《羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流影响的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流影响的研究（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山西 医药杂志 2 0 1 3年 3月第 4 2卷 第 3期上 半月 S h a n x i Me d J ， Ma r c h 2 0 1 3 ， Vo 1 4 2 ， No 3 t h e F i r s t 2 4 3 著 羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流影响的研究 中国 医科 大学代谢病分子机制 与药物研 究所( 1 1 0 0 0 1 ) 聂宏光 于 同 付 瑜杜 杰 中 国医 科大学附 属第 一医院 崔 滂 【 摘要】 目的探讨 羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路 电流 的影 响及其在肺上皮液体转运 中的作用 。方 法应用尤斯灌流室装置测定 H4 4 1单层细胞的短路电流。由总电流减
2、去阿米洛利可抑制的电流算得阿米洛利 敏感性 电流 ， 以用药前 H4 4 1 单层细胞 的阿米洛利敏感性 电流初始值为 1 0 0 对照 。结果羧 甲基壳 聚糖 能够 剂 量依赖性增加 H4 4 1 单 层细胞的短路 电流 ， 此电流 可被 阿米洛 利明显 抑制 ； 0 1 、 0 2 、 0 3 羧 甲基壳 聚糖处 理 的人 H4 4 1单层细胞阿米洛利敏感性 电流分别增 加至( 1 5 1 士1 6 ) 、 ( 1 9 2 士2 7 ) 、 ( 2 2 2 士3 4 ) ， 与 对照值相 比 P均 O 0 5 。结论羧 甲基 壳聚糖通过增加人肺上皮细胞 阿米洛利 敏感性 电流而增 加肺泡上
3、 皮离 子转运 ， 可 能 参与肺水肿液 的吸收。 【 关键 词】 钠通道 ； 肺 ； 短路 电流 ； 羧 甲基壳 聚糖 Ef f e c t s o f c a r b o xy me t hy l c hi t o s a n o n s ho r t - c i r c u i t c u r r e nt s i n hu ma n l u ng e pi t he l i a l c e l l s NI E Ho ng gu an g yU T o n g，FU ，DU Ji e，CUI Y o n g I n s t i t u t e o f Me t a b o l i c
4、Di s e a s e Re s e a r c h a n d Dr u g De v e l o p me n t ，Ch i n a M e di c al Un i ve r s i t y， She nya ng 1 1 00 01， Ch i na Ab s t r a c t 0b j e c t i v e To e x p l o r e t h e r e l a t i o n s h i p b e t we e n c a r b o x y me t h y l c h i t o s a n a n d s h o r t c i r c u i t c u r
5、 r e n t s i n h u ma n l u n g e p i t h e l i a l c e l l s a n d t o f i n d t h e r o l e o f c a r b o x y me t h y l c h i t o s a n i n l u n g e p i t h e l i a l f l u i d t r a n s p o r t M e t h o d s S h o r t - c i r c u i t c u r r e n t s i n H4 4 1 mo n o l a y e r s we r e me a s u
6、 r e d b y u s s i n g - c h a mb e r t e c h n i q u e Th e a mi l o r i d e - s e n s i t i v e c u r r e n t s we r e g o t b y t h e s u b t r a c t i o n o f a mi l o r i d e - i n h i b i t a b l e c u r r e n t s f r o m t h e t o t a l c u r r e n t s ，a n d t h e o - r i g i n a l v a l u e
7、 o f a m i l o r i d e - s e n s i t i v e c u r r e n t s i n H4 4 1 mo n o l a y e r s b e f o r e d r u g a d m i n i s t r a t i o n wa s s e t a s 1 0 0 c o n - t r o 1 Re s u l t s Ca r b o x y me t h y l c h i t o s a n i n c r e a s e d t h e s h o r t - c i r c u i t c u r r e n t s i n H4
8、4 1 mo n o l a y e r s d o s e - d e p e n d e n t l y ， wh i c h c o u l d b e i n h i b i t e d o b v i o u s l y b y a mi l o r i d e 0 1 c a r b o x y m e t h y l c h i t o s a n c o u l d i n c r e a s e t h e a mi l o r i d e s e n s i - t i r e c u r r e n t s t o( 1 5 1 土 1 6 ) ( P 0 0 5 ) ，
