《肾上腺素能受体激动剂引起星形胶质细胞和小鼠脑内erk12磷酸化的信号传导途径》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肾上腺素能受体激动剂引起星形胶质细胞和小鼠脑内erk12磷酸化的信号传导途径（116页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同 工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： ：耋兰型刍日期：塑丛：Z 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究 生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医
2、科大学。本人保 证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科 大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学 校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密 内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 目录 l I l l1 11 1 1 1 1 l 4 2 9 论文一0 c 2 肾上腺素能受体激动剂右旋美托咪啶引起小鼠脑内E G F R 间接激活 一、摘要 中文论著摘要2 英文论著摘要5 二、英文缩略语10 三、论文 自订言“1 11
3、刖舌“ 研究目的l5 材料与方法1 6 实验结果2 3 讨论一2 9 结论一31 四、本研究创新性的自我评价3 2 五、参考文献3 3 论文二异丙肾上腺素引起星形胶质细胞E R K l 2 磷酸化的信号传导途径具有浓度 依赖性 一、摘要 中文论著摘要4 l 英文论著摘要4 6 二、英文缩略语5 2 三、论文 前言5 3日U 舌“5 3 研究目的5 8 材料与方法5 9 实验结果6 5 讨论81 结论一8 4 四、本研究创新性的自我评价8 5 五、参考文献8 6 六、附录 综述9 5 参考文献10 6 在学期间科研成绩1 1 1 致谢1 1 2 个人简介1 1 3 论文一 仪2 肾上腺素能受体激
4、动剂右旋美托咪啶引起小鼠脑内 E G F R 间接激活 中文论著摘要 0 【2 肾上腺素能受体激动剂右旋美托咪啶引起小鼠脑内 E G F R 间接激活 刖罱 E G F R f 白J 接激活包括两个阶段：第一阶段，G i 蛋白同源三聚体脚亚单位激活， 通过激活蛋白激酶C ( P K C ) 和细胞质内S r c 酪氨酸激酶，使金属蛋白酶介导的E G F R 配体从跨膜前体外功能区域脱落释放。第二阶段，脱落释放的上皮生长因子受体 ( E G F R ) 配体主要是H B E G F ，激活同一细胞或相邻细胞上的E G F R ，如E G F R 酪 氨酸激酶( R T K ) 磷酸化，从而导致E
5、 R K 磷酸化。 右旋美托咪啶是2 肾上腺素能受体激动剂，它与仪2 肾上腺素能受体特异性结 合力是与仅1 = l 肾上腺素能受体结合的1 6 0 0 倍，也比可乐定高出几倍，能激活c c 2 。肾上 腺素能受体的三个亚型( 啦A 、o t 2 B 、O c 2 c 受体) 。浓度在2 5 5 0 0n M 的右旋美托咪 啶可以引起小鼠星形胶质细胞E R K l 2 磷酸化，也能引起E G F R 磷酸化，E G F R 酪氨 酸激酶抑f 1 I 弃：U A G l 4 7 8 、Z n 2 + 依赖性会属蛋白酶抑制剂G M 6 0 0 1 和H B E G F 拮抗剂 肝素能抑制其引起的E
6、G F R 和E I 水l 2 磷酸化，表明它们都参与间接激活途径。在小 脑颗粒神经元右旋美托咪啶不能引起E R K l 2 磷酸化，也无钙离子浓度升高，表明 在谷氨酸能神经元缺少突触后仅2 肾上腺素能受体表达。然而用右旋美托咪啶处理 星形胶质细胞，收集其培养液能引起神经元E R K l 2 磷酸化，说明此过程有E G F R 配 体释放。在体内H B E G F O 邑促进小脑颗粒神经母细胞增殖，E G F 能引起培养的小脑 颗粒神经元E R K 磷酸化升高，说明小脑颗粒神经元上存在E G F R 的表达。 在培养的星形胶质细胞右旋美托咪啶能引起E G F R 间接激活，但在整体脑内右 旋美
