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1、中国药科大学本科生毕业论文（设计）中国药科大学本 科 毕 业 论 文论文题目英文题目Determination of Imipenem in Human Plasma by HPLC专 业药物分析院 部药学院学 号姓 名指导教师课 题 完成 场 所论文工作时间： 2015 年 3 月 至 2015 年 5 月19HPLC法测定人血浆中亚胺培南的药物浓度目录摘要2前言4第二章 仪器与试药61.1 仪器61.2 药品与试剂6第二章 方法与结果72.1 色谱条件72.2 溶液的配制72.2.1标准溶液的配制72.2.2内标溶液的配制82.2.3稳定剂的配制82.3 血浆样品预处理82.4 方法专属性
2、（考察血浆内源性物质的干扰）82.5 标准曲线及定量下限102.6 回收率试验112.7 精密度试验132.8 稳定性试验14第三章 讨论153.1 亚胺培南的立体异构153.2流动相组分的选择153.3 蛋白沉淀方法的选择163.4 内标化合物的选择163.5 血浆中亚胺培南的稳定性以及稳定剂的选择16第四章 临床应用17第五章 结论17参考文献18致谢20HPLC法测定人血浆中亚胺培南的药物浓度摘要：目的 建立并优化一种快速、简单、可靠、灵敏度高、选择性好的高效液相色谱法来测定人血浆中亚胺培南的浓度，为其临床合理用药和药代动力学研究提供理论依据为其临床合理用药和药代动力学研究提供试验方法。
3、方法 以比阿培南(Biapenem ,BIP)作为内标，以0.5 mol/L(pH6.0)吗啉乙磺酸(4-Morpholineethanesulfonic acid，MES)作为稳定剂，血浆样品预处理采用溶剂解法沉淀蛋白法：乙腈：含药血浆以3:1的体积比一步沉淀蛋白，经高速冷冻离心机离心后，取上清液进样。色谱柱为Alltima HP HILIC 5m(4.6 mm250 mm)；流动相为10mMol10mmol/L乙酸铵：乙腈（40:60）；流速为1.0mL/min；柱温：35 ；检测波长:298nm。结果 亚胺培南在1?50g/mL的浓度范围内线性关系良好，R=0.9997；定量下限为1g/
4、mL；高，中，低，LLOQ浓度点的亚胺培南提取回收率相一致，均在60%左右，并且高，中，低，LLOQ4个浓度点的亚胺培南的提取回收率的RSD均小于15%，具有良好的精密度和重现性；日内、日间RSD 均小于15%。结论 本方法操作简单、快捷、准确、灵敏度高，重复性和选择性良好，适用于临床上对亚胺培南进行血药浓度监测的快速。关键词：高效液相色谱；亚胺培南；血药浓度Determination of Imipenem in Human Plasma by HPLCAbstract: Objective To establish and optimize a fast, simple, reliable
5、, high-sensitivity and good-selectivity High high Performance lLiquid cChromatography method for determining the concentration of imipenem in human plasma for providing a pratical methoda theoretical basis for pharmacokinetic studies and clinical use of imipenemdrugs. Methods: Plasma samples were sp
6、iked with 0.5mol/L(pH6.0) MES as the stabilizer solution, biapenem as the internal standard, plasma protein was precipitated with acetonitrile of 3 times volumn of it, after mixed for 3 mins, they were containing drug plasma followed through centrifuginged with high speed freezing centrifuge and the
7、 supernatant phase was injected. Separation was achieved on an Alltima HP HILIC column 5m(4.6 mm250 mm). The mobile phase was a mixture of 10mMol10mmol/L ammonium acetate and acetonitrile (40:60,v/v), and the pump flow rate was 1.0 mL/min. The column temperature was 35 . The uV UV detection waveleng
8、th was 298 nm. Results: Calibration curves of imipenem showed good linear regression in the range of 1?50 g/mL(R= 0.9997). The lower limit of quantification of imipenem was 1?g/mL. The extraction recovery between the high, medium, low and LLOQ concentration of imipenem in quality control samples was
9、 consistent with each other, and was around 60%. The RSD of the four concentration level QC sample was less than 15% with good precision and reproducibility. And Intra- and inter-day variations were MIC)的情况下才能获得。对于重症患者而言，其病理生理存在特殊性，亚胺培南在其体内药物分布和半衰期等将发生改变，血药浓度个体差异大并且将难以预测。据国外文献报道，在推荐剂量下使用亚胺培南治疗由铜绿假单胞
10、菌或鲍曼不动杆菌引起的肺炎，约有15%30%的患者无法达到最佳治疗效果。而当大剂量给予亚胺培南治疗严重感染如感染性心内膜炎、骨髓炎等，又容易引起惊厥、意识障碍等严重中枢神经系统不良反应，因此，在临床治疗中对亚胺培南进行血药浓度监测是十分必要的，特别是对于一些重症监护室患者，严重感染已成为其主要死亡原因之一，对其进行亚胺培南TDM工作意义重大，有利于降低死亡率，改善临床预后。要实现亚胺培南的临床药物浓度监测，就必需建立简便、快速、灵敏、稳定的定量测定人血中亚胺培南浓度的方法，目前，国内外已有文献对建立人血浆中亚胺培南浓度测定的HPLC法进行了研究和阐述，对本实验的开展具有一定的借鉴和指导意义，但
11、是色谱条件不同，所建立HPLC方法学也将存在差异。考虑到不同实验室实验条件的差异性（主要是色谱条件的差异），再加上针对于重症患者在临床上药动学/药效学研究数据相对的缺乏，经典的药动学参数不适用于重症患者，临床急需这类患者的药动学研究数据作为用药依据，所以很有必要结合本临床实验室实验条件，在相关文献的指导下，建立适合人血浆中亚胺培南浓度测定的HPLC-UV 方法，并利用药代动力学原理将其应用于临床患者的血药浓度监测，以获得优化的疗效和产生低细菌耐药性，提供药动学研究数据用以指导亚胺培南临床个体化用药以确保安全性和有效性。图1.亚胺培南的分子结构 第二章 仪器与试药1.1 仪器岛津高效液相色谱系统
12、（日本Shimadzu公司）：包括LC-20AD泵，SPD-20A紫外检测器，DGU-20A在线脱气单元，CBM-20A系统控制器，CTO-20A柱温箱，SIL-20A自动进样器；十万分之一天平（德国Sartorius公司）；Milli-Q超纯水系统（美国Millipore）；KH5200B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；VIicro CL21R型高速冷冻离心机（Thermo Fisher Scientific公司），IKA GENIUS 3涡旋震荡仪（德国IKA 公司，），PHS-25 pH计（上海精密科学仪器厂），移液枪移液器（德国Eppendorf公司）。1.2 药品与试剂血浆样品（东南大学附属中大医院提供）；乙腈（色谱纯，TEDIA公司）；乙酸铵（色谱纯确定是色谱纯么？，西
