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1、双向电泳步骤-标准操作完整版 导读：就爱阅读网友为您分享以下“双向电泳步骤-标准操作完整版”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对的支持!双向电泳 一、 储备液的配制： 水化储液： 尿素(MW 60.06) 7M 10.5g 硫脲(MW 76.12) 2M 3.8g CHAPS(MW614.89) 2% 0.5g 加超纯水定容至25mL后经0.22m一次性滤膜过滤，过滤后分装成50小管，每小管500uL，-20冰箱保存。 1%溴酚蓝储液 溴酚蓝 1% 1g Tris-Base 50mM 0.6g 加超纯水至100mL。 30%T,2.6%C聚丙烯酰胺贮液：（凝胶厚度1.5mm） 丙烯酰胺146g
2、甲叉双丙烯酰胺4g 用超纯水定容至500mL，经0.22m滤纸过滤后，使用棕色瓶于4冰箱保存。 丙烯酰胺的计算： T=（丙烯酰胺质量+甲叉丙烯酰胺质量）/总质量100%=（丙烯酰胺克数+交联剂克数）/总体积（ml）100% C=甲叉丙烯酰胺质量/（丙烯酰胺质量+甲叉丙烯酰胺质量）100%=交联剂克数/（丙烯酰胺克数+交联剂克数）100% C值高，孔径小，凝胶较硬；C值低，孔径大，适合跑蛋白质。 1.5MTris-BasepH8.8 ： Tris-Base（MW 121.1）90.75g 加超纯水至400mL 用浓盐酸调pH至8.8（大约加入8ml），加超纯水定容至500mL。4冰箱保存。 10
3、% SDS ： SDS 10g 加超纯水至100mL，混匀后过滤，室温保存。 电泳缓冲液： Tris-Base（FW 121.1）25mM12g 甘氨酸（FW 75.07）192mM57.6g SDS(FW 288.38)0.1%4g 加入超纯水4L 平衡储液： 1.5M Tris-CL（pH8.8）50mM 16.75mL 尿素(MW 60.06) 6M 180.18g 甘油 30%（V/V） 150mL SDS(FW 288.38)2%（W/V） 10g 溴酚蓝储液（1%） 0.002%（W/V） 1mL 加超纯水至500mL，40mL分装，-20保存。 二、临用前配置溶液 水化液： 水化储液 500uL DTT 20mM3.5uL IPG 0.5% 2.5uL 1%溴酚蓝储液 0.002% 1uL 胶条平衡缓冲液A： 平衡储液 20mL DTT 1% 0.2g 充分混匀。 胶条平衡缓冲液B： 平衡储液 20mL 碘乙酰胺 2.5% 0.5g 充分混匀，避光配制。 低熔点琼脂糖封胶液： 低熔点琼脂糖 0.5% 0.05g 电泳缓冲液 10mL