7、托咪啶是否具有同样作用。我们将研究：1 ) 腹腔注射右旋美托咪啶是否引起 小鼠脑内E G F R 和E R K l 2 磷酸化。2 ) E G F R 和E R K l 2 磷酸化是否被E G F R 酪氨酸激 酶抑制剂A G l 4 7 8 、Z n 2 + 依赖性金属蛋白酶抑制剂G M 6 0 0 l 和H B E G F 拮抗剂肝素 2 所抑制。 方法 成年雄性C D 1 小鼠，腹腔注射右旋美托咪啶，7m i n 、1 5m i n 或3 0m i n 断头， 取出脑组织在裂解液中匀浆。侧脑室注射A G l 4 7 8 、G M 6 0 0 1 或肝素其中一种抑制 剂后，腹腔注射右旋美托
8、咪啶1 5m i n 后断头，脑组织在裂解液中匀浆。匀浆后的 样品进行免疫凝胶电泳和W e s t e m 印迹法半定量检测E R K l 2 磷酸化和E G F R 磷酸 化，以及E G F R 磷酸化位点。使用S P S S l 0 0 软件进行统计学分析，多组资料用 o n e w a yA N O V A 方法进行比较，P p c r r e s t m 2 T B P ( b - i ) B r a i nA s t r o c y t e ss i R N A ( + ) s i R N A ( - ) 3 J B - a r r m t i n Is i R N A ( - )
9、I S ol S O C o n t r o l 1 0 0 n M1U M p 一- E R 。K - ：=p I E R K 2 专_ + - - 2 O B r a i n A s t r o c y t e ss i l V A ( + ) 虹R N A ( ) 1 3 - a r r e s t m ls i R N A ( + )2 I S Ol S O C o n t r o l 1 0 0 n M 1 州 - - - _ I E R K i _ 一 _ - 一- _ 一_ E R K 2 _ - _ I - 一_ _ # 机。J ( b - i i i ) 1 3 - a r
10、r e s t i n 2s i R N A ( - ) I S OI S 0 C o n t r o l 1 0 0 n M 1 t a r t 呻隅：二=暑p-ERK2 _ ，- 1 3 - a r r e s t i n 2s i R N A ( + ) I S OI S o C o n l t o i 1 0 0 n M1 州 _ 确蝴- _ 一_ 一 E R K t _ _ - - _ - E R K 2 _ _ _ - ( o - 0 s i R N A ( - ) 1 0 0 1 1 M1 州 1 0 0 n M 1t u f t 3 - a r r e s t i n ls i
11、 R N A ( )p - a r r e s t i n Is i R N A ( + ) C o n l r o I I S OI S OC o n t r o lI S O I S O 1 0 0 n M1t t M 1 0 0r i M1t t M 1 3 - a r r e s t i n 2s i R N A ( - )I B - a r r e s t t n 2s i R N A ( + ) h m T e s t i n ls i R N A ( + ) I - a r r e s t i n 2s i R N A ( + ) I S OI S O I S O I S OI
12、S O 藏广 竺删lu M 配1 I 刍，E 。G Fc 删l 州妇I 矗E 研c 伽删l 州I C II 击盼F 黔 + ”， t p - E R K l 一_ - ”- 一蚋一_ 一”- _ 呻隅玉一一- 一_ 一- 蝴一删- 一，确 勰 嘲 E R K I E R K 2 呻= 嚣露餮蜃= 嚣= 2 霉拳嚣墨= = 2 O I S OI C I 1 州 7 1 I S 0E ( 谓 + l C I l O 2 l O 薹避)n宙-do薯名 茁山5趸呷厶Jo巷g u_笛岫oo宙d，o o 薯霞 图9 ，在星形胶质细胞，1 0 0n M 异丙。肾上腺素引起E R K l 2 1 3 - a
13、r r e s t i n 2 参与。( a ) 1 3 - a r r e s t i n l 或p a r r e s t i n 2 在成年小鼠脑内和星形胶质细胞、星 形胶质细胞上无特异性s i R N A s i R N A ( ) 】( C o n t r 0 1 ) 和有特异性p a r r e s t i n l 或 1 3 - a r r e s t i n 2 的s i R N A 【s i R N A ( + ) 】敲除3 天的表达。1 3 - a r r e s t i n l 的P C R 产物为6 6b p ， 1 3 - a r r e s t i n 2 的P C R 产物为1 0 7b p ，T B P 的P C R 产物
