《脑心通联合双联抗栓防治冠脉内微栓塞的动物实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脑心通联合双联抗栓防治冠脉内微栓塞的动物实验研究（54页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、福建医科大学 硕士学位论文 脑心通联合双联抗栓防治冠脉内微栓塞的动物实验研究 姓名：钟文娟 申请学位级别：硕士 专业：内科学（心血管病） 指导教师：陈慧;吴小盈 20100401 脑心通联合双联抗栓防治冠脉内微栓塞的动物实验研究 中文摘要 目的 通过建立大鼠冠脉微栓塞( C M E ) 模型，比较脑心通胶囊联合双联抗栓( 氯吡 格雷+ 阿司匹林) 与单纯联合双联抗栓治疗和单纯脑心通胶囊处理后对C M E 血栓数 量、心肌细胞凋亡率及出血凝血之间平衡的影响，探讨中西医联合治疗的优势， 为寻找调节双联抗栓后造成机体的紊乱提供实验依据。 方法 以清洁级S D 大鼠为研究对象，自心尖部注入同源大鼠血栓
2、建立C M E 模型。 根据预实验结果，选取9 5 只大鼠随机分为6 组，即对照组( C L 组，n = l O ) 、假 手术组( S O 组，n = l O ) 、模型组( C M E 组，n = 1 5 ) 、脑心通胶囊组( N J 组，n = 1 5 ) 、 双联抗栓组( D A 组，n = 3 0 ) 、脑心通胶囊+ 双联抗栓组( N D A 组，n = 1 5 ) 。6 9 只大 鼠获得完整数据( C L 组= 1 0 、S O 组= 1 0 、C M E 组= 1 1 、N J 组= 1 1 、D A 组= 1 3 和N D A 组= 1 4 ) 。术前预给药3 天，术后继续用药
3、7 天，取血后处死动物收集心脏标本。 H E 染色观察C M E 血栓数量，T U N E L 染色结合活化型c a s p a s e 一3 免疫组化法测定心 肌细胞凋亡率，剪尾法检测出血时间，玻片法检测凝血时间，比浊法检测血小板 聚集率。 结果 1 C M E 模型鉴定 与S O 组比，C M E 组出凝血时间明显下降( P 0 0 5 ) ；C M E 组与S 0 组比较，心 肌细胞凋亡率明显增加，二者差异具有显著统计学意义( P O 0 5 ) ；C M E 组与S O 组比较，出凝血时间明显缩短，二者差异具有统计学意 义( P 0 0 5 ) ；C M E 组与S O 组比较，不同浓
4、度A D P 诱导的最大血小板聚集率明显增 加，二者差异具有显著统计学意义( P 0 0 1 ) 。表明冠脉微栓塞后，小面积的心 肌梗死激活了血小板，引起血小板功能亢进，对诱导剂A D P 敏感性增高，引发血 小板聚集增强。( 表4 ) 表4 不同浓度A D P 诱导的最大血小板聚集率的比较( x s ) 注：与S 0 组比较，# t t P 0 0 5 。P A R 血小板聚集率 3 药物干预对大鼠C M E 血栓数量、心肌细胞凋亡率的影响 3 1 药物干预后C M E 血栓数量的比较 与c M E 组比较，N J 组、D A 组、N D A 组C M E 血栓数量百分比显著降低( 2 9
5、0 4 0 $ 1 8 5 0 $ v s 2 5 6 5 1 9 2 0 $ ，2 1 0 3 1 8 2 0 $ ，1 8 8 0 0 $ 1 9 7 0 $ ，P O 0 1 ) 。D A 组和N D A 组均明显低于N J 组，差异有显著统计学意义( P 均 0 0 1 ) 。N D A 组血栓 数量百分比降低幅度明显强于D A 组( P 0 0 1 ) 。提示药物干预后能够减少冠脉微 栓塞大鼠的血栓数量，脑心通联合双联抗栓效果最显著。( 表5 、图4 ) 表5 药物干预后H E 染色冠脉内微栓塞形成的比较( X s ) 注：与C M E 组比较，料P O 0 1 ；与N J 组比较，
