o r 2 4 h o ur s， a nd t h e a p o p t o t i c r a t e o f t he c e l l s we r e a s s a y e d wi t h a n ne x i n V PI D O I ： 1 0 3 7 6 0 c ma j i s s n 2 0 9 5 - 0 1 6 0 2 0 1 3 0 3 0 0 4 基金项 目： 国家 自然科学基金项 目( 8 1 2 7 1 0 0 1 ) 作者单位 ： 2 1 0 0 2 9南京 医科大学 附属江苏省人 民医院眼科 ( 殷雪 、 袁志兰 ) ， 基础医学院生理系( 傅煜轩 ) 通信作者 ： 袁志兰 ， E m a i l ： z h i l a n y u a n v i p s i n a c o n l 中华实验眼科杂 志 2 0 1 3年 3月第 3 1卷第 3期 C h i n J E x p O p h t h a l mo l ， Ma r c h 2 0 1 3 ， V o 1 3 1 ， N o 3 滤过性 手术 是 治疗 青 光 眼 的重 要 手 术 方式 ， 术 后 手术区瘢痕化是导致手术失败的主要原因。 目前临床 上主要靠 术 中或术后使用丝裂霉素 c( m i
