《水牛卵母细胞和孤雌激活早期胚胎端粒酶活性测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《水牛卵母细胞和孤雌激活早期胚胎端粒酶活性测定（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、粒分为二，个携带了g a g p o l 编码序列及R R E ，另一个包含了编码r e v 的序列。这种 焚理更减少了产生复制型癌毒的凡率，搜褥馒病毒鼗薄在建溪中更麓熬安全。 3 慢瘸毒载体介导的转基因鸡的研究 L o i s 。a n dP f e i f e r 是震复制缺罄黉瘸毒载落磷究转基戮凄耪的先囊；熳瘸毒载体寝 用于转基因鸡的研究应归功于R o s li n 研究所资深科学家H e l e nS a n g 的工作，他将V S V - G 镑型包装蕊重缝绿色荧光蛋叁( 鼯熬马簧染链贫盘痪毒( 辇王g 注射烈7 3 个鸡蛋鳇 囊胚腔中，孵化后检测到1 2 只转基因公鸡，其种系传递的
2、概率最高达到了4 5 ，并且G 1 寨G 2 代转基因斡表达摸式帮表达承平穗对稳定，并盟没有发现纛菊黪基蠢沉黧蕊现象。 随着H e l e nS a n g 这项开创性的研究成果的发液，S u s a nC C h a p m a n 用含有磷酸甘油 澈酶P G K ) 熹韵子元嚣熬耋缝的嚣薹p 差馒病毒载钵黼各鑫在全奏各个缝绶孛表达S 露熬转 基因鸡，B e n j a m i nB S c o t t 用人类突触摄白基因启动子驱动下的H I V - I 锘I J 备了转基网鹌 鹑。 R o s l i n 研究所和O x f o r dB i o m e d i c aa n dV i r
3、 a g e n ( S c o t l a n d ) 两家公司合作制铸出 在输辩管孛蒋异经高水平表达两耱吴舂生耪学嚣缝鳇洛疗性蛋鑫麓于治疗恶性黑色 素瘤的人类S c F v - F c 微型抗体和I F N - 1 3 - l a ，使利用鸡蛋来生产重组凝白的人类美好愿娥 之翥孬次被打开。 4 应用狮景 转基因藕可缓解决鬻蓠皇稳潮药工遭漪蛋交生产瓶颈游慧，搜生产成本辩蛋盎徐格 将大大降低，熊另一个应用就是抗病育种等。 锋毒蔫斧：盏庆炙，速溅谗毒，裁繇霓囊，预静兽医学专监，毫予郫簇：m e n g q w 2 0 0 0 l h o t m a i l 。c o m 水牛卵母细胞和孤雌激活早
4、期胚胎端粒酶活性测定臻 李秀林4 煎丹：石德顺；翊庆友3 崔奎裔3 ( 1 上海二医新生基因科技有限公嘲上海2 0 1 6 1 1 ) f 2 主海毒薅牛研究赛上海2 0 0 0 3 2 ) ( 3 广西大学动物繁殖研究所南宁5 3 0 0 0 5 ) 端粒D N A 楚一段寓宙瞟呤碱基G 的筒攀串联熏复序列，是稳定染色体末端的重要元 件。其长度照辫细胞的不断分裂丽逐渐缭短，当端粒缩短歪一个关键的长魔时，便会导 国家爵然科学基众资助项目( 3 0 4 6 0 0 9 0 ) 致细胞交大、宸平并停止分裂焉死亡。因燕，许多翳究入员耨端粒称为细胞熬“分裂 钟。端粒酶( T E R ) 是一种特殊的细
5、胞核糖核蛋白( R N P ) 反转录酶( R T ) ，其核心酶 包括蛋鸯噩基和R N A 元髂。其中T E R 反转录酶( T E R T ) 起催纯捧餍，R N A 元磐起模板终震； 端粒酶通过自身R N A 元件为模板在T E R 反转录酶( T E R T ) 作用下合成端粒重复序列，此功 缝对浚复端粒长发，维持端粒的稳定其有重要意义，但端粒酶只存在于生殖缨胞、于缨 胞、肿瘤细胞及永生化的细胞，成体细胞一般无端粒酶活性。端粒酶在哺乳动物发育过 程中窭现骥曼变纯。有疆究表瞬，成熟舞母细麓蕊端粒酶活性相对较低，胚胎细艇靛端 粒酶活性相对较嵩，早期发育的胚胎都存在端粒酶活性，而分化的组织和
6、细胞检测不到 端粒酶活性。然蠢，在冒海有关东牛孤雌激活( 矬) 瓤胎发育过程中麴端粒酶活性变化 尚未见有报道。为此，本研究将对水牛卵母细胞及P A 胚胎不同发育阶段的端粒酶活性水 平进章亍测定，戮便弄清求牛舞母细胞及鞑胚胎早襄发育过程率的端粒酶活性交化规律， 深入了解水牛胚胎早期发生的相关机理。 本研究通过T R A P 方法对水牛卵母缨麓和备发育阶段早期胚胎的端粒酶活性进行了 测定，结果发现，从高水平的端粒酶活性由来成熟卵母细胞到成熟卵母细胞逐渐降低， 直到成熟卵母细胞达到最低水平( p O 。0 5 ) 。高求平的端粒酶活性在牛的帮人鹃来成熟 卵母细胞可以鉴定出来。这种未成熟卵母细胞的高端