6、$ $ P O 0 1 ；与D A 组比较，P O 0 1 。 3 2 药物干预对心肌细胞凋亡率的影响 1 7 与C M E 组比较，N J 组、D A 组、N D A 组免疫组化法检测心肌细胞凋亡率显著 降低( T U N E L 法：“4 5 1 2 6 v s 8 0 0 1 0 8 ，5 2 9 0 8 7 ，2 8 3 1 0 0 ， P O 0 1 ；活化型c a s p a s e - 3 表达法：1 2 2 2 1 1 1 v s 9 0 4 0 9 3 ，5 5 9 1 0 8 ，2 6 9 0 9 1 ，P O 0 1 ) 。D A 组和N D A 组均明显低于N J 组，
7、差异有显 著统计学意义( P 均 0 0 1 ) 。N D A 组心肌细胞凋亡率降低幅度明显强于D A 组 ( P 0 0 1 ) 。提示药物干预后可以减少心肌细胞凋亡，脑心通联合双联抗栓治疗 能够最有效的减少心肌细胞凋亡率。免疫组化法检测活化型c a s p a s e - 3 表达与 T U N E L 法S p e a r m a n 相关系数为0 9 7 5 ，P O 0 1 ，有显著统计学意义。( 表6 ，图5 、 图6 ) 表6 药物干预后免疫组化法观察冠脉内微栓塞后心肌细胞凋亡率的比较( x s ) 注：与C b l E 组比较，幸幸P O 0 1 ：与N J 组比较，$ $ P
8、 O 0 1 ；与D A 组比较，AP O 0 1 。 4 出血凝血平衡的影响 4 1 药物干预后大鼠死亡率的比较 在排除意外死亡后，通过对术后存活大鼠进行死亡率的比较，差异具有显著 统计学意义( P 0 0 1 ) ，各组之间两两比较采用X 2 分割法，检验水准a 为0 0 0 7 1 ， 仅D A 组和N D A 组死亡率差异具有统计学意义( P O 0 0 7 1 ) 。提示相比中西药组， 西药处理后提高了手术中及术后大鼠死亡率，而加用脑心通胶囊大鼠死亡率明显 下降。( 表7 ) 表7 药物处理后任两组大鼠死亡率间的比较 4 2 药物干预后大鼠出血发生率的比较 手术中D A 组心尖穿刺出
9、现出血不止的情况( 超过2 0 m i n ) ，而其他各组均未 出现此种情况，我们认为是药物干预后出现出血的副作用。药物干预后各组大鼠 出血发生率差异的比较具有显著统计学意义( P O 0 1 ) 。C M E 组、N J 组、N D A 组和 D A 组比较，采用X 2 分割法，检验水准a 为0 0 0 8 3 ，出血发生率差异具有统计 学意义( P 均 0 0 0 8 3 ) 。表明阿司匹林联合氯吡格雷预处理后大大提高了手术出 血的发生率，而加用脑心通胶囊后却能够抑制出血发生。( 表8 ) 表8 药物处理后与D A 组出血不止发生率的比较 1 9 4 3 出凝血时间的比较 与C b i
10、E 组比较，N J 组、D A 组、N D A 组出凝血时间明显延长( 出血时间：4 5 9 m i n 1 5 6 m i nY S 2 3 4 7m i n 3 6 2m i n ，4 2 4 3m i n 3 5 8 m i n ，3 0 9 3m i n 3 0 1 m i n ，P O 0 1 ；凝血时间：1 4 1 9 1S 2 6 0 7SV S 2 5 3 0 9S 3 5 4 3S ，3 2 2 0 8 s 3 1 3 3s ，2 9 1 0 7s 2 9 6 6s ，P O 0 1 ) 。D A 组和N D A 组均明显长于N J 组， 差异有显著统计学意义( P 均 0
