母乳抗肿瘤详解

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1、母乳中的HAMLET 对肿瘤和细菌的抑制 六安人乳库 2012年3月 HAMLET：人-乳白蛋白分子部分展开后与油酸结 合形成的复合物 HAMLET在体外能诱导各类癌细胞凋亡，包括肺癌、咽喉癌 、肾癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌和卵巢癌，以及黑色素 瘤、脑胶质母细胞瘤和白血病。 但是对正常细胞没有任何毒 性。 形成HAMLET需要以下条件：在母乳喂养儿童的胃内，在低 pH值环境中打开蛋白质分子释放出钙，以及对酸敏感的脂肪 酶水解母乳中的甘油三酸酯释放出油酸。 摘自HAMLET Kills Tumor Cells by Apoptosis Structure, Cellular Mechanism

2、s, and Therapy The Journal of Nutrition 2005, 135: 12991303 瑞典 兰德大学；挪威 Haukeland大学医院 HAMLET的制备方法 提纯：人乳乳清液用硫酸铵沉淀，析出乳白蛋白，然后进行苯基-琼脂 糖和体积排阻层析（层析柱为琼脂糖G-50），蛋白液的纯度通过SDS -PAGE、琼脂糖凝胶电泳和光谱技术进行分析 脱钙：将25mg提纯得到的- 乳白蛋白溶于1.8mM Tris-HCl溶液中， 加入3.5mM的EDTA以移除Ca离子，蛋白分子构象的变化通过近紫外 光普和ANS（8-苯胺基-1-萘磺酸铵盐）荧光光谱检测 离子交换层析：将10m

3、g亚油酸溶于0.5ml 99.5%的乙醇中，超声波处 理3分钟，之后加入10ml 10mM Tris-HCl，注入用DEAE-Trisacryl M （一种层析柱填料，法国BioSepra公司）装填的层析柱（14 cm1.6 cm)，连接到生物逻辑层析系统（BioRad公司）中，用NaCl进行梯度 洗脱（洗脱液A：10mM Tris-HCl，pH8.5；洗脱液B：含有1M NaCl 的洗脱液A）。蛋白洗脱液透析脱盐，至少更换4次蒸馏水。最后将透 析液冻干，得到-乳白蛋白 摘自Conversion of a-lactalbumin to a protein inducing apoptosis

4、PNAS 2000, 97(8): 4221-4226 瑞典兰德大学 人乳对肺部癌细胞的抑制（体外） 癌细胞存活率 （染色法1） 癌细胞存活率 （染色法2） 对照组92100 人乳1#20 人乳2#21 人乳3#42 牛乳10064 人- 乳白蛋白9280 牛- 乳白蛋白9382 人溶菌酶8769 鸡溶菌酶8675 人乳铁蛋白98 人MAL00 摘自Apoptosis induced by a human milk protein, Proc. Natl. Acad. Sci., 1995, 92: 8064-8068 瑞典 兰德大学；卡罗林斯卡学院 MAL： 用离子 交换柱处理过 的多聚体-

5、 乳 白蛋白 可见：人乳及 结合了钙离子 的多聚体- 乳 白蛋白具有明 显的抑制癌细 胞生长的功能 MDCK（一种肾癌细胞株）暴露于人乳中产生的凋亡（人乳1:10稀释， 24小时） A 对照样 B 实验样 人乳对肺部癌细胞的抑制（体外） HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 皮肤乳头状瘤是作为研究 人体环境（0.9%NaCl）中 HAMLET 功效的第一个模 型。 摘自HAMLET Kills Tumor Cells by Apoptosis: Structure, Cellular Mechanisms, and Therapy Journal of Nutrition. 2005, 135:

6、12991303 瑞典 兰德大学； 挪威 Haukeland大学医院 HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 摘自Treatment of skin papillomas with topical alpha-lactalbumin-oleic acid ，The New England journal of medicine 2004, 350(26): 2663-2672 瑞典 兰德大学 图中第1列（A、D、G） 为3位患者治疗前的病灶 ； 图中第2列（B、E、H） 为3位患者接受HAMLET 治疗后3周时的病灶； 图中第3列（ C、F、I） 为3位患者接受HAMLET 治疗后2年随访时的病灶

