《脂肪来源的间充质干细胞体外转分化内皮细胞及钙调蛋白拮抗剂w7调控研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脂肪来源的间充质干细胞体外转分化内皮细胞及钙调蛋白拮抗剂w7调控研究（98页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、硕士学位论文 学校代码： 1 0 0 2 3 学号：S 2 0 0 8 2 3 6 脂肪来源的间充质干细胞体外转分化内皮细胞 及钙调蛋白拮抗剂W 7 调控研究 所院 ：微循环研究所 姓名 ：翟羽佳 导师 ：仉红刚教授 学科专业：生物医学工程 研究方向：血管新生 完成日期： 2 0 1 1 一0 5 1 7 中国医学科学院& 北京协和医学院硕士学位论文 目录 英文缩写略表2 中文摘要”3 英文摘要”6 独创性声明8 第一部分人脂肪来源的间充质干细胞在无血清培养条件下转分化为内皮细 胞”一”一”一“”9 前言”“”“” 1 0 实验材料1 1 实验方法1 2 结果”一一”“”1 3 讨论”“”“一
2、”1 9 参考文献2 2 第二部分1 r 7 促进诱导脂肪来源间充质干细胞体外转分化内皮细 胞”一”“”“”2 5 前言”2 6 实验材料“2 6 实验方法2 8 结果”一”3 0 讨论”一”“”“”3 6 参考文献”3 9 第三部分人脂肪间充质干细胞与不同孔径的聚乳酸一聚乙二醇( P L A - P E G ) 共聚物 材料相容性及分化为内皮细胞的研究4 1 前言“”“”“”一”“”4 2 实验材料4 2 实验方法“ 结果”一”一”一”4 5 ，寸论”一”“”“”“”一一”4 9 参考文献5 l 附：已发表文章5 3 待发表文章9 1 个人简历9 2 蜀【谢”一”“”“一”一”“”一”9 4
3、 L 一 中国医学科学院& 北京协和医学院硕士学位论文 英文缩略词表 h A D S C sh u m 锄a d i p o s 训硎V e dm 鹤明c h y m a I 娠釉l I s W 7N - ( 6 锄m o h e x y l ) - 5 砒l o 胁l n a p h t h a l e m s u l f 0 咖i d e P L A P E G p o l y ( I a c t i c i 辞p o l y ( e t I l y I e 眦g I y c o I ) E C sE n d o t l l e l i a lc e l l s v W Fv o nW i
4、 I l e b r a n dI h n o r V B C a d h e r 妯垤u l 盯d O 廿1 e l i a lc a d h e 血 V E G FV a u l 盯d o I 量l e l i a lg r o 叭h 丘I c t 甜 b F G F b 嬲i c 肋m b l a s t 伊o 他雠t o r E R K e ) ( 仃a c e l l u I 盯m g I l l 砷e dk i I l a 辩 p E R Kp h o s p h o 叮I a l l e de x n 徼e l l u L a r 他g u l a t c dk i 彻 D A
5、P I 4 ，鲥i 锄i d i I l 0 _ 2 - p h 舶y l i n d o l e P D G F p l e t d 咖e dg r o 讹伽= t o r P L A 即懿s e dl i p o a S p i 瞰e A c - L D L a 哆l a t e dl o wd e 鹏毋l i p o p 钯i I l M A P K m i t o g 朗- a c t i v a t e d 舯d t e i l lk i 彻辩 P K C p r o t e i I l k i l l a 转C P l ( A 胂蹴i I l k i I l a A P L C P
6、 h o s p I l o l i p a C S D Ss u l 最l t ed 姗l d i u m T E M E D N N N ，N 。- T e t r a 岫嘶l e m y I 朋e d i 锄毗 A P S锄m i u mp e 塔u l f a t e 2 人脂肪间充质干细胞 ( 6 一氨乙基) 一5 一氯一卜萘磺酰胺 聚乳酸一聚乙二醇共聚物 内皮细胞 血管性血友病因子 血管内皮钙粘素 内皮细胞生长因子 碱性成纤维生长因子 细胞外调节激酶 磷酸化细胞外调节激酶 4 。6 一二脒基- 2 一苯基吲哚 血小板衍生生长因子 脂肪提取细胞 乙酰化低密度脂蛋白 丝裂素活化蛋白激酶
