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1、凝血检测质量保证 临床实验室的质量控制 全面质质量控制 室内质质控 室内比对对 室间间比对对 室间质间质 评评 分析前 质量控制 分析后 质量控制 1、抗凝剂剂：109mmol/L枸橼酸钠抗凝。 与钙离子形成可溶性螯合物而起到抗凝作用 有效阻止凝血因子FV、FVIII的降解 不受肝素影响，以用于肝素治疗的监测 EDTA ：抑制或干扰纤维 蛋白凝块形成纤维蛋白单体聚合， 对FV保护性差。 肝素：可与AT-作用抑制凝血因子的反应。 草酸盐：与钙离子形成不溶性沉淀物，影响血凝仪的光电终点。 分析前 2、采血管顺序（CLSI H3-A6）： 血培养管， 凝血项目管（如：蓝帽） 含有或不含促凝剂、含有或
2、不含分离 胶的血清管（如：红帽） 含有或不含分离胶的肝素血浆管（如：绿帽） 含有或不含分离胶的EDTA 管（如：紫帽或珍珠色帽） 含酵解抑制剂管（如：灰帽） 对于凝血项目该文件改变了第一管必须弃置的要求，当凝血管为第一管时，无 论是正常人或口服华法令患者其PT或INR均不受影响，正常人的APTT不受影响 。但是尚不知其它凝血项目是否受到影响，因此对其它凝血项目，还是建议第 二管采集。 分析前 3、采血管：内壁应硅化，而且死腔量越小越好。 4、采血量：通常按1：9的抗凝比例采血。 但对于HCT55%的患者，血浆相对于抗凝剂量会减少，使凝血试验的结果 延长，应调整采血量。 需取出抗凝剂剂量(ml)
3、=0.3-血量（ml）0.00185 (100-HCT%) 5、标本送检条件：室温下2小时内送检，低温会损伤血小板活化因子，使PT结果 降低。 6、标本保存时间：2-8 4小时，-20 1周，-80 6个月。 7、凝血、溶血标本为不合格标本。 分析前 造成标本溶血的原因 室内质控 室内质控的功能：查找分析测定中的误差 ，即用室内质控物的检测结果去确认常规 标本检测结果的有效性，如果确认通过， 此时的常规标本检验结果才可用于疾病的 诊断、治疗及预后观察等 室内质控 1. 质控品的选择 1.1 检测系统配套的质控品 1.2 第三方质控品 1.3 质控品要求 自动质控 ！ 室内质控 2. 室内质质控
4、项项目、质质控频频度 2.1 室内质控项目 PT、INR、APTT、Fbg、TT、DD、FDP 2.2 质控频度 p允许CV建立与评估 2012年凝血允许CV评估 p 失控率 p 仪器失控率 p 项目失控率 室内质控 3. 质控目标的确立 失控限 警告限 室内质控 4.质控靶值及SD的累积 4.1 靶值设定？ 质控厂商提供的数据仅供参考！ 不同仪器对同一批号质控的反应程度不一样！ 4.2 SD设定？ 室内质控 5.质控规则（Westgard多规则） 5.1 警告：12s、10x、41s 5.2 失控：22s、13s、R4s 室内质控 6. 室内质控月报表、失控处理记录 允许误 差本室标准 PT
5、15%15% APTT15%15% TTNA15% FBG20%10% DD3SD20% 室内比对 1、频率：每年2次。 2、参与仪器：所有仪器，以参加EQA的仪器为参考仪器。 3、执行人员：当班人员、质控员；组长 、主任签字确认。 4、比对血浆：收集高、中、低水平新鲜血浆共20份。 5、比对项 目：PT、INR、APTT、FBG、TT、DD。 6、数据处理：录入专用的EXCEL表格，统计 r、bias%。 7、判断标准：PT、INR、APTT、FBG、DD各项 r0.975，并且80%的样本bias%在下列标准 范围内为合格。 8、比对试验 不合格的仪器需启用校准程序。 室内比对 * * W