7、。 患者1的病灶基本上完全 消失；患者2和3则减少了 75%。 HAMLE对膀胱癌的抑制 a图：采集9个病人在滴注HAMLET前 的尿液和滴注后两小时的尿液，苏木 紫和伊红检测肿瘤细胞数。发现进行 HAMLET滴注后的病人尿液中肿瘤细 胞数均显著高于滴注前。 b图：分别滴注-乳白蛋白， PBS ,NaCl，同样的方法对比 滴注前后的尿液，滴注前后无 明显差异。 摘自Bladder cancers respond to intravesical instillation of (HAMLET human -lactalbumin made lethal to tumor cells) Inter

8、national Journal of Cancer 2007, 121: 1352-1359 瑞典兰德大学 HAMLE对膀胱癌的抑制 c图：台盼蓝染色经 HAMLET滴注后的 病人尿液，镜检能 发现存在有大量的 死亡或凋亡细胞。 HAMLE对膀胱癌的抑制 a图：第一排是P2,P5,P9这三个人的滴注前的尿液离心后涂片，第二排是这三个人 的滴注后的尿液离心后图片。都用苏木紫-伊红和TUNEL染色。 TUNEL是能特异性的对凋亡细胞进行染色的试剂，在荧光显微镜下显示出荧光。 从图片可以看出，滴注前病人的尿液里总细胞数量少，能被TUNEL染色的细胞更 少。而滴注了HAMLET后的病人，尿液中会存在

9、有大量的凋亡细胞。 HAMLET对膀胱癌的抑制 内镜摄影图：左边的四 幅彩图是分别来自四个 病人的HAMLET滴注前 的肿瘤，右边的四幅彩 图是HAMLET滴注后的 肿瘤，黑白图是肿瘤形 状的示意图。金属圈直 径均为5mm。 可以看见滴注后肿瘤尺 寸变小。 HAMLE对膀胱癌的抑制 a图：手术后对病人切除的肿瘤组 织进行TUNEL染色，黑白图片为 明场下的照片，荧光图为TUNEL 染色后的照片。 可见经过HAMLET滴注，肿瘤组 织内有大量的细胞虽然没有脱落 下来，但是正在被诱导凋亡。 b图 上面四幅照片是对 手术中切除的正常组织 的组织切片进行 TUNNEL染色的图，下 面四幅照片为明场下的

10、 组织切片图。 可见正常的组织虽然也 经过了HAMLET滴注， 但是几乎没有细胞凋亡 现象。就证明了 HAMLET复合体能特异 性地诱导膀胱癌细胞的 凋亡，而对正常组织没 有毒性。 HAMLET对胶质母瘤细胞的抑制 对实验大鼠进行TUNEL分析后 显示：大鼠脑内肿瘤出现大面 积凋亡，但周边组织未显示出 TUNEK染色。 此外，HAMLET没有侵害正常 的脑组织，也没有产生任何的 神经症状。HAMLET具有选择 性地诱发恶性肿瘤凋亡的能力 。 HAMLET对肿瘤细胞的抑制 摘自Structure and function of human -lactalbumin made lethal to

11、tumor cells (HAMLET)-type complexes FEBS Journal 2010, 277: 4614- 4625 瑞典兰德大学；爱尔兰圣三一学院；瑞典Umea大学；新加坡A*STAR HAMLET侵入肿瘤细胞的过程。最初结合到膜细胞上，随后转运进 细胞中。细胞的完整性维持到180分钟，最终充满了HAMLET。 母乳抑制白血病细胞和肺炎链球菌 STRPN：肺炎链球菌 Jurkat：一种白血病的细胞 HAMLET对白血 病细胞和肺炎链 球菌的杀灭作用 远远强于-乳白 蛋白 HAMLET或-乳白蛋白的浓度 （g/ml ） 摘自Apoptosis-Like Death in Bacteria Induced by HAMLET, a Human Milk Lipid-Protein Complex PLoS ONE 2011, 6(3): 1-12 美国纽约州立大学；纽约州生物信息学与生命科学卓越中心（布法罗 ）；瑞典兰德大学；新加坡A*STAR 母乳抑制白血病细胞和肺炎链球菌 与HAMLET分别共同 培养6小时和1小时后 ，癌细胞和肺炎链球 菌相继出现缩小和菌 体解体，最终死亡 母乳抑制流感嗜血杆菌 HAMLET对流感 嗜血杆菌的杀灭 作用远远强于- 乳白蛋白