7、粒酶活性和成熟卵母细胞的低端粒 酶活洼表明了在水牛穿母缀胞减数分裂中端粒酶的潜在作用。已经报道，在G ￥生发泡破 裂，蛋白质和R N A 的合成效率突然降低。而且，在卵泡发育过程中积累的多聚核替酸R N A 在减数分裂中薄解或者去聚合。这些生物纯学改交可麓与舜母细胞成熟的端粒酶活性降 低有关。 在瀚胚胎中，端粒酶活性从未成熟卵母细胞到“1 6 细胞阶段的胚胎逐渐降低。在桑 椹胚阶段酶活性再次增加直到囊胚阶段达到最高水平，这与我们在I V F 胚胎的研究一致， 但是端粒酶活性均眈相应阶段的I V F 胚胎的高。原因可能是通过精予受精和孤雌激活的 卵母细胞由于不同的蛋白合成反应如蛋白质磷酸化藤形成
8、不圊的细胞质。我们以前在 I V F 胚胎的研究结巢发现，体外培养的2 4 细胞和8 1 6 细胞胚胎端粒酶活性的降低与其发 育过程中的发育阻滞有关。因为在水牛早期胚骆体外发育过程中，体外发育阻抑发生在 8 1 6 细胞阶段，活化的端粒酶蛋白和卵母细胞中所贮存的端粒酶m R N A 此时己消耗殆尽， 丽胚胎基因组才题开始活化，薪的端粒酶蛋白还未合成，因此，2 4 细胞和8 1 6 细胞韪 胎只检测到低水平端粒酶活性。一旦胚胎基因转录发生，新的端粒酶蛋白被合成，这将 弓l 起8 1 6 缨胞期胚胎之后的端粒酶活性增加。因此，我们推测孤雌激活后2 4 细胞和 5 5 8 一1 6 细胞胚胎端粒酶活
9、性的降低也可能与其体外发育过程中的发育阻滞有关。 在桑椹胚阶段酶活性显著( P 0 。0 5 ) 增加直至囊胚阶段达到最离求平。囊胚阶段 的端粒酶活性比2 4 细胞S n s 一1 6 细胞胚胎的高1 0 倍左右，比桑椹胚高2 5 倍左右，这与 S a i k h u n 等( 2 0 0 4 ) 酶报道结果不致。链稍黠永牛的研究发现，囊胚端粒酶活性毙桑 椹配高5 倍左右，这一差异可能由于孤雌激活方法不同或是检测方法不同而造成，原因 尚不清楚。就单位缨腱的端粒酶活性焉论，本磷究结果显示，端粒酶活性从未成熟郛母 细胞N P A 囊胚阶段是逐渐降低的，这与W r i g h t 等( 1 9 9
10、6 ) 和X u 等( 2 0 0 1 ) 报道致。推 测这静逐渐降低的端粒酶活性可能与崤羲动物早襄胚胎彝裂球发育的全麓性逐步降低 有关，这种全能性在不同发育时期和不同分裂球间存在差异，随着发肖过程的进展，卵 裂球不断加深分化程度，其发育潜力不断降低，需要进一步探索其潜在酌祝制。 综上所述，水牛卵母细胞及P A 早期胚胎的端粒酶活性变化与卵母细胞成熟，发育阻 断及胚胎发育全能性的逐步降低有关。 作者简介：李秀林，硕士，童要从事圣时胞发育斑物学相荧研究，电子邮箱：l i x i u l i n 2 0 0 5 1 6 3 C O r n 马鹿，牛种闻核移植胚胎的克隆和培养 刘韬1 赛务加甫2彭新
11、荣3 钱其军k t 潼汪理工大学垒命辩学院薪元研究新杭燕3 1 0 0 1 8 ) ( 2 新疆石河子大学动物科技学院稻河子8 3 2 0 0 3 ) ( 3 秀北农林科技大学生物量程研究所杨凌7 1 2 1 0 0 ) 本试验旨在探索天山马鹿细胞核在牛卵母细胞的去分化潜能性。本试验用体细胞 核移植酶方法分别构建了马麓一牛异构胚黎牛一牛同构胚。试验结果表骥，马麓缀脆可 在牛去核卵母细胞内去分化并发育至囊胚阶段，但马鹿异构胚8 1 6 细胞发育阻滞率 显著护 O 0 5 ) 高于对照组，马麓异构胚的囊涯发育率显著( P O 。0 5 ) 低于对照组。 随着核移植技术的发展，种间嵬隆动物如印度野牛，欧洲盘羊和北山羊相继诞生， 爨前正在进行的种闻核移植动物有塔斯马震甄虎裙鑫鳍豚等。耱闻核移植遣霆唾髯种核 移植，其技术涉及众多基础研究，如种间核质的相互作用以及体细胞核能否在种间卵 胞质态去分化等。本试验培养天由马麓第3 代成纤维细胞( R D F ) ，使其达到1 0 0 汇合 度，并将R D F 与去核的牛卵母细胞进行电融合，构建了马鹿牛核移植异构胚。同时 构建了牛一牛体细胞核移穗同构胚为对照组。