9、wh i c h s h o we d a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e f r o m c o n t r o 1 0 2 O 3 c a r b o x y me t h y l c h i t o s a n c o u l d i n c r e a s e t h e a mi l o r i d e s e n s i t i v e c u r r e n t s t o( 1 9 2 2 7 ) a n d( 2 2 2 土 3 4 ) ，r e s p e c t i v e l y ( P O 0 1 ) ，wh i c
10、 h s h o we d a mu c h s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e f r o m c o n t r o 1 Co n c l u s i o n 0u r o b s e r v a t i o n s d e mo n s t r a t e t h a t c a r b o x y me t h y l c h i t o s a n c a n i n c r e a s e t h e a m i l o r i d e - s e n s i t i v e c u r r e n t s i n h u ma n
11、l u n g e p i t h e l i a l c e l l s a n d a n h a n c e a l v e o l a r i o n t r a n s p o r t ，wh i c h ma y b e i n v o l v e d i n t h e a b s o r p t i o n o f l u n g e d e ma Ke y wo r d s S o d i u m c h a n n e l s ； Lu n g； S h o r t c i r c u i t c u r r e n t ； Ca r b o x y me t h y l
12、c h i t o s a n 壳聚 糖是 由 自然 界 广 泛 存 在 的 甲壳 素 经 过 脱 乙酞化得到的可溶于酸性水溶液的聚氨基葡萄糖 ， 具有 良好的生物吸附性 、 可生物降解性 和多种生物 活性 ， 在食品、 医药及生物 医学工程等诸多领域 的 应用 研究 领 域 均 取 得 重 大 进 展 _ 1 。羧 甲基 壳 聚 糖 是壳 聚糖 经羧 甲基 化 而 得 的一 种 水 溶 性 多 糖 。笔 者 曾应用 膜 片钳 技 术 观 察 到 羧 甲基 壳 聚糖 具 有 抑 制大 鼠单一心室肌细胞三磷酸腺苷( ATP ) 敏感性 钾电流及钠 电流的作用r 2 ， 且对小 鼠在体肺水清 基
13、金 项 目：国 家 自 然 科 学 基 金 面 上 项 目 ( 3 0 9 7 1 1 8 1 ， 8 1 2 7 0 0 9 8 ) 除率无明显抑制作 用_ 4 。本研究探讨 了羧 甲基壳 聚糖 与人 肺上 皮 细胞 ( NC I ) 短 路 电流 之 间 的关 系 ， 旨在 阐明前者在人肺上皮液体转运 中的可能作用 。 1材料 与方 法 1 1 材 料 ： 人 N C I H4 4 1( H4 4 1 ) 细 胞 株 购 自 Ame r i c a n T y p e C u l t u r e C o l l e c t i o n ( AT C C ) 公 司 ， 用 添加 1 O 胎
14、牛 血 清和抗生素 的 R P MI 培养基进行培养 。阿米洛利购 于美 国 S i g ma 公司 ， 羧 甲基壳聚糖 由青 岛海洋药物研究所提 供。 1 2 H4 4 1 细胞株培养 ： 取 H4 4 1细胞株 接种 于 7 5 c m 的 培养瓶 中 ， 在 3 7、 含有 5 C O +9 5 O 的湿化 气体 中 孵育生 长。将 细胞以约 5 1 0 c m 的密度 种于 Tr a n s we l l 小室 中， 隔天换液 1 次 ， 培养 7 1 0 d使跨 间皮 阻抗达 5 0 0 M Q 以上 。 生堕垦垫童毒 2 o 1 3 年 3月第4 2 卷第 3 期上半月 S h a
15、 n x i Me d J ， Ma r c h 2 0 1 3 ， V o 1 4 2 ， N 0 3 t h e F i r s t 1 3 H4 4 1细胞株单层细胞短路电流检测及羧 甲基 壳聚糖 的干预 ： 按相关文献方法记 录 H4 4 1单层细胞 短路 电流 。 将 H4 4 1 单 层细胞置于两侧灌 以生理 盐溶液 的尤斯灌 流室 中， 渗透 压在 2 9 0 3 0 0 mmo l L 。单层 细胞两 侧持 续充 以 9 5 0 z +5 C Oz 混 合气 体 ， 所用 溶液 新鲜 配 置 ， 预热 至 3 7。跨上皮短路电流采用充 以 3 mo l L KC 1 ， 4 琼
16、脂糖 盐桥的 Ag A g C 1 电极测定 H4 4 1单层细胞 短路至 0 mV， 每 1 0 S给予 1 0 mV脉 冲刺激 1次 ， 每次 1 S， 监测跨上皮阻 抗和短路 电流 。短路 电 流和阻抗 达 到平稳 时， 将 不 同浓 度 ( O 1 、 0 2 、 0 3 ) 羧 甲基 壳聚 糖或 上皮钠 通道 特异 性 抑制剂阿米洛利 加入 H 4 4 1单层 细胞 的顶 膜侧 ， 持 续记 录 短路 电流和阻抗直至达到新 的平衡 。由总电流减去 阿米洛 利可抑制的电流算得阿米洛利敏感性电流， 以用药前 H4 4 1 单层细胞 的阿米洛利敏感性 电流初始值为 1 0 0 对照 。 1 4 统计学处理 ： 计量数据 以 S 表示 ， 均数 比较采用 F 检验 。P 0 0 5 为差异具有统计