6、FH 卫生部、北京市 CAP WFH（世界血友病联盟）EQAS PT/INR、APTT、Fbg、TT（卫生部，北京市） PT/INR、APTT、Fbg、D Dimer、FDP、凝血因子、狼疮抗凝物、蛋白S/C、AT-III、vWF：Ag 室间质评 室间质评 室间质评 室间质评失控处理 * 室间质评 室间质评失控处理-1 * 室间质评 室间质评失控处理-2 * * * * 室间质评 室间质评失控处理-3 APTT、TT无定标项目 1、订货量； 2、东西两院保持批号一致； 3、试剂更换批号后进行标本传递（质控品、标本），观察批间差。 2014/1/7 PT旧试剂新试剂 CS5100CA7000-2
7、CA7000-3CA7000-4 143.342.643.64043 220.920.72219.720.9 316.616.717.915.816.9 436.435.235.433.735.5 511.511.812.111.212.1 INR旧试剂新试剂 CS5100CA7000-2CA7000-3CA7000-4 13.713.83.65 3.683.72 21.821.861.83 1.791.82 31.451.511.49 1.431.48 43.133.152.96 3.063.08 51.011.071.00 1.011.06 室间质评 标本传递举例 怎么来？ 怎么用？ AP
8、TT 100s或 15s； Fbg 1.0g/L； FDP 40g/ml，同时Fbg 1.0g/L； PT 70s或9s； TT 150s； 危急值 分析后 分析后 华法林凝血酶原时间（Prothrombin Time, PT） PT=各国货币INR=美金 INR=（患者PT/MNPT）ISI Local ISI ISI值确定？ ISI是什么：反映试剂对Vitamin K依赖的凝血因子水平的敏 感程度，通过国际参考品（International reference preparation， IRP）来溯源。 参考试剂 BCA 校正用户所用批号的试剂 Local ISI = MNPT PT IN
9、R ISI 预先ISI赋值的促凝血酶原活酶试 剂，Local ISI校准。 用户预先测定 MNPT 计算MNPT和ISI值 PT-INR系统校准 Local ISI MNPT 3、冻冻干标标准血 浆浆 1、仪仪器/厂商数据 地域、人群差异 2、冻冻干正常水平 质质控 4、20例正常新鲜鲜 血浆浆PT几何均数 潜在问题问题：工作量较较大 Local ISI 直接INR测定 用56个浓度的认证血浆（不同系 统的定值不一样）产生本实验室的 校准线。 使用本实验的凝血活酶/联合试剂测 定认证血浆的PT值，将所得的结果 和认证血浆的INR赋值绘成对数图 。 可以用线性的或正交的回归方法绘 制校准线，从校
10、准线上读取患者的 INR值。这种方法与ISI和正常人PT 均值（MNPT）无关。所有的本地 因素都被消除了。 给每个批号试剂校准INR MNPT 2,03,0 4,0 5,01,0 10 20 30 40 = 1/ISI INR PT (sec) PT-INR系统校准 Local ISI 用参考血浆对试剂进 行定标作校准曲线，根据定标曲 线直接得到INR 室间的变异可以大大降低 多点定标进行的校准更加精密准确 所有的当地因素都被消除了 Local ISI 采用INR定值血浆校准当地的PT/INR检测系统，不仅 使INR结果更加准确，而且加强了实验室间的INR结果 的一致性，使口服抗凝剂的监测更
11、加有效。 Local ISI定标: PT-INR的标准化绝不仅仅是对某一仪器或某一试剂的校准，从实验室角 度出发是对整个系统（System）的标准化！ “一个样本，一个结果”，不同系统结果趋于一致。 Local ISI 性能验证的目的 确保正确的选择实验室方法，并在方法使 用前进行充分、有效的评价，以保证方法 的可靠性 对实验室正在使用的检验系统/方法进行定 期的、有效的验证，以保证所使用的检验 系统/方法能够满足临床和患者的需求，并 保证检验系统/方法的可靠性 定量方法的性能验证 精密度 准确度评价 线性 携带污染 方法学比较 参考范围验证 分析干扰及稀释验证 性能验证内容 批内不精密度 参