11、0 1 ) 。D A 组出凝血时间长于N D A 组，差异有统计 学意义( P 0 0 1 或P O 0 5 ) 。提示药物干预后能够抑制血小板活化，减慢出凝血 过程，延长出凝血时间。尤以双联抗栓组出凝血时间最长。( 表9 ，图7 、图8 ) 表9 药物干预后出凝血时间的比较( x S ) 注：与O I E 组比较，| c 柙 0 0 1 与N J 组比较，$ $ P O O l ；与D A 组比较，P O 0 5 ， P O 0 l 。 4 4 血小板聚集率的比较 与C M E 组比较，N J 组、D A 组、N D A 组不同浓度A D P 诱导的最大血小板聚 集率显著降低( 5 P o
12、m L ：6 3 6 1 4 6 7 v s 3 9 0 0 5 4 3 ，5 2 5 3 7 9 ， 1 8 5 3 4 6 9 ，P O 0 1 ：2 0 m L 6 8 5 0 5 7 3 V S 4 4 4 4 6 9 5 ，1 0 6 3 5 6 2 ，2 4 8 9 7 5 6 ，P O 0 1 ) 。D A 组和N D A 组均明显低于N J 组，差异有 显著统计学意义( P 均 O 0 1 ) 。D A 组不同浓度A D P 诱导的最大血小板聚集率显著 低于N I ) A 组( P 0 0 1 ) 。提示药物干预能够抑制冠脉微栓塞后大鼠的血小板活化， 降低血小板聚集，对A D
13、P 诱导的血小板聚集率显著降低，从而可能抑制血栓形成。 双联抗栓治疗组最大血小板聚集率降低幅度最大( 表1 0 ，图9 ) 表1 0 药物干预后不同浓度A D P 诱导的最大血小板聚集率的比较( X s ) 注：与C M E 组比较，料P 0 0 1 ；与N J 组比较，$ $ P 0 O l ；与D A 组比较，A A P 0 0 1 。 2 1 附图 图l ： E 染色观察冠脉内徽栓塞结果 C L 组( 圉A ) 和S O 组( 目B ) 极少见到冠脉内微挂塞形成，锄m 低f 自镜( 目c ) 可见到稚脉内微m 桂 o l E 组高倍镜( 圈D ) 日见血栓主g 自m 小板、纤维秦和或红细
14、胞等组成。圈 cz 胍染色1 0 0 ，图D ： 睫枭色4 0 0 ，图中标R 长度2 0 F 日。 、 I 、 A ，BC V 图2T L | N E L 蛙检测心肌细胞* 亡结果 C L 组( 图 ) 和S 0 组( 图B ) 极少见到掏亡的一G , J g 啪胞，a E 组( 圈c ) 日t 的心肌细胞叫增多。棱染 成萑黑色的为橱t 心肌细胞。T U N E L 法x 4 C g ，圈中袱长度2 0 帅。 圉3 ：话化型c a s p B s e 一3 表达法检测。肌细胞捐t 结果 c L 组( 圈 ) 和s o m ( 罔B ) 饭见到月t 的心肌细胞0 I E 组( 图c ) 亡=
15、I n 心肌细胞明i 增多。臆浆 黼零j 餮窿 染成棕色的为调t o 肌目胞。活化型c a s p s e3 表选法X4 0 0 图中标尺长度2 0 岫。 目4 ：药物干预目雎船色观察R 内馓栓皋结* c I I E 组( 图 ) 咏内罐m 挂叫显增多，町组( 瞄B ) 、D A 组( 圈C ) 、 组( 圈D ) 冠脉内0 E m 栓数量 百分比敞敬减少。旺染色1 0 0 圈中栝尺长度2 0 妇 圈5z 药物干预后T U I _ _ E L 检测心肌细胞摘亡结粜 眦组( 圈 ) W 亡的。肌艟明显增多耵组( 圈B ) 、D 组( 图c ) 帅 组( 圈D ) 心肌细胞凋t 齄量 依扶碱少。棱染成蓝黑色的为翻亡心肌细胞。啪L 法4 0 0 t 图中标尺长度2 0 衄 圈6 ：药物f 预后活化型c a s ! o 一3 表选法检测心肌细胞捅亡结果 0 I E 组( 圈 ) * 亡的心肌镕胞明坩多，町组【雷B ) ，D 蛆 圈c ) 、m 组( 圈心肌日腿确t 数量 依攻减少。胞壤染成棕色的目亡心肌目腮。话化型c a 8 p 丑8 e3 表选珐4 0 0 ，目中标尺长度2 0 岫一 m 一 - H M 岔a 一 己 1 0 一 图7 药物干预后各组出血时问的比较( 与c 脏组比较，柑P