7、 蛋白激酶C 蛋白激酶A 磷脂酶C 十二烷基硫酸钠 N ，N ，N ，N 一四甲基乙二胺 过硫酸铵 中国医学科学院& 北京协和医学院硕士学位论文 中文摘要 研究背景：通过组织工程技术实现缺损组织或器官的修复与替代具有重要的临床 意义。而理想的种子细胞是组织工程的基础。对于缺血性疾病而言，利用干细胞的 多向分化潜能进行血管重构来改善局部缺血的治疗模式，是近年来许多学者关注的 重点。作为候选细胞的内皮祖细胞，骨髓来源间充质干细胞，卫星细胞等，由于取 材困难、获取率低、分化能力和细胞数量随体外传代培养逐渐下降等应用受限，此 外更受到伦理学的质疑。脂肪来源的间充质干细胞( h u m a na d i
8、 p o s e d e r i v e d m e s e n c h y 舱ls t e mc e l l s ，h A D S C s ) 是从成体脂肪组织中分离出来的一类成体干细 胞，具有和骨髓来源的基质干细胞相似的生物学特性和多系分化潜能，并因其不侵 犯相关伦理及取材方面的优势，有望成为种子细胞的热门选择。为此，建立合理的 h A D S C s 体外培养体系、向内皮细胞的诱导分化、以及适当载体的寻找都亟待深入研 究。 研究目的：第一部分研究：在无血清培养条件下，将人脂肪来源的间充质干细胞 ( h A D S C s ) 分化为内皮细胞，为血管组织工程化种子细胞的来源和血管新生模型的
9、 建立提供基础。第二部分研究：以( 6 一氨乙基) 5 一氯一卜萘磺酰胺( w 7 ) 研究钙调蛋 白拮抗剂对人脂肪间充质干细胞( h A D S C s ) 向内皮细胞分化过程中细胞表型、细胞 内游离钙离子浓度变化、成血管功能以及E R K M A P K 信号通路的作用。第三部分研 究：研究人脂肪来源的间充质干细胞与新型可降解多孔生物材料聚乳酸一聚乙二 醇共聚物( P o l y ( 1 a c t i ca c i d ) 一p o l y ( e t h y l e n eg l y c 0 1 ) ，P L A P E G ) 的相容性，及 h A D S C s 在材料上转分化为内
10、皮细胞( e n d o t h e l i a lc e l l s ，E C s ) 和血管形成的能力。 研究方法：第一部分：从健康人体抽脂术获得的脂肪进行h A D S C s 原代培养，用流 式细胞术检测C D 4 5 、C D 4 4 、C D l 4 、C D 2 9 及C D l 0 5 ，并分化至成骨和脂肪细胞，以免 疫组化方法检测其干细胞的分化能力；然后用含4 0 n g m 1V E G F 和1 0 n g m 1b F G F 的 无血清分化培养基诱导h A D S C s 分化为内皮细胞，在第1 5 、3 0 、5 0 d 通过流式细胞 术检测v W F 和V E C
11、 a d h e r i n 两种特异性抗原表达，并用透射电镜检测W P 小体以及 成血管实验来检测是否分化为内皮细胞。第二部分：以含4 0 n g m 1V E G F 和1 0 n g m 1 b F G F 的干细胞无血清分化培养基培养P 3h A D S C s ，将实验分为空白分化对照组( 不 - 3 - 研究结果：在第一部分中，分离得到的细胞流式细胞术分析结果为，c D 4 5 ( 一) C D l 4 ( 一) C D 4 4 ( + ) C D 2 9 ( + ) C D l 0 5 ( + ) ，表明该细胞为人脂肪来源的间充质干细胞， 并且可分化成骨成脂细胞。随着分化时间的延
12、长，v w F 和V E C a d h e r i n 的表达不断 增加，并且可在电镜下观察到1 | r P 小体的出现以及在光镜下观察到分化5 0 d 的h A D S C s 具有成血管的能力。第二部分中，分化至8 d 时，与空白分化对照组相比，随着w 7 浓度的降低，h A D S C s 转分化后的细胞V E C a d h e r i n 和v W F 的表达量显著上升( 尸 0 0 1 ) ，胞质内游离的钙离子浓度升高( 必0 0 1 ) 。药物作用2 4 h 后，药物干预组 的培养细胞均有管腔样血管结构形成，空白分化对照组的细胞无血管管型形成。与 空白分化对照组相比，不同药物干预组细胞E R K 表达水平没有显著性改变( 胗O 0 5 ) ， 而随着w 7 浓度的降低p E R K 表达水平明显升高( 氏O 0 1 ) 。在第三部分中，利用 己知文献的方法观察孔径分别为6 0 8 0 I Jm 和1 8 0 2 0 0 Um 的P E G P L A 材料1 4 d 的吸 水率分别为3 7 2 7 3 和2 4 5 3 1 ，降解率为9 0 9 和6 2 5 。种植h A D S C s 后，S E M 下 观察