12、数PTAPTTTTFibD- dimer FDP 水平1判 定标准% 2.002.005.004.005.005.00 水平2判 定标准% 4.004.0010.008.0010.0010.00 性能验证内容 日间精密度 参数PTAPTT TT Fib D- dimer FDP 判定标 准CV % 5.005.006.676.67 6.676.67 性能验证内容 准确度：是测量结果中系统误差与随机误 差的综合，表示测量结果与真值的一致程 度。保证检验结果准确性最有效的手段是 建立和保证检验结果的溯源性 计算定值参考物质或校准品的测定值（测定三 次取均值）与靶值的偏差 判断标准：小于1/2CLI
13、A88允许变异 性能验证内容 线性：选取一份接近预期上限的高值血浆样本（H），分 别按100%、90%、75%、50%、25%的比例进行稀释，每个 稀释度重复测定2次，计算均值。将实测值与预测值作比 较（偏离应小于10%），计算 y=ax+b，验证线性范围。 判断结果：a值在10.1范围内，相关系数R2 0.95 性能验证内容 携带污染：指分析物含量高的标本对分析物含 量低的标本其测定结果的影响 携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)*100% 携带污染率3% 性能验证内容 稀释验证：选取高值样本，分别以仪器自动稀 释和手工法两种方式，按照 原倍、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32
14、的比 例进行稀释，将两次结果比较，偏离应小 于10%。 性能验证内容 参考范围验证： 收集20例健康人血浆，年龄20-70岁，男10 例，女10例 计算检测系统的R值（R值=落在参考范围内 的样本数/总样本数）。要求R0.9 性能验证内容 方法学比对：为保证检验结果的可比性，使用实 验室的不同分析系统和/或公认的参考方法同时检测 一批病人标本，从测定结果的差异了解不同分析系统 之间的偏倚 标本范围应涵盖所比对项目的高中低值，正常结果 占4060%，分别用被比较的仪器方法以及比较仪 器方法检测 性能验证内容 干扰实验：分析干扰是指某一物质对某分析物的浓度 或催化活力测定中任何一步骤的影响作用 在
15、标本中添加不同浓度的干扰物后与未添加干扰物的 标本同时测定怀疑被干扰的项目，比较两者的结果 通常添加干扰物的标本和未添加干扰物的标本测定结 果的差异应10%。 干扰实验结果（乳糜） 性能验证 谢谢聆听！ ww_pumch 检测项 目 1/3允许 误差 1/2允许 误差 2/3允许 误差 允许误 差 实验 室自 定标准 建议允许 CV 备注 PT5.00%7.50%10.00%15.00%5.40%5.40% 2011.01-2012.05三水平共158次CV%结果，7次超出允许CV，均 在5/12CLIA88（6.25%）以内。 APTT5.00%7.50%10.00%15.00% 5.00%
16、 2011.01-2012.05三水平共158次CV%结果，5次超出允许CV，最 高值6.78%。与试剂换 批号后批间差有关，维持1/3CLIA88。 Fbg6.67%10.00%13.33%20.00%5.40%6.67% 2011.01-2012.05三水平共158次CV%结果，23次超出，急诊仪 器超出明显，调至6.67%后，近一年只有1次超出。（现OVB更 换略有好转） TT5.00%7.50%10.00%15.00% 12.00% 2011.06-2012.05除个别月份CV%可达到7%-8%，其余仪器均在 5%以下。 DD6.67%10.00%13.33%20.00%15%12.00%2011.02-2011.05各仪器CV均在10%以下
