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1、药物血浆浓度及半衰期测定 药理学教研室 【实验目的】 1.以磺胺嘧啶钠为例学习测定药物 半衰期（t1/2）等药动学参数的 基本方法。 2.理解常用药动学参数的临床意义 3/13/20152 【实验原理】 磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物，在酸性溶液中，可与亚硝酸钠 起重氮反应，产生重氮盐。在碱性溶液中，重氮盐可与酚类化合物（麝 香草酚）起偶氮反应，形成橙红色的偶氮化合物。可在525nm波长下进 行比色测定。根据Beer-Lamber定律，浓度与光密度成正比关系。其化学 反应式如下： 3/13/20153 橙红色 【材料与方法】 一、实验动物：家兔1只。 二、器材与药品：试管24只，移液吸管1
2、0ml，1只； 1ml，2只；2ml 7只；移液器1支，吸头若干，试管夹 ，试管架，离心机，722型分光光度计，手术剪，眼科 剪，止血钳，动脉夹，眼科镊，缝线，药棉，纱布， 捆扎绳，注射器10ml 1支，5ml 1支。5%磺胺嘧啶钠溶 液，7.5%三氯醋酸溶液，0.5%亚硝酸钠溶液，0.5% 麝 香草酚溶液（溶于20氢氧化钠内），草酸钾结晶， 25%氨基甲酸乙酯溶液，肝素注射液。 3/13/20154 三、方法与步骤 1.取试管5只，依次用A1、A2、A3A5标记，各加入7.5%三氯醋酸2ml 备用。 2.取试管5只，依次用B1，B2，B3B5标记，各加入草酸钾结晶几粒( 抗凝)。 3.取家兔
3、，称重， 取血方法1： 以乌拉坦(4ml/kg)耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位 固定于手术台上，正中切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎 其远心端，并在近心端夹上动脉夹，以阻断血流，再将放血导管 向心脏方向插入颈总动脉内，用线打活结固定。 取血方法2：耳缘静脉近心端开始向远心端方向抽血0.51ml 4. 耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg，记录注完时间（准确到分钟 ）。 5.给药前、给药后5min、10min、20min、30min，松开动脉夹，放血 约1ml，分别置于B1 、 B2、B3、B4、B5管，迅速摇匀抗凝，记录取 血标本的准确时间。 注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。 3
4、/13/20155 3/13/20156 动脉取 血约1ml 准确移 液 100l 7.5%三氯醋 酸2ml 混匀 1500转转/分 离心5min 准确移 上清液 1.5ml 1.加0.5亚 硝酸钠0.5ml 2.加0.5%麝香草 酚1ml 525nm测测光密度 AB C 偶氮反应 橙红色 3/13/20157 6.然后准确吸取100l加入相应的各A管, 各 管以1500转/分离心5min，分别取离心后 的上清液1.5ml，加0.5%亚硝酸钠溶液0.5 ml，摇匀，再加0.5%麝香草酚1ml，可见 橙红色反应。以给药前血样作空白对照， 用722型分光光度计于525nm波长下进行 比色，测定各时
5、间点的光密度，在标准曲 线上查得磺胺钠浓度。 C=582D-53 根据吸光度,线性方程 y=582x-53, 计算浓度,求对数值. (Excel 常用函数 log10 计算对数值. ) 将给药时间t 与已求得的磺胺药血浆浓度对数值做直线回归, 根据一级消除动力学公式: lgCt=lgCo+ (-K/2.303)t 回归方程的斜率(-K/2.303), Excel 常用函数 slope斜率 计算得(-K/2.303)= -19.6, 计算K, t1/2=0.693/K, Vd=D/Co, Cl=K*Vd; 已知 t , lgCt, 计算Co, 从而计算Vd, Cl 给药后不同时间点的磺胺钠钠浓度
6、 3/13/20159 管号12345 给药时间 光密度值 磺胺钠浓度 磺胺钠对钠对 数浓浓度 7.计算 根据一级动力学消除公式 t 将给药时间t与已求得的磺胺血浆浓度对数 值lg Ct作直线回归，即可得回归方程的斜率 （- K /2.303）和截距（lgCo） 3/13/201510 3/13/201511 应用公式t1/2=0.693/K， Vd=D/Co，CL=KVd，便可求 得t1/2、Vd和CL。 1.计算器（Casio fx180或fx3600p ）的操作步骤 MODE 2 屏幕显示LR，进入线性回归计算状态 ； INV AC消除储存器内的全部数据； XoDo自变量输入； DATA
7、因变量数据输入； INV A（截距），INV B（斜率） INV r（相关系 数）； INV X得期望值。 3/13/201512 2.计算机的操作步骤（以Excel2002为例） 将数据输入Excel中，调用其自带的函数，根据 对话框要求操作即可完成运算。 INTERCEPT（known-ys，known-xs）求线性回归 拟合线方程的截距。 CORREL（arrayl，array2）返回两组数值的相关 系数。 SLOPE（Known-ys known- xs）返回经过给定数 据点的线性回归拟合线方程的斜率。 FORECAST（X，Known-ys known- xs）通过一线 性回归拟合线返回一个预测值。 3/13/201513 【注意事项】 1. 麻醉药静脉推注速度不宜过快， 2. 颈总动脉分离及插管 3. 给药时间及各取血点均要准确记录，加 样精确，减少误差。 4. 在取血样前，要将残留在动脉套管中的 血液放掉，以免影响实验结果。 5. 离心所得上清液加入亚硝酸钠充分摇匀 后方可加入麝香草酚。 3/13/201514 分光光度计使用 模式透射比开盖调零关盖100 透射率模式吸光度检测 比色杯光面透光
