《胰岛素通过mir208介导的p21下调刺激血管平滑肌细胞增殖的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胰岛素通过mir208介导的p21下调刺激血管平滑肌细胞增殖的实验研究（116页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 博士学位论文 胰岛素通过 miR-208 介导的 p21 下调刺激血管平滑肌 细胞增殖的实验研究 张晔 张晔 指导教师 王旭开 教授 第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科，400042 申请学位级别 博士科学学位 专业名称内科学(心血管) 论文提交日期 2011 年 11 月 论文答辩日期2011 年 11 月 学位授予单位和日期 第三军医大学 2011 年 月 答 辩 委 员 会 主 席 评 阅 人 二 一 一 年 十 一 月 分类号分类号 密密 级级 公公 开开 学学 号号 2008183 第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是
2、我本人在 导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别 加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料， 与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 日期： 第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学
3、校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查 阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外） ，可 以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 目 录 英文缩写一览表.1 英文摘要.3 中文摘摘要.5 论文正文 胰岛素通过 miR- 208 介导的 p21 下调刺激血管平滑肌细胞增殖的实验研究8 前 言 8 第一部分 MiR- 208 参与高浓度胰岛素刺激血管平滑肌细胞增殖作用.12 前 言.12 材料和方法.12 结 果.30 讨 论.38 小 结.42 第二部分 P21 是 miR- 208 的靶蛋白 43 前
4、言.43 材料和方法.43 结 果.47 讨 论.51 小 结.53 第三部分 高浓度胰岛素通过抑制 P21 介导血管平滑肌细胞增殖 54 前 言.54 材料与方法.54 结 果.59 讨 论.61 小 结.64 全文结论.65 致 谢.68 参考文献.69 文献综述一 MicroRNA 与心血管疾病74 参考文献79 文献综述二 Role of DNA Methylation in Cardiovascular Disease87 Reference101 在读期间发表论文.112 第三军医大学博士学位论文 1 英文缩写一览表 英文缩写 英文全称 中文全称 bp Base pair 碱基对
5、BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 DAB Diamionbenzidine 二甲基联苯胺 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DTT dithiothreitol 二硫苏糖醇 EB Eththidium bromide 溴化乙锭 EDTA Ethylendiaminotertracetic 乙二胺四乙酸 ERK Extracellular signal- regulated kinase 细胞外信号调节激酶 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 FCM flow cytometry 流式细胞仪 FITC Fluoresce
6、in isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 GAPDH Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase h hour 小时 HE hematoxylin and eosin 苏木精和伊红 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化酶 IF immunofluorescence 免疫荧光 IHC immunohistochemistry 免疫组织化学 Ins Insulin 胰岛素 KD Kilo- doltons 千道尔顿 M Mole/liter 摩尔/升 MAPK Mitogen- activated protein kinase
7、 丝裂原活化蛋白激酶 MHC myosin heavy chain 肌球蛋白重链 Min Minute 分钟 MiRNA MicroRNA 微小 RNA MiR- 208 MicroRNA- 208 微小 RNA208 MTT 3- (4,5- dimethylthiazol- 2- yl)- 2,5- diphenyl- 2 H- tetrazoliumbromide 3- (4,5- 二甲基噻唑- 2)- 2,5- 二 苯基四氮唑嗅盐 第三军医大学博士学位论文 2 NC Nitrocellulose 硝酸纤维素 PAGE Polyacrylamidegelelectrophoresis 聚
8、丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase- chain- reaction 多聚酶链式反应 PFA Polyformaldehydum 多聚甲醛 PI propidium iodide 溴化碘 PMSF Phenylmenthylsulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 RISC RNAinduced silencing complex RNA 介导沉默复合物 RNA Ribonucleic acid 核糖核酸 RT Reverse transcription 逆转录反应 RT- PCR reverse t
9、ranscription PCR 反转录聚合酶链反应 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 Sip21 Small interference RNA of p21 p21 小干扰 RNA SP streptavidin peroxidase 链霉菌抗生物素- 过氧化物酶 THRAP Thyroid Hormone Receptor Associated Protein 甲状腺激素受体相关蛋白 Tris tris(hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 Tris- HCL Trishydrochloric acid buffer T
10、ris 盐酸缓冲液 3UTR 3untranslated region 3非翻译区 VSMC vascular smooth mucle cell 血管平滑肌细胞 第三军医大学博士学位论文 3 Insulin promotes vascular smooth muscle cell proliferation via microRNA-208-mediated downregulation of p21 Abstract Background Abnormal vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation is considered a ke
11、y risk factor in many cardiovascular diseases, including atherosclerosis and hypertension 1. There is now convincing evidence that humoral factors, including insulin, regulate both normal vessel homeostasis and abnormal arterial growth that occurs in vascular disease 2,3. Although the growth- promot
12、ing- effect of insulin on several types of cultured VSMCs has been demonstrated 4,5, the underlying mechanism remains vague. MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of gene expression, which are involved in many physiological cellular pathways, including cell growth, differentiation, and apoptosis 6,7
13、. MiRNAs are initially transcribed by RNA polymerase II (Pol II) in the nucleus to form large pri- miRNA transcripts. The pri- miRNAs are processed by the RNase III enzymes, Drosha and Dicer, to generate 18- to 24- nucleotide mature miRNAs. The mature miRNAs regulate gene expression in one of two wa
14、ys that depend on the degree of complementarity between the miRNA and its target. MiRNAs that bind to 3UTR of mRNA with imperfect complementarity block protein translation. In contrast, miRNAs that bind to mRNA with perfect complementarity induce targeted mRNA cleavage. Currently, more than 400 miRN
15、As have been cloned and sequenced in human, and the estimated number of miRNA genes is more than 1000 in the human genome. As a group, miRNAs are estimated to regulate 30% of the genes of the human genome 8. The role of miRNAs is well- established in the genesis of malignancy, given that cell dediff
16、erentiation, growth, and apoptosis are important cellular events in the development of cancer. There is increasing evidence that miRNAs are expressed in the cardiovascular system and participate in many important biological functions. Because abnormal VSMC proliferation shares similar cellular events and molecular mechanisms with cancer 9, we 第三军医大学博士学位论文 4 hypothesized that endogenous miRNAs may be involved in insulin- i
